hTEFT重组绿色荧光表达载体的构建与表达

目的构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)片段的真核表达质粒。方法用RT-PCR方法从肝癌组织中提取总RNA扩增出hTERT基因片段,将其连接pGEM-TEasy质粒上,将重组质粒pGEM-T-hTERT和pEGFP-C3真核绿色荧光蛋白表达载体同时用HindⅢ和BamHⅠ双酶切后进行连接,再将重组的pEGFP-C3-hTERT基因片段转染NIH3T3细胞,经G418筛选获得稳定转染的细胞系,荧光倒置显微镜观察并检测转染细胞的hTERTmRNA表达水平。结果DNA序列分析证实了重组载体pGEM-T-hTERT和pEGFP-C3-hTERT内插入片段的碱基组成与公开发表的hTERT序列一致。转染pEGFP-C3-hTERT的NIH3T3细胞可见绿色荧光,并检出高水平表达的hTERT。结论成功构建高效表达hTERT的真核表达载体,为以hTERT为靶点的肿瘤治疗打下实验基础。     

人血管内皮生长因子mRNA靶向siRNA表达载体的构建和表达

目的:构建人血管内皮生长因子(VEGF)mRNA靶向siRNA表达载体,观察其表达情况.方法:设计人VEGF靶向的发夹样siRNA,依据设计,合成2条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pSUPERneo-GFP载体,转化扩增后得到重组载体pSUPERneo-GFP-siVEGF,进行序列测定.用脂质体转染法将重组载体转染食管癌细胞株Eca109,采用RT-PCR检测转染细胞VEGF mRNA的表达水平. 结果:经过酶切鉴定与测序,pSUPERneo-GFP-siVEGF构建成功.稳定转染该重组体的Eca109细胞VEGF mRNA表达水平明显降低.结论:成功构建了针对VEGF mRNA的siRNA载体, 转染细胞后可显著抑制VEGF mRNA的表达.     

超选择子宫动脉栓塞治疗晚期剖宫产术后出血的护理

目的探讨超选择子宫动脉栓塞治疗晚期剖宫产术后出血的护理措施。方法工作开展前培训护士,术前做好宣教工作,重视心理护理,讲解介入手术优点、原理、过程、效果和手术风险,完善术前常规准备;重视术后观察及护理,密切观察生命体征,观察腹股沟穿刺点,护理穿刺侧肢体,观察疼痛、不规则阴道出血及恶心、呕吐等常见的胃肠道反应,做好尿管的护理。结果采用超选择性子宫动脉栓塞术治疗11例晚期剖宫产术后出血患者,取得较好疗效,全部康复出院。结论对全体工作人员培训相关知识,做好围手术期护理,保证护理措施得当,有利于新技术的开展,减少并发症促进患者康复。     

腹腔引流管放置对术后肩痛发生的影响与护理

目的探讨腹腔镜手术后肩痛的预防方法。方法从2005年6月～2006年11月期间在郑州大学第一附属医院妇产科病房行腹腔镜手术的患者随机观察100例2006年2月为界分为两组,引流组(46例)于手术结束时向腹腔内放入引流管,按传统方法排出腹腔内残余气体,之后再将腹腔内液体和气体引流。对照组(44例)仅按传统方法排出腹腔内残余气体。采用国际通用的10分视觉量表法观察两组术后8h和3d的肩痛的发生率、程度。结果术后出现肩痛症状者引流组有5例,占11%;对照组有14例,占32%,引流组低于对照组,P<0.05。肩痛出现的时间引流组和对照组均以术后6～8h和术后2～3d之内最常见。结论肩痛是腹腔镜手术后的常见的并发症,手术结束时向腹腔内放入引流管协助排出腹腔内残余气体能明显减少患者术后肩痛的发生。     

HBsAg和人微小病毒B19 VP2联合抗原的克隆及表达

目的构建乙肝表面抗原-人微小病毒B19VP2融合蛋白的原核表达系统，并检测其表达蛋白的抗原反应性。方法用PCR扩增乙肝表面抗原（HBsAg）基因及B19病毒VP2基因，分别重组入pGEM-T，构建出pGEM-T-HBs及pGEM-T-VP2并测序分析；测序证实序列正确后，将pGEM-T-HBs中的HBs基因克隆入pQE30表达载体中，得到pQE30-HBs；再将pGEM-T-VP2中的VP2基因克隆入pQE30-HBs中，得到pQE30-HBs-VP2后转化至BL21（DE3）宿主菌中，并以IPTG诱导表达融合蛋白，以Western-blot鉴定。结果pQF30-HBs-VP2可在大肠杆菌BL21（DE3）中高效表达，Western-blot检测结果显示所表达融合蛋白均可与抗-HBs和抗-VP2结合反应。结论成功构建pQE30-HBs-VP2原核表达载体，且其表达的重组蛋白具有良好的HBsAs和VP2蛋白的双重抗原的反应原性。从而建立了表达B19和HBV的联合抗原表达系统，同时给HBV和B19病毒重组联合疫苗的研制和复合诊断试剂提供了抗原参考。     

A型流感病毒株A/Henan/703/2001(H3N2)核蛋白部分序列的原核表达

目的构建A型流感病毒核蛋白（NP）基因部分序列的原核表达质粒。并诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白。方法采用PCB方法扩增NP基因部分序列，并定向插入原核表达载体pGEX-4T-1中。转化大肠杆菌BL21．将阳性菌落经IPTG诱导目的基因融合蛋白的表达。结果扩增到NP基因部分序列，构建成重组表达质粒pGEX—S NP,并在大肠杆菌中进行了表达。结论成功构建A型流感病毒NP部分基因序列的原核表达质粒，并在大肠杆菌中表达了目的基因融合蛋白。     

超选择持续动脉插管化疗治疗妇科恶性肿瘤的护理

动脉插管化疗治疗妇科恶性肿瘤，国内报道多为一次性给药。我科自1997年3月开始采用持续动脉介入化疗法治疗妇科恶性肿瘤12例，均取得良好效果。该方法是经股动脉插入导管，超选择至髂内动脉后入子宫动脉或髂内动脉前支，持续性灌注化疗药物。此方法局部药物浓度高，且作用时间持久，能充分有效地杀灭癌细胞，为手术或放疗提供了极为有利的条件，有效地提高了病人的生存质量。现将我们的护理工作报告如下。一、术前准备1．心理护理：恶性肿瘤患者心理负担较重，但求生欲望强烈。因此，我们应该了解患者的思想情绪，给予有针对性的思想开导，…