天冬氨酸及赖氨酸2～10肽单链和双链的合成与毒性

目的探讨同种氨基酸形成多肽的毒性和应用前景。方法用固相合成法合成天冬氨酸和赖氨酸的2~10肽单链与双链化合物,通过小鼠尾静脉将这些化合物注射到小鼠肝脏内,观察它们对小鼠的致死作用(LD50)。结果当天冬氨酸单链2~10肽的浓度依次达到0.15、0.1、0.09、0.03、0.0065、0.03、0.034、0.035和0.04 mol/L时,小鼠的死亡率达到50%。当赖氨酸单链2~10肽的浓度依次达到0.28、0.1、0.047、0.0225、0.0028、0.00166、0.0015、0.0011和0.00075 mol/L时,小鼠的死亡率达到50%。当天冬氨酸-赖氨酸双链2~10肽的浓度依次得到0.5、0.05、0.017、0.014、0.009、0.006、0.004、0.004、0.004、0.004 mol/L时,小鼠的死亡率达到50%。结论单链多肽的毒性大于双链多肽。在2~6肽范围内,天冬氨酸单链多肽随着氨基酸数目增加毒性逐渐增加;相反,在7~10肽范围内,随着氨基酸数目的增加毒性逐渐降低。在2~10肽范围内,赖氨酸单链多肽随着氨基酸数目增加毒性逐渐增加。在2~6肽范围内,天冬氨酸-赖氨酸双链多肽随着氨基酸数目增加毒性逐渐增加;但在7~10肽范围内,其毒性相似。     

大鼠肝再生终止阶段肝细胞CCAAT增强子结合蛋白αmRNA、微小RNA-144-3p和3种环状RNA的表达和作用

目的 了解大鼠肝再生终止阶段CCAAT增强子结合蛋白α(CEBPα) mRNA、miR-144-3p、rno-LOC100365958_0001、mo-Usp3_0010和mo-AC241873_0010调节肝细胞进入G1期的途径和方法.方法 按Higgins等方法制备大鼠2/3肝切除(PH)模型,按Smedsrod等方法分离肝细胞,用大规模定量分析技术检测大鼠肝再生中肝细胞竞争性内源RNA(ceRNA)表达的变化,用Cytoscape 3.2软件构建ceRNA的相互作用网络,用ceRNA综合分析等方法解析它们表达的相关性和作用相关性.结果 PH后6h和72 h时,CEBPα mRNA的比值为1.12±0.27和2.52±0.15,miR-144-3p为2.97±0.81和0.99±0.36,rno-LOC 100365958_0001为0.16±0.05和6.78±0.62,rno-Usp3_0010为0.13±0.01和7.61±0.69,rno-AC241873_0010为0.09±0.02和7.53±0.69.CEBPα促进的G1期相关基因细胞周期蛋白G2(CCNG2)为0.25±0.06和1.10±0.22,抑制的G1期相关基因ETS变异转录因子6(ETV6)为2.22±0.68和0.99±0.27,MAPK14为2.01±0.32和0.85±0.11,信号转导子和转录激活因子3(STAT3)为2.88±0.24和1.08±0.07,肿瘤坏死因子(TNF)为2.29±0.51和0.86±0.51.CEBPα促进的G0期相关基因G0/G2期开关2(G0S2)为0.64±0.08和4.71±0.91,磷脂酶A2-IVA(PLA2G4A)为0.42±0.13和2.83±0.62.结论 PH后6h时,rno-LOC 100365958_0001、rno-Usp3_0010、rno-AC241873_0010和miR-144-3p的相互作用加强了后者对CEBPα mRNA的抑制,不利于CEBPα形成,有利于CEBPα抑制的G1期相关基因表达和肝细胞处于G1期.相反,PH后72 h时,CEBPα mRNA上调,有利于CEBPα促进G0期相关基因表达和肝细胞处于G0期.     

