人脐血间充质干细胞培养及其生物学特性的研究

目的建立人脐血间充质干细胞体外分离培养的最佳条件,并观察其生物学特性。方法在无菌条件下抽取人脐血,用密度梯度离心的方法获得脐血单个核细胞,接种含10%胎牛血清的IMDM培养基中。对单个核细胞行贴壁培养后,进行细胞形态学观察,细胞生长、细胞周期分析及细胞凋亡检测,免疫细胞化学鉴定。结果采用Percoll(1.073g/ml)分离的脐血间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)大小较为均匀,呈梭形或星形的上皮样细胞,传代培养后的细胞体积较大,成纤维样细胞逐渐增多。细胞生长曲线测定表明接种后第5d细胞进入指数增生期,至第9d进入平台期;流式细胞术证明G2+S期细胞为14.8%;免疫细胞化学染色结果表明42.0%细胞为CD45阳性。结论体外分离培养脐血间充质干细胞生长稳定,可作为组织工程的种子细胞。     

纤维蛋白凝胶复合碱性成纤维细胞生长因子与大鼠胎肢细胞碱性磷酸酶的活性

背景:纤维蛋白是一种天然的可生物降解、组织相容性好的高分子材料.碱性成纤维细胞生长因子是一种对中胚层和神经外胚层细胞促分裂作用的多肽生长因子.两者结合有利于干细胞在高度交联的凝胶支架内迁移,并且促进其增殖与分化.目的:观察纤维蛋白凝胶复合碱性成纤维细胞生长因子对大鼠胎肢细胞碱性磷酸酶活性的影响.方法:实验分为4组:纤维蛋白凝胶组,纤维蛋白凝胶中加入正常培养基.纤维蛋白凝胶复合碱性成纤维细胞生长因子组,在纤维蛋白凝胶中加入含10 μg/L碱性成纤维细胞生长因子培养基.碱性成纤维细胞生长因子组,加入10 μg/L 碱性成纤维细胞生长因子培养基.对照组,采用无凝胶正常培养基培养.无菌条件下分离培养大鼠胎肢细胞,取第3代细胞接种于以上培养基中.分别在第3,5,7,14,21,28天检测碱性磷酸酶活性、mRNA表达及细胞形态观察.结果与结论:在有纤维蛋白凝胶组内培养至7 d细胞具有较长突起且连接成网,而在无纤维蛋白凝胶组内的细胞呈纺锤形或立方形;纤维蛋白凝胶复合碱性成纤维细胞生长因子培养7,14,21 d碱性磷酸酶活性高于单纯纤维蛋白凝胶组和单纯碱性成纤维细胞生长因子培养组(P < 0.05).各时间点纤维蛋白凝胶复合碱性成纤维细胞生长因子组碱性磷酸酶mRNA表达均较对照组增强(P < 0.01).提示纤维蛋白凝胶复合碱性成纤维细胞生长因子有利于细胞形态发生,并明显增强碱性磷酸酶活性.     

蟾蜍灵对B16细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究中药蟾蜍灵对B16细胞增殖和凋亡的影响,探讨蟾蜍灵对黑色素瘤的抑制作用。方法 采用MTT法测定蟾蜍灵对B16细胞活力的影响;Hoechst 33342荧光染色检测细胞形态学变化;流式细胞术检测蟾蜍灵对细胞周期的影响。结果 蟾蜍灵对B16细胞的增殖有抑制作用,且呈浓度和时间的依赖性。蟾蜍灵作用24、48和72 h的IC50值分别为37.80、6.00和9.12 μmol/L。荧光染色显示蟾蜍灵作用于B16细胞24 h后,细胞呈现典型的凋亡形态特征;细胞周期分析显示,蟾蜍灵处理组S期细胞降低,蟾蜍灵可引B16细胞G0/G1期阻滞,而对G0/G1期阻滞随作用时间延长而增强。结论 蟾蜍灵可能通过阻滞B16细胞增殖周期进程而诱导凋亡。     

纤维蛋白凝胶促进大鼠间充质干细胞的成骨分化

背景：纤维蛋白是一种天然的可生物降解、组织相容性好的高分子材料,是一种能促进细胞和外源性生长因子释放的载体,其中血纤维蛋白稳定因子ⅩⅢ已证明有利于未分化的间充质干细胞在高度交联的凝胶支架内迁移,并且促进这些细胞的增殖与分化能力。 目的：观察大鼠间充质干细胞在纤维蛋白凝胶内的行为。 方法：无菌条件下分离大鼠胎肢细胞获得间充质干细胞,取第3代细胞分别接种于0,5,10,20 g/L纤维蛋白凝胶内,用倒置相差显微镜和激光扫描共聚焦显微镜分析细胞在凝胶内的形态学变化; 酶标仪和Von Kossa染色分析碱性磷酸酶活性和钙盐沉积。 结果与结论：5 g/L低浓度纤维蛋白凝胶有利于细胞形态的发生,20 g/L高浓度凝胶有利于细胞的成骨分化。20 g/L纤维蛋白凝胶碱性磷酸酶活性高于对照组,10和20 g/L浓度纤维蛋白凝胶矿化结节出现在21至28 d,而对照组无矿化结节出现。提示大鼠间充质干细胞的形态与成骨分化依赖于纤维蛋白凝胶浓度,提示纤维蛋白凝胶有助于间充质干细胞的成骨分化。中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程全文链接：     

