第三代端粒酶缺失小鼠皮肤表皮干细胞分离培养特性观察

【摘要】目的 观察第三代端粒酶缺失小鼠与野生型小鼠皮肤表皮干细胞数目及功能差异。方法 利用流式细胞术对皮肤表皮干细胞进行数目分析及分选;实时定量PCR方法检测p21基因表达;表皮干细胞克隆形成数目检测细胞自我更新能力。结果 野生型小鼠基底部表皮干细胞与基底部上层表皮干细胞比例分别为9.56% 和1.22%,在第三代端粒酶缺失小鼠中这两部分细胞比例分别为17.36% 和 2.92%;第三代端粒酶缺失小鼠p21相对表达水平为野生型小鼠的6.4倍;野生型小鼠每104 个表皮干细胞能够形成280.2个克隆,第三代端粒酶缺失小鼠每104 表皮干细胞仅能够形成29.28个克隆,以上结果均具有统计学差异（p<0.05）。结论 与野生型小鼠比较,第三代端粒酶缺失小鼠皮肤表皮干细胞出现衰老性的损伤。      

Vam3对辐射所致小鼠骨髓单个核细胞损伤的保护作用

电离辐射引起造血系统损伤是电离辐射损伤的主要表现之一。造血干细胞（ hematopoietic stem cell, HSC）是造血系统中一类具有自我更新与定向分化能力的细胞,电离辐射可以引起HSC损伤,导致其数目减少,体内体外自我更新及重建能力降低,进而引起骨髓的持久性损伤［1-3］。研究发现,电离辐射引起的骨髓持久性损伤主要是由于受照射后HSC内持续升高的活性氧（ reactive oxygen species,ROS）激活下游p38MAPK信号通路最终引起HSC衰老所致［4-6］。 Vam3是从山葡萄根中获得的天然二苯乙烯低聚体类化合物,在植物体内含量较低,现可以白藜芦醇为原料化学合成。研究提示, Vam3可以通过降低细胞内ROS水平进而抑制烟雾凝集物诱导的人支气管上皮细胞自噬［7］。本研究根据Vam3能够降低细胞内ROS水平这一特点,观察Vam3对辐射后的小鼠骨髓单个核细胞损伤保护作用,为探索新型辐射防护剂提供实验依据。     

富氢水对电离辐射引起胸腺细胞损伤的影响

目的 探讨富氢水对6 Gy照射小鼠胸腺细胞内活性氧水平、细胞凋亡及DNA损伤程度的影响。 方法 实验分为对照组、6 Gy照射组、6 Gy照射+富氢水组;对照组和6 Gy照射组小鼠照射前10 min灌胃正常饮用水0.5 ml,6 Gy照射+富氢水组小鼠灌富氢水0.5 ml,照射后连续灌胃,给予小鼠正常饮用水和富氢水7 d,于照射后4、7、15 d处死小鼠获取胸腺细胞。采用流式细胞术检测胸腺细胞内活性氧水平、凋亡细胞比例及磷酸化组蛋白H2AX（γ-H2AX）平均荧光强度。 结果 与对照组的小鼠比较,6 Gy照射组小鼠在照射后4、7、15 d胸腺细胞中的活性氧水平升高,早期凋亡细胞[AnnexinⅤ阳性、碘化丙啶（PI）阴性]和晚期凋亡细胞（AnnexinⅤ阳性、PI阳性）的细胞比例明显增加,γ-H2AX平均荧光强度增加。与6 Gy照射组小鼠相比,6 Gy照射+富氢水组小鼠的胸腺细胞中活性氧水平下降,早期凋亡和晚期凋亡的细胞比例降低,细胞内γ-H2AX平均荧光强度则是下降的,差异均具有统计学意义。 结论 富氢水可以有效减轻电离辐射引起的胸腺细胞损伤,为富氢水作为辐射损伤防护剂提供了实验依据。     

电离辐射对小鼠骨髓 c-kit 阳性细胞损伤效应体外研究

目的：观察电离辐射引起小鼠骨髓 c-kit+细胞损伤变化。方法磁珠法分选小鼠 c-kit+细胞,生物发光法检测细胞活力,活性氧探针(DCFH-DA)检测细胞内活性氧水平,集落形成数目检测克隆形成能力,流式细胞术检测细胞增殖与凋亡,基因芯片分析细胞内信号通路变化。结果与0 Gy 组(对照组)比较,c-kit+细胞受到1 Gy 和4 Gy 照射后,细胞活力下降,克隆形成能力下降,早期凋亡和晚期凋亡细胞比例增加,细胞内活性氧水平升高;与对照组比较,c-kit+细胞受到1 Gy 照射后,处于增殖期(S/G2/M 期)细胞比例增加;4 Gy 照射后处于增殖期(S/G2/M 期)细胞比例下降;c-kit+细胞受到4Gy 照射后 Srxn1、Psmb5、Cdkn1a、Smc1b、Bcl2l1、Lrdd 等基因表达上调;Mpo、Mtf1、Chek1、Rcc1 Ebag9、Ciapin1等基因表达下调。结论电离辐射能够引起骨髓 c-kit+细胞损伤,导致一系列信号通路表达变化。     

