胃癌MG7-Ag模拟表位减毒鼠伤寒沙门菌活菌疫苗研制及免疫效果

目的以减毒鼠伤寒沙门菌为疫苗载体,构建基于胃癌MG7-Ag模拟表位的口服活菌疫苗,观察Balb/c小鼠口服免疫后诱导的体液和细胞免疫反应。方法构建MG7-Ag模拟表位和HBcAg融合基因的原核表达载体,将其转入减毒鼠伤寒沙门菌得到模拟表位的口服活菌疫苗。用构建的口服鼠伤寒沙门菌疫苗免疫Balb/c小鼠,以PBS和携带pYA3341空载体的减毒鼠伤寒沙门菌作为对照。初次口服接种6周后应用ELISA法检测小鼠血清中抗MG7-Ag抗体的滴度。初次免疫后8周时,取免疫鼠脾细胞,以51Cr释放法检测小鼠脾淋巴细胞对靶细胞的杀伤效果,用表达MG7-Ag的小鼠艾氏腹水瘤细胞进行肿瘤攻击实验,观察疫苗对小鼠的保护作用。结果口服疫苗免疫小鼠后疫苗免疫组小鼠血清抗MG7-Ag抗体较PBS和空载体对照组显著增高,三组分别为0.954±0.040,0.653±0.018和0.692±0.012(P<0.01)。各组小鼠脾淋巴细胞体外杀伤实验未见显著差异,三组分别为234.7±27.7,183.4±26.0和195.7±8.0(P>0.05)。小鼠艾氏腹水瘤的攻击实验显示:疫苗免疫组中5只小鼠有1只未见肿瘤形成,而对照组小鼠则全部成瘤,且免疫组的成瘤重量为(0.05±0.01)g,明显小于两对照组的(0.10±0.04)和(0.09±0.04)g(P<0.01)。结论以胃癌MG7-Ag模拟表位为基础的口服减毒鼠伤寒沙门菌疫苗具有免疫原性,可诱导小鼠产生抗肿瘤免疫,并具有一定的保护作用。     

MuSK-mCherry融合荧光蛋白的构建及对重症肌无力患者MuSK抗体的检测

目的：构建肌肉特异性激酶（MuSK）与红色荧光蛋白（mCherry）的重组融合蛋白（MuSK-mCherry）,并作为抗原用于重症肌无力（ MG）患者血清中的MuSK抗体（ MuSKAb）的检测。方法：应用PCR技术,从含有mCherry 基因的载体pRSET-B扩增mCherry基因,经T载体（pGEM-T Easy Vector）克隆至含有MuSK细胞外区第22-452位氨基酸肽段基因的载体pMT/BiP/V5-His（ MuSK）上,构建MuSK-mCherry融合荧光蛋白基因。将重组载体转染果蝇S2细胞,表达产物以共聚焦显微镜检查。以MuSK-mCherry融合蛋白作为抗原,应用荧光免疫沉淀试验检测MG患者MuSKAb。结果：成功地构建了MuSK-mCherry融合蛋白基因,并得到了表达。经对已知MuSKAb阳性的MG患者血清中的MuSKAb的检测证实,构建的MuSK-mCherry融合蛋白在荧光免疫沉淀试验中可以检测到MuSKAb。结论：以MuSK细胞外肽段与mCherry构建的融合荧光蛋白作为抗原,可以用于MG患者血清中的MuSKAb的检测。     

染料木素对乳腺癌细胞睾丸特异性蛋白酶50 表达的影响

目的:阐明低浓度染料木素(Gen)促进乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231癌睾丸抗原特异性蛋白酶50(TSP50)表达的机制。方法:取对数生长期乳腺癌细胞,免疫组化、Western blot法观察乳腺癌细胞中TSP50表达情况,MTT还原法、流式细胞术和双染法检测Gen对乳腺癌细胞周期、凋亡情况及TSP50表达的影响。结果:对照组、5μmol/L Gen和25μmol/L Gen组干细胞亚群阳性率分别为(7.37±0.43)%、(11.57±1.13)%和(12.05±0.96)%;高浓度Gen作用后,干细胞亚群百分率下降(6.04±0.22)%;与对照组相比,5μmol/L Gen和25μmol/L Gen处理后,P70S6K1磷酸化水平略有增加,Erk1/2的磷酸化水平显著增加,MCF-7细胞中MMP-2与TSP50蛋白在5μmol/L浓度下表达增加。结论:低浓度Gen刺激乳腺癌细胞生长,TSP50可因非基因组效应相关的信号而表达增加,使ER~+乳腺癌干细胞表型特异性分子增加,促进ER~+乳腺癌细胞增殖。     

克氏库克菌败血症一例

患者男,25岁,西藏藏族自治区那曲县牧民。因“寒战、发热、腹痛、纳差、腹泻1周,尿黄3d”于2012年4月18日入院。患者人院前1周每天上午不明原因出现畏寒、发热、体温最高达39．5℃。静脉注射柴胡或复方氨林巴比妥,退热不明显,用冬眠合剂加冰毯降温等措施后可降至36℃。右上腹部隐痛,伴间断性腹泻,     

