丙型肝炎病毒非编码区ABC程序酶切分型研究

目的为进一步了解中国是否存在HCV 3b基因及1a、2b和6a基因型感染，建立HCV 5′端非编码区(5′ NCR)不同基因型的基因库。方法分型方法按ABC程序进行，A应用BHH′(BsrBⅠ、HaeⅡ、HinfⅠ)复介内切酶消化5′NCR cDNA，可将不同基因型划分为5组：1a、1b，6a，2a、2b，3a，3b、4a。B应用BstU Ⅰ内切酶鉴别1a、1b。C应用Hae Ⅲ内切酶鉴别2a、2b、3b、4a及6a。电泳检测片段大小。结果(1)la、1b、2a、2b、3a、3b、4a、6a 8种基因型参比品的ABC分型结果表明，该8种基因型获得良好的分型效果。(2)93份HCV RNA阳性患者ABC分型结果表明，1b型感染率占66．67％，2a型18．28％，1b／2b型、3b型及2b型均为3．23％，2a／2b型和1b／2a型各为2．15％，1a型1．08％。结论结果表明应用HCV 5′-NCR ABC分型技术既保证了HCV RNA检测的灵敏度，又能完成1a-6a型中的8种基因型的鉴别。     

中国HCV5''-非编码区复合酶切分型及其3b基因型序列分析

目的研究中国丙型肝炎病毒(HCV)不同基因型感染分布情况,并对3b序列进行分析。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术扩增HCV5’NCR 1a、1b、2a、2b、3a、3b、4a、6a不同基因型的cDNA及187份HCV RNA阳性样品中cDNA。A应用BHH(BsrBⅠ、HaeⅡ、HinfⅠ)复合内切酶消化5‘-NCR cDNA,B应用BstUⅠ消化,C应用HaeⅢ消化,电泳检测片段大小。结果187例HCV RNA阳性患者A B C分型结果表明,1b型感染率占67．38％,2a型12．30％,1b/2a型为5．88％,3b型5．35％,2b型3．21％,2a/2b、1b/2b型各为2．14％,1a型1．07,6a型0．54％。3份3b基因型5’-NCR A-T克隆测序结果表明,3株3b型之间同源性为99．54％～100％。其中chiKQ50与G1514395 3a株为96．28％与G1676877 3b株同源性为98．6％,与1a型为93．49％,与1b型为94．88％,与2a型为91．63％,与2b型为89．30％,与4a型为95．35％,与6a型为93．4％,结论研究结果表明该项分型技术既保证了RT-PCR检测灵敏度,又具有良好的分型效果。提示：该分型方法不仅适合中国HCV基因型检测,对亚洲及欧洲和非洲HCV分型研究也具有一定的参考价值。     

中国HCV5′-非编码区复合酶切分型及其3b基因型序列分析

目的　研究中国丙型肝炎病毒 (HCV)不同基因型感染分布情况 ,并对 3b序列进行分析。方法　采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术扩增HCV5’NCR 1a、1b、2a、2b、3a、3b、4a、6a不同基因型的cDNA及 187份HCVRNA阳性样品中cDNA。A应用BHH (BsrBI、HaeⅡ、HinfI)复合内切酶消化 5′ NCRcDNA ,B应用BstUⅠ消化 ,C应用HaeⅢ消化 ,电泳检测片段大小。结果　 187例HCVRNA阳性患者ABC分型结果表明 ,1b型感染率占 6 7 38% ,2a型 12 30 % ,1b/ 2a型为5 88% ,3b型 5 35 % ,2b型 3 2 1% ,2a/ 2b、1b/ 2b型各为 2 14 % ,1a型 1 0 7,6a型 0 5 4 %。 3份 3b基因型 5’ NCRA T克隆测序结果表明 ,3株 3b型之间同源性为 99 5 4 %～ 10 0 %。其中chiKQ5 0与GI5 14 395 3a株为 96 2 8%与GI6 76 8773b株同源性为 98 6 % ,与 1a型为 93 4 9% ,与 1b型为94 88% ,与 2a型为 91 6 3% ,与 2b型为 89 30 % ,与 4a型为 95 35 % ,与 6a型为 93 4 % ,结论　研究结果表明该项分型技术既保证了RT PCR检测灵敏度 ,又具有良好的分型效果。提示 :该分型方法不仅适合中国HCV基因型检测 ,对亚洲及欧洲和非洲HCV分型研究也具有一定的参考价值     

