髓系特异性Abro1基因敲除小鼠构建和表型初步分析北大核心CSCD

目的:构建髓系特异性Abro1(Abraxas brother 1)基因敲除小鼠,并初步分析其对小鼠造血系统及LPS诱导败血症的影响。方法:采用CRISPR/Cas9基因编辑技术和Cre/LoxP重组系统构建Abro1^(flox/+)小鼠,将Abro1^(flox/+)雌雄小鼠自交,子代得到Abro1^(flox/flox)基因型小鼠。Abro1^(flox/flox)与Lyz2-Cre^(+)小鼠交配,子代得到Abro1^(flox/+)/Lyz2-Cre^(+)小鼠,再将其与Abro1^(flox/flox)交配,最终得到的Abro1^(flox/flox)/Lyz2-Cre^(+)小鼠为髓系特异性Abro1基因敲除小鼠,即MKO小鼠;Abro1^(flox/flox)/Lyz2-Cre^(−)小鼠作为野生型小鼠,即WT小鼠。提取WT和MKO小鼠尾基因组DNA,PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳鉴定其基因型。提取WT和MKO小鼠免疫细胞蛋白,Western blot检测ABRO1蛋白表达。流式细胞术分析小鼠骨髓和外周血免疫细胞组成,检测MKO小鼠对造血系统的影响。LPS处理WT和MKO小鼠3 h,检测血清中相关生化指标变化以及炎症因子分泌情况。结果:PCR和Western blot结果显示髓系特异性Abro1基因敲除小鼠构建成功。流式细胞术结果显示WT和MKO小鼠骨髓和外周血中髓系细胞(CD11b^(+)、CD11b^(+)Ly6G^(+)、CD11b^(+)Ly6C^(+))和淋巴细胞组成(CD3^(+)、B220^(+))无差异。LPS诱导败血症实验中,MKO小鼠相关生化指标和炎症因子水平均低于WT小鼠,表明MKO小鼠可抵抗LPS诱导的败血症。结论:成功构建ABRO1 MKO敲除小鼠,发现MKO小鼠造血系统正常,但可抵抗LPS诱导的败血症,ABRO1 MKO小鼠的建立为揭示ABRO1在免疫细胞亚群中的差异性调控机制提供了良好的动物模型。     

人THAP11基因RNAi慢病毒表达系统的建立

目的构建人THAP11基因RNA干扰（RNAi）慢病毒载体,制备高滴度病毒颗粒,敲低K562细胞和脐带血CD34＋细胞中THAP11表达。方法采用第三代慢病毒包装系统,将含有特异性干涉THAP11的DNA序列克隆入穿梭质粒pSicoR中,构建siTHAP11-pSicoR质粒。在脂质体介导下,siTHAP11-pSicoR与包装质粒pLP1,pLP2,pLP/VSVG共转染HEK293T细胞,获得高滴度慢病毒颗粒。感染K562细胞,检测内源THAP11敲低效果。感染人CD34＋细胞,流式分选GFP阳性细胞,检测原代细胞中THAP11的敲低效果。结果成功构建针对THAP11两个位点的RNAi慢病毒载体siTHAP11-1和siTHAP11-2并获得慢病毒颗粒,病毒滴度检测可达1.8×108TU/ml。感染K562细胞后建立稳定株,THAP11的蛋白水平和mRNA水平均有下调。感染CD34＋细胞效率达30%以上,siT-HAP11-1可下调THAP11mRNA约80%,siTHAP11-2约下调85%。结论成功构建THAP11的RNAi慢病毒载体,包装后的病毒颗粒可有效敲低细胞株及原代细胞中内源性THAP11的表达,为后续研究THAP11对CD34＋细胞的影响奠定基础。     

去泛素化酶USP13在癌症中的研究进展

泛素特异性蛋白酶13(USP13)是USP去泛素化酶家族成员之一,属于半胱氨酸蛋白酶超家族.USP13通过介导底物去泛素化过程,抑制底物泛素-蛋白酶体途径降解,进而参与细胞周期、自噬、天然免疫等多种生理过程的调节.近年来,关于USP13是癌症发生的重要调节因子的报道越来越受到关注.该文系统综述了USP13调控不同癌症的分子机制及研究现状,为靶向USP13治疗相关癌症提供新思路.     