PFNA配合蒙药桑满-9治疗股骨转子间骨折的临床疗效观察

目的：评价防旋型股骨近端髓内钉（PFNA）结合蒙药桑满-9治疗股骨粗隆间骨折的临床疗效。方法选择股骨粗隆间骨折患者140例,随机分治疗组70例,采用PFNA内固定的同时给予蒙药桑满-9的服用;对照组70例,单纯PFNA内固定不使用促进骨痂生长、加速骨折愈合的任何药物。结果试验组治疗骨折总有效率91.43%,对照组总有效率78.57%,2组总有效率比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论蒙药桑满-9配合PFNA治疗股骨转子间骨折具有很好的临床疗效。     

DMSO诱导MCF-7细胞凋亡的研究

目的研究二甲基亚砜(DMSO)对MCF-7细胞凋亡的诱导作用。方法用不同浓度DMSO处理体外培养的MCF-7细胞,应用倒置光显微镜观察细胞形态学变化,用MTT比色法检测细胞存活率;Hoechst33258/PI荧光染色,用荧光显微镜分析凋亡细胞比率;琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯状条带。结果在倒置光学显微镜下观察1%DMSO处理细胞12h后细胞形态发生变化。约有50%以上的细胞变圆,细胞内有多泡小体形成。随DMSO浓度增加和作用时间的延长,细胞存活率明显下降,经MTT检测其IC_(50)值为1%;荧光显微镜下可见60%以上细胞核染色质凝集,核碎裂等凋亡细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳呈现梯状条带(DNA ladder)。结论适当浓度的DMSO能够抑制乳腺癌细胞增殖并诱导其凋亡。     

BDNF对大鼠胚胎神经干细胞诱导分化的影响

【目的】脑源性神经营养因子（BDNF）对体外培养大鼠神经干细胞（NSCs）诱导分化的影响。【方法】体外克隆化培养获得的NSCs中分别加入不同浓度的BDNF,采用倒置光显微镜观察细胞克隆形成,透射电子显微镜观察细胞超微结构的变化,免疫组化的方法检测胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。【结果】在倒置光显微镜下可见细胞接种后5 d形成小细胞球,7 d成为大小不等的细胞克隆。在电镜下可见具有典型的神经干细胞和神经胶质样细胞特征。经BDNF处理7 d后星形胶质样细胞增多,且突起的长度随浓度的增加逐渐延长,尤以40 ng/ml组突起最为显著（P〈0.05）。免疫细胞化学检测GFAP的阳性颗粒位于细胞浆中,经40 ng/mlBDNF诱导后阳性率可达86.1%,与对照组（13.1%）比较有显著性差异。【结论】BDNF可诱导神经干细胞分化为星形胶质细胞。     

bFGF通过上调Ras/ERK信号通路诱导BMSCs表达Ⅰ型胶原

目的研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblastgrowth factor,bFGF)诱导体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cell,BMSCs)成骨性分化及其作用机制。方法从SD大鼠骨髓中获得BMSCs,纯化培养传代后用不同浓度bFGF(5、10、20μg.L-1)在不同时间(d 0、3、5、7、14、21)分别采用透射电镜和光镜观察细胞形态结构变化;用免疫细胞化学和RT-PCR检测Ⅰ型胶原蛋白及mRNA表达;用Western blot和免疫细胞化学方法分析细胞内p-ERK蛋白表达。结果 BMSCs经bFGF作用后在光镜和透射电镜下均为成骨样细胞的形态特征;bFGF促进细胞Ⅰ型胶原蛋白和mRNA表达,同时细胞p-ERK蛋白表达升高。结论 bFGF可活化Ras/ERK信号转导通路,促进BMSCs向成骨细胞分化。     

陕西武警某部新兵军事训练伤分析

目的 分析武警某部新兵军事训练伤发生特点,为提高集训质量提供参考.方法 由卫生队专职医生按照《中国人民解放军军事训练伤分类标准》对陕西某部2008～2010年度接受基础军事训练的全部武警新兵进行军事训练伤诊断与分类.指标采用昼夜发生率和构成比.结果 2008～2010年度军事训练伤占系统伤病的构成和昼夜发病率均居第二位,所占构成比分别为20.68％,24.51％和28.87％,昼夜发生率分别为3.20％,2.34％和1.94％.训练伤以下肢的关节损伤和软组织损伤为主,三年度均占到80％及以上.3年内急性损伤比例均高于慢性损伤.整个集训期的发病最高峰出现在第11～13周.结论 为降低训练伤的发生,建议①强化防护意识,重视训练循序渐进和劳逸结合,防止肌肉、韧带损伤和慢性疲劳性损伤发生.②在训练过程中有目的、有计划对训练者心理技能训练.