四种雌激素对放射性造血损伤防护效应的比较

目的观察四种雌激素对辐射引起的造血系统损伤的防护作用。方法 实验采用3种照射剂量:7.5、8.0、8.5 Gy,每种照射剂量下分为6组:对照组,照射组,照射+17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯(DHEA)组、照射+炔雌醇(EE2)组,照射+炔雌三醇(EE3)组,照射+雌三醇(E3)组。给药方式为照射前3 d连续腹腔内注射,1次/d,给药剂量为6 mg/kg。第4天,经137Csγ射线全身一次性照射,照射后9 d处死小鼠,检测骨髓有核细胞(BMNC)计数、脾脏集落形成数目(CFU-S)、脾脏指数。结果 各给药组均对辐射引起的造血系统损伤有不同程度的保护作用,以DHEA保护作用最佳,EE2保护作用次之;与照射组、照射+EE3组、照射+E3组、照射+EE2组比较,照射+DHEA组能够明显提高经7.5、8.0、8.5 Gy照射后小鼠的BMNC、CFU-S数目和脾脏指数,差异有高度统计学意义(均P<0.01)。结论 4种雌激素对辐射引起的造血系统损伤均有保护作用,DHEA效果最好。     

E838对CTX化疗损伤小鼠的保护作用

 目的 观察E838对环磷酰胺所致小鼠损伤的保护作用。 方法 对小鼠采用连续5天腹腔注射E838药物,从第3天同时给予环磷酰胺（CTX）,阳性对照为茜草双酯,观察外周血白细胞、骨髓有核细胞数、内源性脾结节形成（CFU-S）、脾脏指数及胸腺指数的变化。 结果 E838可明显减轻化疗所致小鼠免疫功能的抑制,并可使化疗后小鼠的体重恢复增长, 白细胞、骨髓有核细胞和CFU-S明显高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。中、高剂量组白细胞与茜草双酯组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 提示E838具有对抗化疗损伤的作用。     

基因芯片表达分析4Gyγ射线对小鼠骨髓c-kit阳性细胞影响

目的 利用基因芯片技术分析经4 Gyγ射线照射后c-kit(CD117,正常表达于干祖细胞表面的细胞因子受体)阳性细胞与代谢过程相关的基因及信号通路表达变化.方法 利用磁珠分选系统分选出骨髓c-kit阳性细胞.实验分为对照组、4 Gy照射组.取1×106个c-kit阳性细胞进行照射,照射剂量率为0.99 Gy/min.照射后将细胞培养18h后取出,进行全基因组的高通量基因芯片检测,并进行Gene Ontology聚类分析和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes信号通路分析.结果 4Gyγ射线照射引起c-kit阳性细胞包括Pld5、Neu2、Bpgm、Alas2、Satl1、Rdh16、Mccc1、Sat2、Smug1、Cml5、Adhfe1、Idh3a、Slc27a5在内的13个基因表达上调3倍以上,包括Acss2、Phgdh、Psat1、Glb1、Gpam、Dus3l、Fuca2、Impdh1、Dlat、Glb1、Enpp4、Prim2、Mettl10、Slc27a2、Dera、Qdpr、Dus1l、Cdyl2、Dhodh、Srr、Spr、Mical2在内的22个基因表达下调3倍以上,这些基因主要参与嘌呤代谢、嘧啶代谢、三羧酸循环等信号通路.结论 4Gyγ射线照射能引起c-kit阳性细胞中与代谢过程相关的许多基因表达发生变化,这些变化的基因有待进一步的实验验证.     

不同剂量137Csγ-射线辐射后造血干/祖细胞辐射敏感性差异研究

摘要：目的 探讨不同剂量137Csγ-射线照射后不同时间点C57 BL/6小鼠造血细胞放射敏感性的差异。方法 选取6~8周龄雄性C57BL/6小鼠72只,完全随机法分为对照组和照射组。照射组小鼠分别接受2、4、6 Gy137Csγ射线一次性全身照射,对照组小鼠接受假照射。小鼠分别于受照后14 d、35d和56d断颈处死,取外周血进行血象测定,取骨髓细胞测定有核细胞数目和造血干/祖细胞数目。结果 不同剂量照射后小鼠的外周血常规指标有明显变化,白细胞数目明显下降,其次是血小板数目,且具有剂量效应关系;在照射后14d,2Gy、4Gy和6Gy照射组小鼠骨髓有核细胞数目与对照组比较分别下降21.9%、39.9%和54.4%（t=4.311、6.401、8.007,P<0.05）;照射后35d和56d,6Gy照射组小鼠骨髓有核细胞和造血祖细胞数目显著低于对照组（t=4.185、3.596,P<0.05）。照射后14d、35d和56d,2Gy、4Gy和6Gy照射组小鼠骨髓造血干细胞数目持续低于对照组（t=9.706、3.427~7.465,P<0.05）。结论 不同剂量137Csγ-射线照射对小鼠造血系统造成不同程度的损伤,造血祖细胞较造血干细胞辐射敏感,且辐射对造血干细胞造成的损伤是持久性的。