弓形虫病诊断方法研究进展

弓形虫病是由弓形虫感染引起的一种严重的人兽共患寄生虫病,对人类健康造成极大威胁。本文对弓形虫病诊断技术,包括不依赖DNA检测诊断方法、血清学检测以及基于寄生虫核酸的分子生物学方法进行综述,为弓形虫病诊断技术和方法的发展提供新的思路。     

延边地区慢性丙型肝炎患者及病毒携带者的丙型肝炎病毒基因型分布

[目的]了解吉林省延边地区慢性丙型肝炎患和丙型肝炎病毒携带丙型肝炎病毒基因型的分布．[方法]应用逆转录-聚合酶链反应技术，检测了48例本地区抗丙型肝炎病毒阳性血清，其中有29例为逆转录-聚合酶链反应RNA阳性；对29例逆转录-聚合酶链反应阳性的标本，应用限制性片段多态性技术，进行丙型肝炎病毒基因型分型．[结果]25例慢性丙型肝炎患血清中17例为丙型肝炎病毒RNA阳性，各8例查出丙型肝炎病毒Ⅱ型和丙型肝炎病毒Ⅲ型，1例丙型肝炎病毒Ⅱ/Ⅲ混合型；在23例丙型肝炎病毒携带中12例为丙型肝炎病毒RNA阳性，其中有9例丙型肝炎病毒Ⅱ型，3例丙型肝炎病毒Ⅲ型．慢性丙型肝炎和丙型肝炎病毒携带之间丙型肝炎病毒基因型分布无显性差异．[结论]丙型肝炎病毒各基因型(Ⅱ和Ⅲ)与感染的病情严重程度关系不大．     

放射化学法测定脑α-酮戊二酸脱氢酶活性

［ 目的］ 介绍一种测定脑组织α 酮戊二酸脱氢酶活性的放射化学方法．［ 方法］ 应用放射化学测定法，并探讨影响酶活性的反应条仵．［ 结果］ 测得的正常大鼠全脑α 酮戊二酸脱氢酶活性为０－４０２ ±０－０２７ｎｍｏｌ／（ｍｇ 蛋白质·ｈ）．［ 结论］ 所用的方法简单，适用于测定早老性痴呆病人脑组织α 酮戊二酸脱氢酶活性     

重症肌无力单链抗体融合蛋白的酵母菌表达及特异性鉴定

目的: 真核表达抗人乙酰胆碱受体单链抗体637(scFv637)与人血清白蛋白(HSA)的融合蛋白,以提高融合蛋白的产量和增强其生物学活性.方法: 将携带有重组质粒的毕赤酵母菌GS115用G-418筛选高拷贝重组转化子克隆,诱导表达目的蛋白,表达产物用斑点杂交试验检测,并以SDS-PAGE鉴定融合蛋白的相对分子质量(Mr),应用间接免疫荧光技术确定融合蛋白与人肋间肌乙酰胆碱受体(AChR)的亲和性.结果: 斑点杂交试验显示成功表达出目的蛋白,其Mr约为97 400,在人肋间肌细胞膜之间有荧光出现.结论: 在毕赤酵母菌GS115中成功表达出scFv637-HSA融合蛋白,并且融合蛋白可以与人肋间肌AChR结合,这为进一步研究融合蛋白的功能和应用奠定了基础.     

肝动脉超选灌注自体骨髓干细胞治疗失代偿期乙型肝炎肝硬化的临床研究

目的 分析肝动脉超选灌注自体骨髓干细胞对失代偿期乙型肝炎(乙肝)肝硬化患者的疗效及安全性.方法 选择失代偿期乙肝肝硬化患者20例,从髂后上棘抽取骨髓,体外分离纯化骨髓源性干细胞,通过肝动脉超选注入肝脏,在移植后2、4、8、12周复查肝功能,观察实验室指标变化及不良反应情况.同时选取常规治疗的失代偿期乙肝肝硬化患者20例...     

重症肌无力患者血清中乙酰胆碱受体抗体及肌肉特异性激酶抗体的检测及其意义

[目的]探讨重症肌无力（MG）患者血清中乙酰胆碱受体抗体（AchRAb）以及肌肉特异性激酶抗体（MuSKAb）与临床特点的关系．[方法]应用酶联免疫吸附试验（ELISA）,对40例MG患者血浆进行AchRAb和MuSKAb检测,并与患者临床特点进行比较分析．[结果]40例MG患者中AchRAb阳性为13例（33％）,MuSKAb阳性为7例（18％）,AchRAb与MuSKAb双阴性为22例（55％）,AchRAb与MuSKAb双阳性为2例（5％）．[结论]MG患者中AchRAb阳性者的病情普遍较轻,可受胸腺影响;MuSKAb阳性患者女性多见,全身症状严重．