立体定向切除颅内病灶的围手术期护理

立体定向技术指通过定向仪确定手术靶点 ,进而将手术器械导入靶点实施手术的方法。在 CT的导引下结合立体定向技术进行脑肿瘤活检及切除术 ,具有切口小 ,损伤少 ,减少术中出血及术后脑水肿 ,可直接摘除脑内病灶 ,手术效果满意。本组立体定向治疗颅内病灶12例 ,均取得满意的效果。现将护理体会介绍如下。1　临床资料本组病例 12例 ,全部为幕上病变 ,其中男 8例 ,女4例 ,年龄 15～ 70岁 ,平均 38.2岁。其中胶质瘤 7例 ,脑膜瘤 1例 ,转移癌 2例 ,脑内血肿、脑脓肿各 1例 ,患者以局灶症状 (如癫痫、肢体麻木、无力等 )为主。本组 12例全部采用…     

初诊2型糖尿病患者胰岛素强化治疗对血糖控制的影响分析

目的 探究胰岛素强化治疗对初诊2型糖尿病患者的血糖控制效果.方法 选初诊2型糖尿病患者98例;依据入院先后顺序将其分为实验组与参照组,各49例.实验组患者给予胰岛素泵强化治疗,参照组患者给予皮下注射胰岛素降糖,比较两组患者的血糖控制效果.结果 实验组患者治疗后的血糖控制效果优于参照组,血糖达标时间短于参照组,胰岛素使用量少于参照组,低血糖发生率低于参照组,组间比较差异有统计学意义(均P<0.05).结论 对初诊2型糖尿病患者采用胰岛素强化治疗法效果显著,对于后期治疗有明显影响,具有重要的临床实践价值.     

红细胞分化相关基因敲除小鼠对低剂量辐射损伤敏感性的研究

目的：构建红细胞分化相关基因（ EDAG）敲除小鼠并研究其对低剂量辐射损伤的敏感性。方法利用锌指核酸酶技术（ ZFNs）建立EDAG敲除小鼠模型;通过外周血细胞计数、骨髓细胞的DNA损伤和集落形成能力评价低剂量辐射损伤。对野生型及EDAG敲除小鼠进行剂量率为0．31 Gy／min的X线照射,1 min／d,连续照射7 d,小鼠累计照射剂量为2．17 Gy。在X线照射后第1、3、5、7天称重并进行血常规检测（n＝7）;照射后第3天分离小鼠骨髓细胞,利用免疫荧光实验检测DNA损伤标志物p-H2A．x的表达水平（ n＝3）;照射后第5天分离小鼠骨髓细胞,接种集落并于7 d后进行集落计数（ n＝3）。结果成功建立了EDAG敲除小鼠模型并在蛋白水平进行了敲除效果的鉴定;X线照射后第3天,与野生型相比,EDAG敲除小鼠白细胞明显减少,敲除小鼠骨髓细胞DNA损伤标志物p-H2A．x表达水平增加;X线照射7 d后骨髓细胞的集落形成能力降低。结论研究发现EDAG敲除小鼠对低剂量辐射诱导的损伤更加敏感,表现为血细胞数量减少,骨髓细胞成集落能力下降,DNA损伤增加。表明EDAG敲除小鼠作为一种对辐射高度敏感的动物模型,可作为低剂量辐射损伤生物学效应评价的有力工具。     

1例脑膜瘤术后并发多脏器功能衰竭的抢救与护理

多脏器功能衰竭 (MSOF)是指病人因严重创伤、感染、大手术等应激状态下机体出现的 2个以上重要脏器呈累加或连锁形式出现的急性功能衰竭。 2 0 0 2年 3月我科成功抢救了 1例上矢状窦旁脑膜瘤术后并发多脏器功能衰竭的患者。现将护理体会报道如下。1　病例介绍患者 ,女 ,5 4岁 ,因“头痛、头晕 2 0余天” ,CT检查示上矢状窦旁脑膜瘤 ,于 2 0 0 2年 2月 19日收入院 ,于 2 0 0 2年 2月2 6日行上矢状窦旁脑膜瘤切除术 ,手术顺利。术后第 3天 ,出现癫痫发作 ,意识不清 ,同时伴尿少、腹泻。复查CT示 :脑水肿、右顶多处血肿 ,急症行去骨瓣减压…     

细胞角蛋白8 GFP/Puro 双标干涉慢病毒系统的构建及对细胞凋亡的影响

目的构建细胞角蛋白8（CK8）的双标慢病毒干涉载体,获得高滴度慢病毒颗粒,感染HCT116细胞建立稳定株,检测CK8
敲低对细胞凋亡的影响。方法将CK8 的siRNA序列插入慢病毒表达载体GV248,并与包装质粒PMD、SPA共转染293T细
胞,36、48 h分两次收集慢病毒上清,应用流式细胞术检测病毒滴度。获得的病毒感染HCT116细胞,用嘌呤霉素筛选阳性细胞,
Western blotting检测干涉效果。采用Annexin V/PI染色检测干涉CK8对化疗药物顺铂诱导的细胞凋亡的影响。结果与结论
成功构建CK8干涉慢病毒载体并得到干涉稳定株,在HCT116细胞中干涉CK8 使细胞对顺铂引起的凋亡更加敏感。