肝硬化和肝癌差异基因表达的对比研究

目的 利用寡核苷酸芯片筛选肝硬化和肝癌的差异基因表达，并对比研究其共同阳性基因在肝癌中的作用。方法 应用含有18993个已知基因的Affymetrix U133plus 2．0芯片，对从肝癌、肝硬化及正常肝组织抽提并纯化标记的mRNA进行芯片杂交，GenePix 4000A荧光激光扫描系统对芯片进行扫描，GenePix Pro 3．0分析软件处理杂交信号获取结果。Northern印迹技术检验芯片分析结果的可靠性。结果 芯片分析结果具有可重复性。肝硬化表达差异基因为118个，其中上调表达基因数为63，下调表达基因数为55。肝癌表达差异基因为1455个，其中上调表达基因数为761，下调表达基因数为694。在肝硬化上调表达的基因中，25个基因继续在肝癌中上调表达，2个基因下调表达，36个基因在肝癌中阴性表达；在肝硬化下调表达的基因中，36个基因继续在肝癌中下凋表达，1个上调表达，18个在肝癌中阴性表达。结论 利用寡核苷酸表达谱芯片，能够快速筛查出肝癌及肝硬化相关基因。有多个在肝硬化中异常表达的基因持续在肝癌中表达，这可能是肝硬化癌变的分子基础。     

辅酶Q10对大鼠再生肝细胞线粒体通透性转换的影响

目的 了解辅酶Q₁₀（CoQ₁₀）对大鼠再生肝细胞线粒体通透性转换（MPT）的影响。方法 雌性SD大鼠120只,用不同剂量CoQ₁₀灌胃后行部分肝切除术（PH）,于术后不同时间取肝组织分离线粒体,分光光度计法测定线粒体悬液的A540nm值,之后再加入钙离子诱导并检测A540nm值。结果 PH后6~48h,高剂量（60mg/kg）CoQ₁₀处理组的再生肝线粒体通透性明显低于对照组,而低剂量（6mg/kg）处理组只在48h明显低于对照组,其他时间均无显著差异。用钙离子诱导后,各组各时间点的线粒体通透性随时间延长而不同程度的增强,但PH后6~48 h的CoQ₁₀处理组的再生肝线粒体通透性稍小于对照组。结论 一定剂量的CoQ₁₀能降低大鼠再生肝线粒体通透性,作用主要体现在肝再生的细胞增殖阶段。     

胃肠道5-HT内分泌细胞和肥大细胞与肝再生的关系

目的 探讨胃肠道及肝中5-HT免疫活性(5-HT-IR)内分泌细胞和肥大细胞(MC)与肝再生的关系.方法 150只SD大鼠随机分为对照组、手术对照(OC)组和实验组.实验组大鼠切除2/3肝(部分肝切除,PH),分别于术后不同时段取胃、小肠、肝组织.用免疫组织化学技术检测组织中5-HT-IR内分泌细胞和5-HT-IR MC,用甲苯胺蓝(TB)染色技术检测组织中MC.OC组除不切除肝叶外,其他同实验组.结果 1.实验组和OC组胃肠中5-HT-IR内分泌细胞数均于PH后2h较对照组下降(胃P<0.05,肠P<0.01),但实验组PH后6～72h极显著多于对照组(P<0.01),肝中未见5-HT-IR内分泌细胞.2.除PH后48～96h肝中MC数显著少于对照组(P<0.05)外,实验组和OC组胃肠及肝中MC数较对照组均无显著差异.3.在胃中5-HT-IR MC数于PH后3～6h和96h显著多于对照组(P<0.05),12～72h极显著多于对照组(P<0.01);在小肠中PH后2h和120h显著多于对照组(P<0.05).3～96h极显著多于对照组(P<0.01);肝中PH后48～72 h显著少于对照组(P<0.05).OC组胃肠和肝中5-HT-IR MC数较对照组均无显著差异;4.MC的5-HT阳性率在胃中于PH后2～96 h,在小肠中于PH后0.5～120 h逐渐增大,在肝中于1.5～24 h有所增加,48～72 h明显下降.OC组胃肠和肝中的阳性率较对照组均无明显变化.结论肝切除后的肝细胞增殖期内胃肠道5-HT-IR内分泌细胞和5-HT-IR MC数显著增多,两种细胞可能提供了在肝再生中起重要作用的5-HT.     

