阴离子交换树脂对人参皂苷的吸附/洗脱特性考察及LC-MS分析

目的 比较不同阴离子交换树脂对人参总皂苷的吸附和洗脱性能，阐明其吸附/洗脱机制，建立适合人参总皂苷纯化的阴离子交换树脂方法。方法 以比吸附量、比洗脱量、洗脱率和回收率为指标，考察5种大孔树脂（D301，D315，D312，D330，D201）的吸附/洗脱特性。利用拟一级、拟二级动力学模型，以及Langmuir和Freundlich等温吸附模型对优选树脂和D101型大孔树脂的吸附动力学和热力学过程进行研究，阐明阴离子交换树脂与常规大孔树脂之间的吸附机制差异。通过动态吸附/洗脱试验优选阴离子交换树脂柱色谱纯化工艺参数并进行验证试验，通过液质联用法（LC-MS）对纯化前后9种单体人参皂苷类成分进行定性和定量分析。结果 D301型阴离子交换树脂明显优于其他4种阴离子交换树脂，最佳工艺条件为上样液pH 8，上样体积2 BV，上样流速4 BV·h^-1，用水和20%乙醇各3 BV洗脱杂质，加80%乙醇8 BV洗脱，洗脱流速4 BV·h^-1。经D301型树脂纯化后，9种单体人参皂苷类成分的富集系数均得到了不同程度的提高，整体富集系数达5.3，整体回收率80.9%，人参总皂苷纯度也从粗提物的17.07%提高至91.19%。结论 D301型阴离子交换树脂纯化人参总皂苷的方法简便可行，实现了从人参药材中一维柱色谱富集高纯度人参总皂苷的目的。     

旋覆花配方颗粒提取工艺研究

目的：优选旋覆花中主要有效成分的最佳提取工艺。方法采用正交试验法,以提取次数、提取时间、加水量为考察因素、以绿原酸含量为指标,用 HPLC 法监测提取过程中绿原酸的含量变化,以确定水煎煮的最佳工艺条件。结果水煎煮最佳工艺为：10倍药材量的水煎煮、提取2次,每次1 h。结论该方法操作简便、准确,具有很好的重复性和稳定性,适用于旋覆花配方颗粒的工业化生产。     

灵芝菌固体发酵三七药渣工艺研究

目的：优化灵芝菌固体发酵三七药渣的发酵工艺,缩短发酵周期,为三七药渣再利用研究提供新的思路。方法运用单因素试验法,以菌蕾形成时间为考察指标,筛选出最佳发酵条件。结果灵芝菌发酵三七药渣最优发酵工艺为：三七药渣粉末（过10目筛）,加入1.5％生长因子CaCO3,加适量水（使含水量达60％）,接种量（V/V）＝1：1~1.5：1,在（28±1）℃下,避光培养。结论灵芝菌固体发酵三七药渣的工艺稳定、可靠、高效、产物得率高,为三七药渣的进一步研究和开发利用奠定了基础。     

三七发酵产物总皂苷指纹图谱

目的:建立三七发酵产物总皂苷的HPLC指纹图谱,为三七发酵产物的质量评价提供参考。方法:收集10批三七发酵产物,采用HPLC建立三七发酵产物指纹图谱方法,并根据相对保留值α和相对面积Sr对指纹图谱进行分析对比研究,考察指标成分人参皂苷Rg_1,Re,Rb_1,Rg_2,Rh_1,Rd,Rg_3和CK的变化。结果:通过对10批次三七发酵产物总皂苷进行指纹图谱分析,建立了HPLC指纹图谱共有模式,其相似度均0.98,标定了14个共有峰,并对其中8个峰对应的皂苷进行确认。结论:该文为三七发酵产物的成分分析提供了一个快速、简便的方法,鉴定了主要的皂苷类成分变化,并通过三七发酵产物指纹图谱的建立为全面控制三七发酵产物的质量奠定基础。     

阴离子交换树脂纯化三七发酵产物中总皂苷的工艺优选

目的:为了得到高纯度的三七总皂苷,利用阴离子交换树脂对三七发酵产物进行纯化,优选纯化工艺参数。方法:选用三七发酵产物为研究对象,以总皂苷含量或纯度为指标,采用单因素试验考察树脂型号、径高比、上样液质量浓度、上样流速、吸附时间、洗脱剂种类、洗脱液用量、洗脱流速、上样液p H等条件对洗脱液中总皂苷含量的影响。结果:选取D301型阴离子树脂,径高比1∶8.3,上样液质量浓度0.25 g·m L~(-1),树脂干重-生药量(1∶0.64),上样流速2 BV·h~(-1),上样液p H 9,吸附时间15 min,洗脱流速2 BV·h~(-1),加水5 BV洗脱杂质,加60%乙醇4 BV对目标成分进行洗脱。三七发酵产物中总皂苷纯度90%。结论:利用阴离子交换树脂纯化三七发酵产物中总皂苷的方法简便可行,纯化效果好,能满足于工业生产的要求,为该有效部位的新药及相关产品开发提供参考。     

青霉菌固体发酵对三七药材活性成分的影响

目的：对三七药材经青霉菌发酵之后的主要活性成分变化进行研究。方法利用青霉菌对三七药材进行固体发酵,根据 HPLC-Q-TOF-MS 的检测结果,对三七发酵产物的主要活性成分进行分析和指认,同时考察黄曲霉素和赭曲霉素等微生物毒素的含量。结果三七药材经青霉菌发酵之后稀有皂苷含量显著提高,未见黄曲霉素和赭曲霉素产生。结论青霉菌可以对三七药材中皂苷类成分进行转化,提高稀有皂苷含量,改变药性,且未见明显的微生物毒素产生,具有一定的使用安全性。     

人参蛋白对Hep-细胞增殖影响的比较

目的：比较人参蛋白对人喉癌细胞（Hep-2）增殖的影响。方法：采用中性缓冲液浸提法制备人参蛋白I，蛋白I经沸水浴处理、等电点沉淀，分别制备得到蛋白Ⅱ、Ⅲ、IV；采用MTT法检测细胞活性。结果：人参蛋白I及人参蛋白Ⅲ对Hep-2细胞增殖具有明显抑制作用（P〈0．01），人参蛋白Ⅱ及人参蛋白Ⅳ对Hep-2细胞增殖无明显影响。结论：人参蛋白是人参的主要活性成分之一，其对Hep-2细胞增殖的影响与蛋白制备方法密切相关。