骨形态发生蛋白7改善糖代谢的作用及其机制

目的 探索骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein 7,BMP7)对2型糖尿病小鼠糖代谢的影响及其机制.方法 将8周龄雄性C57BL/6小鼠,采用小剂量链脲佐菌素注射联合高脂喂养建立2型糖尿病小鼠模型.将建模成功的小鼠分为4组(n=20)∶2型糖尿病模型组,PBS对照组(PBS腹腔注射),BMP7低剂量组(BMP7,100 μg/kg,隔日腹腔注射),BMP7高剂量组(BMP7,200 μg/kg,隔日腹腔注射).4周后,分别检测血糖、血总胆固醇、甘油三酯、血清胰岛素水平、体质量的变化,并计算胰岛素分泌指数HOMA-β和胰岛素抵抗指数HOMA-IR.取小鼠胰腺,Western blot检测蛋白激酶D1(protein kinase D1,PKD1)及磷酸化PKD1的表达变化.结果 与2型糖尿病模型组和PBS对照组相比,BMP7高剂量组和低剂量组的血糖、甘油三酯均明显降低(P＜0.05),而血清胰岛素水平、HOMA-β均显著升高(P＜0.05).BMP7低剂量组和BMP7高剂量组的体质量均低于对照组(P＜0.05),BMP7高剂量组的HOMA-IR低于对照组(P＜0.05).Western blot检测发现BMP7处理组的PKD1蛋白表达量与对照组相比差异均无统计学意义(P＞0.05),但磷酸化PKD1水平均明显升高(P＜0.05).结论 BMP7可以促进2型糖尿病小鼠的胰岛素分泌和改善其胰岛素敏感性,从而降低血糖,其改善胰岛素分泌作用可能与增加PKD1磷酸化有关.     

5-氨基乙酰丙酸介导继发性甲状旁腺功能亢进症大鼠甲状旁腺荧光特性的研究

目的研究5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinic acid,5-ALA)定位继发性甲状旁腺功能亢进症(secondaryhyperparathyroidism,SHPT)大鼠甲状旁腺组织方法的可行性,并观察其代谢产物原卟啉Ⅸ(protoporphyrinⅨ,PpⅨ)在甲状旁腺组织积聚的动态变化。方法 16只6～8周龄健康雌性SD大鼠,体质量180～200 g,分为手术组(5/6肾切除+高磷饲养,n=12)和假手术组(正常磷饲养,n=4),28 d后,2组大鼠腹腔注射500 mg/kg 5-ALA,405 nm蓝光探测2组大鼠颈部甲状腺区域,应用微型光纤光谱仪检测甲状腺、甲状旁腺组织内PpⅨ在不同时间的荧光强度、波长,并取其行组织学检查。结果在注射5-ALA后,2组大鼠甲状旁腺组织均可用肉眼观察,大部分位于甲状腺外侧。手术组在0.5～4 h均可见甲状旁腺组织显红色荧光,假手术组在1～3 h均可见红色荧光,其中2组荧光强度在2 h达到高峰,手术组峰值显著高于假手术组(P<0.05)。在注入5-ALA后2 h,手术组和假手术组内甲状旁腺组织荧光强度均高于甲状腺组织10倍。组织学检查确认红色荧光组织均为增生的甲状旁腺细胞。结论 5-ALA介导SHPT甲状旁腺组织的高荧光强度的特点为术中辨别增生与正常的甲状旁腺组织提供了重要的依据。     

继发性甲状旁腺功能亢进症大鼠Gcm2的表达

目的研究继发性甲状旁腺功能亢进症大鼠在病程中Gcm2的表达变化以及与甲状旁腺细胞增殖变化之间的关系。方法5/6肾切除结合高磷饲养建立大鼠继发性甲状旁腺功能亢进症模型,第1、4、7、14、21、28天取甲状旁腺和血清标本,ELISA检测血清i-PTH浓度变化,Real-time PCR和Western blot检测Gcm2mRNA和蛋白表达的变化,免疫组化观察不同时间点甲状旁腺细胞的增殖变化情况。结果与假手术对照组比较,造模后模型组i-PTH显著升高(P<0.01);模型组Gcm2mRNA的表达随时间进展升高趋势逐渐明显,在第1、4、7天仅缓慢升高,无统计学差异(P>0.05),第14天始升高趋势明显(P<0.01),于第21天升高至最高点,为假手术对照组的9.92倍(P<0.01),第28天表达量稍有下降(P<0.01);模型组Gcm2的蛋白表达呈先下调后升高的趋势,第1天先有所下调,第4天进行性升高,第7天稍有波动,第14天后一直处于显著升高的表达状态,于第21天到达最高点,第28天稍有回落(P<0.01);模型组甲状旁腺细胞增殖在第1天便显著增强(P<0.01),第4天达最高(P<0.01),之后开始回落,至第14天回落到与假手术对照组相近的水平,一直到实验结束。结论在继发性甲状旁腺功能亢进症发病过程中,Gcm2的表达变化和甲状旁腺细胞增殖在时间进程上有相反的趋势,两者的交互作用可能是导致甲状旁腺功能亢进的部分原因。     

5-氨基乙酰丙酸介导光动力治疗甲状旁腺功能亢进的前期研究

目的研究5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinic acid,5-ALA)介导光动力治疗(photodynamic therapy,PDT)对正常大鼠甲状旁腺及其周围组织形态和功能的影响,探索采用该法治疗甲状旁腺功能亢进的可行性。方法 64只6~8周龄健康雌性SD大鼠,体质量150~200 g,按光敏剂剂量(0、100、300、500)mg/kg平均分为4个组,每组按光动力照射时间(0、10、15、20)min再分为4个亚组,共16个处理组(n=4),手术暴露甲状旁腺及其周围组织后行光动力照射,ELISA检测照射前后血清甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)、三碘甲状腺原氨酸(triiodothyronine,T3)、甲状腺素(thyroxine,T4)、促甲状腺素(thyroid-stimulating hormone,TSH)浓度,并观察照射前后各组织形态学上的变化。结果单独使用光敏剂或光照对甲状旁腺功能无影响,光动力治疗短时间内即可造成甲状旁腺功能的减低,而对甲状腺功能无显著影响,随着光敏剂浓度和光照时间的增加,其对甲状旁腺功能的破坏作用增强。当光敏剂浓度为500 mg/kg,光照时间为10、15、20 min时,血清PTH值分别为(75.24±6.06)ng/L、(47.23±5.18)ng/L、(39.10±4.03)ng/L,与对照组(0 mg/kg,0 min)(128.19±4.75)ng/L相比,具有显著性差异(P<0.05)。组织学检查显示,经过光动力照射后的甲状旁腺组织与正常组比较,腺体包膜仍比较完整,其内纤维结缔组织增生明显,主细胞数明显减少,代之以大量空泡状的脂肪细胞,而甲状腺及其周围的肌肉组织在形态学上未见明显改变。结论以5-ALA为光敏剂介导的光动力疗法可对大鼠甲状旁腺组织及其功能产生特异性破坏作用。