JNK信号通路调控大鼠再生肝8种细胞的增殖和凋亡

目的 从基因转录水平了解JNK信号通路在大鼠再生肝8种细胞中的作用。方法 用密度梯度离心和免疫磁珠等方法分离肝细胞（HC）、胆管上皮细胞（BEC）、卵圆细胞（OC）、肝星形细胞（HSC）、窦内皮细胞（SEC）、库普弗细胞（KC）、陷窝细胞（PC）、树突状细胞（DC）等8种肝脏细胞,用大鼠Genome 230 2.0芯片检测大鼠再生肝8种细胞的基因表达谱,用生物信息学和系统生物学等方法分析基因表达变化预示的JNK信号通路在调控大鼠再生肝8种细胞增殖、凋亡中的作用。用实时荧光定量PCR方法验证了芯片结果的可靠性。结果 JNK信号通路涉及240个基因和42条途径,其中,225个基因与大鼠肝再生相关。基因协同作用分析显示,在大鼠肝再生启动阶段,JNK信号通路启动HC和KC增殖,促进OC凋亡,启动部分PC和SEC增殖和促进部分PC和SEC凋亡;在进展阶段,JNK信号通路促进HC、BEC、KC和DC增殖,促进部分PC增殖、部分PC凋亡。在终止阶段,JNK信号通路促进HC、OC和PC凋亡,促进部分KC增殖、部分KC凋亡。结论 大鼠肝再生中JNK信号通路的42条途径和225个基因参与调控大鼠再生肝8种细胞的增殖和凋亡。     

大鼠肝硬化与肝再生的基因表达谱比较分析

目的 了解肝硬化(LC)与肝再生(LR)的相关性.方法 取成年SD雄性大鼠24只,每组6只,用CCl4诱导方法 建立大鼠LC模型;将114只SD雄性大鼠随机分为19组,包括9个部分肝切除组,9个假手术组和1个正常对照组,用2/3肝切除手术建立LR模型.用大鼠全基因组表达谱芯片Genome 230 2.0检测大鼠LC发生与大鼠LR中肝组织的基因表达谱,用生物信息学和系统生物学等方法 分析基因表达谱预示的生理活动的异同,并用定量PCR证明芯片检测结果 的可靠性.结果 LC发生中304个基因和LR中948个基因发生了有意义表达变化,其中121个基因为两者共有,183个基因为LC特有,827个基因为LR特有.H-clustering分析表明,LC和LR的生理活动未显示时间上的相关性.K-means聚类分析显示,LC和LR的C1～C5组基因表达趋势相似,C6组相反,但LR的变化更为丰富.应用基因本体论(GO)分类和功能聚类分析发现,在LC和LR中,免疫反应、炎症反应、细胞迁移、细胞黏附等生理活动增强,各种物质代谢活动减弱.其中,LC的刺激反应在C2强于肝再生,在C6弱于肝再生,而DNA修复、细胞增殖、脂类代谢、内环境稳态和氧化应激等均弱于肝再生.结论 LC与LR的基因表达变化和生理活动有共同方面,也有差异之处.     

大鼠肝再生启动阶段肝细胞CCAAT增强子结合蛋白αmRNA、微小RNA-144-3p和3种环状RNA的表达和作用

目的 了解大鼠肝再生启动阶段CCAAT增强子结合蛋白α(CEBPα) mRNA、微小RNA(miR)-144-3p、rno-LOC100365958_0001、rno-Usp3_0010和rno-AC241873_0010调节肝细胞处于G0期还是G1期的途径和方法.方法 按Higgins等方法制备大鼠2/3肝切除(PH)模型,按Smedsrod等方法分离肝细胞,用大规模定量分析技术检测大鼠肝再生中肝细胞竞争性内源RNA(ceRNA)表达的变化,用Cytoscape 3.2软件构建ceRNA的相互作用网络,用ceRNA综合分析等方法解析它们表达的相关性和作用相关性.结果 PH后0h和6h时,CEBPαmRNA的比值为4.88±0.78和1.12±0.27,miR-144-3p为1.30±0.11和2.97±0.81,rno-LOC 100365958_0001为6.99±0.55和0.16±0.05,rno-Usp3_0010为8.48±0.67和0.13±0.01,rno-AC241873_0010为11.85±0.93和0.09±0.02.CEBPα促进的G0期相关基因细胞周期蛋白依赖性激酶2相关蛋白2(CDK2AP2)为2.55±0.42和0.74±0.11,G0/G1开关2(G0S2)为3.85±0.23和0.64±0.08,信号转导子和转录激活因子1(STAT1)为2.57±0.13和1.32±0.13,转化生长因子β受体2(TGFBR2)为2.77±0.20和0.79±0.13,抑制的G0期相关基因细胞周期蛋白依赖性激酸酶抑制剂1a(CDKN1a)为0.39±0.07和0.93±0.15.CEBPα促进的G1期相关基因细胞周期蛋白G2 (CCNG2)为1.19±0.09和0.25±0.06,抑制的G1期相关基因ETS变异转录因子6(ETV6)为0.77±0.05和2.22±0.68,血红蛋白加氧酶1(HMOX1)为1.05±0.21和4.57±0.88,MAPK14为1.01±0.15和2.01±0.32,STAT3为0.74±0.15和2.88±0.24,肿瘤坏死因子(TNF)为0.80±0.14和2.29±0.51.结论 PH后0h时,CEBPα mRNA上调,有利于CEBPα促进的G0期相关基因表达和肝细胞处于G0期.相反,PH后6h时,rno-LOC 100365958_0001、rno-Usp3_0010、rno-AC241873_0010和miR-144-3p的相互作用加强了后者对CEBPα mRNA的抑制,不利于CEBPα形成,有利于CEBPα抑制的G1期相关基因表达和肝细胞处于G1期.     

