庆大霉素三种C组份对绿脓杆菌抗菌活力的比较

用临床上分离的31株对庆大霉素复合物具有抗性的绿脓杆菌作为试验菌株,测定了庆大霉素三种主要组份C_1、C_(1a)与C_2对这些菌株的抗菌活力。在其中可以比较的27株抗性菌株中,C_(1a)的抗菌活力均大于C_2,C_1抗菌活力大于C_2的占64％,C_(1a)与C_1的抗菌活力相同的菌株占25％,C_(1a)大于C_1或小于C_1的分别占42.8％与32.1％。此外还对4株绿脓杆菌细胞内的钝化酶进行了分析。除了对庆大霉素敏感的Ps85菌株外,其余3株抗性菌株均有使三种组份失去抗菌活力的钝化酶。酶活力的高低与菌株的抗性水平有关。结合文献上报道的LD_(50)值,对庆大霉素三种组份进行了评价,供庆大霉素产生菌选育与发酵时确定三种组份比例的参考。     

绿脓杆菌对艮他霉素的耐药机制

目前耐药绿脓杆茵感染的治疗仍是一个麻烦问题,特别对急性白血病、恶性淋巴肿瘤以及三度烧伤病人来说,常固耐药绿脓杆菌感染而危及生命,有些报导指出绿脓杆菌败血症的死亡率仍较高。 在各种抗生素中,对绿脓杆菌比较有效的有下面三种:(1)多粘菌素类的多粘菌素B(Polymyxin B)和粘杆菌素(Colistin);(2)青霉素类的羧苄青霉素(Carbenicillin)等半合成青霉素以及(3)氨基糖苷类的艮他霉素(Gentamicin)。一般认为理想的药物应具备对人体的毒副反应小而对致病菌有较强毒力的特点,人们把这种相对毒性称为药物的选择作用。     

N-乙酰-D-神经氨酸醛缩酶基因的克隆与表达

目的:为了获得N-乙酰-D-神经氨酸醛缩酶基因表达的两重组菌.方法:以大肠杆菌C600染色体DNA为模板,通过引物设计和PCR扩增,克隆获得编码Neu5Ac醛缩酶基因(nanA)的片段;以pET28b构建的nanA基因重组质粒pRY1转化 E.coli BL21(DE3),然后将nanA基因片段组入到pDR540载体的Ptac启动子下游,所得重组菌 E.coli DH5α/pRY3的nanA基因在tac启动子控制下呈组成型表达.结果:DNA序列测定证明,该基因的开放阅读框(open reading frame,ORF)大小为894 bp, 编码298个氨基酸组成的酶蛋白;SDS-PAGE显示,纯化的目的蛋白为33 kD的单一条带.以pET28b构建的nanA基因重组质粒pRY1转化 E.coli BL21(DE3),在得到的转化子 E.coli BL21(DE3)/pRY1中,nanA基因受lac启动子控制,无需IPTG或乳糖所诱导.在N-乙酰(-D)-神经氨酸醛缩酶固定化酶的催化下合成N-乙酰-D-神经氨酸的合成效率为78.3%,结晶回收率为90.2％,总回收率为70.6%.全波长扫描分析表明:本实验室结晶品与Sigma公司商品的全波长扫描图谱有相同的特征.结论:所构建的诱导型产酶菌株 E.coli BL21(DE3)/pRY1和组成型表达菌株 E.coli DH5α/pRY3都可较多量的产酶.合成的结晶品具有N-乙酰-D-神经氨酸的特征.     

绿脓杆菌对氨基糖苷类抗生素抗药性的研究

绿脓杆菌Ps85、Ps109、Ps173与Ps368均从临床分离得来,它们对氨基糖苷类抗生素具有抗药性,这些菌株的无细胞抽出液在ATP保温系统中或乙酰辅酶A保温系统中均有钝化多种氨基糖苷类抗生素的作用,用阳离子交换树脂分离纯化了ATP保温系统中核糖霉素与卡那霉素的钝化产物,它们在紫外部份无吸收,经HClO_4处理能恢复抗菌活力,因此酶反应是转磷酸反应而不是转腺苷酰反应,结合无细胞抽出液对抗生素的钝化范围,我们推测Ps85菌株中有氨基糖苷3＇-磷酸转移酶Ⅰ,Ps173中有氨基糖苷3-乙酰转移酶,而且Ps173、Ps109和Ps368中有不止一种氨基糖苷类抗生素钝化酶,这些酶的类型需进一步研究。 由于无细胞抽出液钝化氨基糖苷类抗生素的种类与细菌的抗性类型相符,因此,我们认为钝化酶的存在是这四株菌株对氨基糖苷类抗生素具有抗性的主要生化机制。