藤黄酸对肾癌786-O细胞活力和对HUVEC细胞血管形成能力的抑制作用及其分子机制

目的观察藤黄酸(GA)对肾癌786-O细胞活力和对HUVEC细胞血管形成能力的影响及其分子机制。方法不同浓度的GA处理786-O细胞一定时间后,分别采用Alamar blue法、流式细胞术和免疫印迹,检测GA对786-O细胞活力、周期分布、凋亡率及凋亡标志物聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)降解片段的影响;GA对HUVEC细胞的作用除进行上述检测外,还利用划痕实验法和Transwell小室法检测细胞横向及纵向迁移能力变化,反映GA对HUVEC细胞血管形成能力的影响;免疫印迹检测P21Waf1/Cip1、Bax、缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)和泛素化蛋白;特异性荧光蛋白酶体底物肽降解法检测细胞内糜蛋白酶样蛋白酶体活性。结果 GA能够剂量依赖性抑制786-O和HUVEC细胞的活力、诱导细胞G2-M期阻滞和凋亡,同时增加P21Waf1/Cip1、Bax和泛素化蛋白水平;能够减弱HUVEC细胞横向和纵向迁移能力,伴随HIF-1α的稳定性增加和VEGF表达下调;能够抑制细胞内糜蛋白酶样蛋白酶体活性。结论 GA通过诱导细胞G2-M周期阻滞和凋亡而显著抑制786-O和HUVEC细胞活力,并能有效抑制HUVEC细胞血管形成能力,其机制可能与蛋白酶体活性抑制所导致的底物蛋白P21Waf1/Cip1、Bax和HIF-1α的稳定性改变,及HIF-1α调控的下游蛋白VEGF表达水平的变化有关。     

PARP1特异性siRNA对前列腺癌PC3细胞增殖的影响及其机制研究

目的 研究多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP1)特异性小分子干扰RNA(siRNA)对雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞株增殖的影响并初步探讨其作用机制. 方法 设计合成3条PARP1特异性siRNA序列,进行脂质体转染后,通过RT-PCR、蛋白质印迹法检测其对PARP1的干扰效果,筛选出最佳干扰效果的2条siRNA序列;通过单溶液细胞增殖检测法检测干扰PC3细胞内源性PARP1表达对细胞增殖的影响,并检测细胞内Akt及其下游GSK3β活化水平的变化. 结果 与空白对照组相比,转染阴性对照序列对PARP1的mRNA和蛋白表达水平无明显影响,而转染RNA干扰序列1706、2003和2907均可以明显干扰PARP1的表达,其中mRNA抑制率分别为(52.07±4.65)％、(44.38 ±9.15)％和(22.05 ±6.65)％,蛋白抑制率分别为(86.86±4.94)％、(83.30±7.18)％和(63.05 ± 10.19)％.RNA干扰序列1706和2003对PC3细胞的增殖抑制率分别为(38.93 ±3.87)％和(34.93±1.21)％,并可以下调细胞内Akt、GSK3β的磷酸化水平. 结论 PARP1特异性siRNA可以明显干扰PC3细胞内源性PARP1的表达并抑制细胞增殖,该抑制作用与Akt的活化抑制以及其下游GSK3β的激活有关.     

RNAi沉默PSA基因对人前列腺癌细胞系LNCaP生长的影响

目的研究运用RNA干扰技术沉默PSA基因后对人前列腺癌细胞系LNCaP细胞产生的影响。方法构建针对PSA基因的小分子干扰RNA(PSA-siRNA),将前列腺癌LNCaP系进行分组,设PSA-siRNA转染组、阴性对照组、转染液组(只由转染试剂进行转染实验)和对照组(不添加任何转染试剂)进行实验。应用蛋白印迹法检测PSA的变化,并通过MTT法和流式细胞技术检测LNCaP细胞的调亡和细胞增殖方面的变化。结果蛋白印迹法检测结果显示,与阴性对照组、转染液和对照组比较,应用PSA-siRNA处理48h后的LNCaP细胞株,PSA的表达明显降低,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。MTT法和流式细胞仪检测示,转染组的细胞生长抑制率为27.5%,且观察到更强的细胞调亡(19.3%)。结论运用RNA干扰技术沉默PSA基因可以有效抑制LNCaP细胞中PSA基因的表达,进而抑制LNCaP细胞的生长与增殖,并可有效诱导细胞调亡。