大鼠肝再生终止阶段肝细胞CCAAT增强子结合蛋白αmRNA、微小RNA-144-3p和3种环状RNA的表达和作用

目的 了解大鼠肝再生终止阶段CCAAT增强子结合蛋白α(CEBPα) mRNA、miR-144-3p、rno-LOC100365958_0001、mo-Usp3_0010和mo-AC241873_0010调节肝细胞进入G1期的途径和方法.方法 按Higgins等方法制备大鼠2/3肝切除(PH)模型,按Smedsrod等方法分离肝细胞,用大规模定量分析技术检测大鼠肝再生中肝细胞竞争性内源RNA(ceRNA)表达的变化,用Cytoscape 3.2软件构建ceRNA的相互作用网络,用ceRNA综合分析等方法解析它们表达的相关性和作用相关性.结果 PH后6h和72 h时,CEBPα mRNA的比值为1.12±0.27和2.52±0.15,miR-144-3p为2.97±0.81和0.99±0.36,rno-LOC 100365958_0001为0.16±0.05和6.78±0.62,rno-Usp3_0010为0.13±0.01和7.61±0.69,rno-AC241873_0010为0.09±0.02和7.53±0.69.CEBPα促进的G1期相关基因细胞周期蛋白G2(CCNG2)为0.25±0.06和1.10±0.22,抑制的G1期相关基因ETS变异转录因子6(ETV6)为2.22±0.68和0.99±0.27,MAPK14为2.01±0.32和0.85±0.11,信号转导子和转录激活因子3(STAT3)为2.88±0.24和1.08±0.07,肿瘤坏死因子(TNF)为2.29±0.51和0.86±0.51.CEBPα促进的G0期相关基因G0/G2期开关2(G0S2)为0.64±0.08和4.71±0.91,磷脂酶A2-IVA(PLA2G4A)为0.42±0.13和2.83±0.62.结论 PH后6h时,rno-LOC 100365958_0001、rno-Usp3_0010、rno-AC241873_0010和miR-144-3p的相互作用加强了后者对CEBPα mRNA的抑制,不利于CEBPα形成,有利于CEBPα抑制的G1期相关基因表达和肝细胞处于G1期.相反,PH后72 h时,CEBPα mRNA上调,有利于CEBPα促进G0期相关基因表达和肝细胞处于G0期.     

大鼠肝再生启动阶段能量代谢物靶向定量分析

目的 探讨大鼠肝再生 (LR)启动阶段能量代谢物的变化对LR的调控作用。 方法 大鼠随机分为3组,每组5只,包括两个部分肝切除组（PH）和1个正常对照组。运用质谱选择反应检测扫描/多反应检测扫描（SRM/MRM）对29种能量代谢物的含量进行靶向代谢组学鉴定。运用Ingenuity Pathway Analysis (IPA)软件进行整合分析,包括经典途径和分子相互作用网络。 结果 3-磷酸-D-甘油酸酯、一磷酸腺苷、环腺苷酸、D-果糖1,6-二磷酸、磷酸二羟丙酮、单磷酸鸟苷、三磷酸鸟苷、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸含量显著增加。α-酮戊二酸、β-D-果糖6-磷酸、枸橼酸、D-葡萄糖-6-磷酸、乳酸、还原型辅酶Ⅱ、草酰乙酸和丙酮酸含量显著减少。聚类分析发现,这些代谢物可以聚为4类。IPA分析表明,肝再生起始阶段的生物分子变化主要与碳水化合物代谢,细胞生长和增殖,机体发育相关。在肝再生启动阶段,磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、缺氧诱导因子1α（HIF-1α）、过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）、蛋白激酶A（PKA）和磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路与能量代谢相关,糖酵解可能是主要的供能方式。 结论 大鼠肝再生启动阶段能量代谢物的变化对肝再生具有调控作用。