益生菌治疗的实验性结肠炎中调节性T细胞的作用

目的评价不同剂量益生菌对大鼠实验性结肠炎的疗效,研究治疗后全身及肠道局部调节性T细胞(Tr)的变化情况,探讨益生菌作用机制。方法建立三硝基苯磺酸(TNBS)实验性结肠炎大鼠模型。所用益生菌为双歧三联活菌(商品名:培菲康)。设阴性对照组、泼尼松组、柳氮磺胺吡啶 (SASP)组、益生菌小、大剂量组(剂量分别为150和300 mg·kg-1·d-1)、益生菌+泼尼松或SASP(益生菌剂量为150 mg·kg-1·d-1)组。治疗2周后组织学积分评定疗效;流式细胞仪检测各组外周血、脾脏和结肠上皮内CD4+CD25+及CD8+CD28-两种Tr比例变化。采用t检验行统计学分析。结果组织学评分显示大剂量益生菌对实验性结肠炎有效(2．2±0．8比3．5±0．7,P<0．05),而小剂量益生菌单独作用无明显疗效,联合泼尼松或SASP治疗比单独应用疗效更强;大剂量益生菌治疗后CD4+ CD25+Tr比例在外周血(3．4±0．6比11．7±4．7,P<0．05)及脾脏(2．1±1.9比10．3±3．1,P<0．05) 中下降,在结肠内上升(36．6±15．0比7．9±4．7,P<0．05);CD8+CD28-Tr则相反,在外周血及脾脏中上升(91．7±4．5比59．0±4．2,97．3±0．1比88．2±6．9,P<0．05),在结肠内下降(42．2±6．0比68．5 ±8．6,P<0．05)。Tr的这种变化与泼尼松或SASP治疗存在一定差异。结论益生菌单独大剂量或小剂量联合泼尼松或SASP治疗TNBS诱导的结肠炎有效,CD4+CD25+和CD8+CD28-Tr在发挥疗效过程中可能起一定作用。     

刺五加GAPDH基因组DNA的克隆与分析

目的克隆刺五加GAPDH基因的DNA及启动子序列,并进行生物信息学分析。方法以刺五加的基因组DNA为模板,采用PCR和TAIL-PCR技术克隆GAPDH基因的全长DNA序列及5’端上游启动子序列,并对其进行生物信息学分析。结果克隆到长4 103 bp的刺五加GAPDH基因全长DNA及启动子序列。该基因共包含12个外显子和11个内含子,其剪切均符合GT-AG原则。刺五加GAPDH的启动子片段长1 304 bp,转录起始位点A位于起始密码子ATG上游61 bp处。启动子除含有TATA-box、CAAT-box等基本元件外,还有诸多与激素应答、光响应和胁迫信号等有关的顺式作用调控元件。结论首次克隆到刺五加GAPDH基因的全长DNA及启动子序列,为深入研究GAPDH基因结构特征与功能奠定基础。     

胃肠道间质瘤4例报道

间质瘤主要发生在胃肠道,指在光镜下主要由梭形细胞和上皮样细胞构成,某些免疫组化阳性的肿瘤。本文对4例胃肠道间质瘤手术病人的临床表现、影像学特点、肿瘤大小等进行总结。     

调节性T细胞在大鼠TNBS诱发实验性结肠炎中作用的研究

目的　探讨CD4+ CD2 5+ 和CD8+ CD2 8-调节性T细胞在TNBS(2 ,4,6-三硝基苯磺酸 )诱发的大鼠实验性结肠炎的外周血、脾脏、结肠的改变及其作用。方法　建立TNBS实验性结肠炎大鼠模型 ,设对照组、建模后第一周和第三周三组 ,用流式细胞仪检测各组外周血、脾脏和结肠黏膜上皮细胞内单个核细胞中CD4+ CD2 5+ 和CD8+ CD2 8-调节性T细胞比例的变化。结果　成功建立TNBS大鼠实验性结肠炎模型 (n =15 )。结肠部位CD8+ CD2 8-细胞在建模后第一周时较对照组均明显增高 [(12 7± 5 4) %vs(3 87± 3 7) % ,P <0 0 1]。在外周血、脾和结肠中CD8+ CD2 8-T细胞比例在建模第三周时均较对照组明显增加 [外周血 :(14 4± 5 5 ) %vs(6 5± 4 6) % ,脾脏 :(18 7± 4 9) %vs(7 2± 5 7) % ,结肠 :(16 3± 4 9) %vs(3 87± 3 7) % ,P <0 0 1] ,其中以结肠部位增加最高 ,同其它两部位比较有统计学差异 (2 8± 0 6vs 1 1± 0 4,2 8± 0 6vs 1 5± 0 4,P <0 0 5 )。在第一周 ,CD4+ CD2 5+ T细胞在结肠部位较对照组增加 [(13 6± 6 1)vs(5 7± 4 2 ) ,P <0 0 5 ] ,于第三周回落至对照组水平。结论　CD4+ CD2 5+ 和CD8+ CD2 8-T细胞在TNBS实验性结肠炎大鼠模型中较正常对照组有明显增加 ,但增加的部位和时间点     

非酒精性脂肪肝炎发病机制的研究进展

随着发病率的逐年增加及被认为可能是发展成终未期肝病的一个主要病因,非酒精性脂肪肝病和非酒精性脂肪肝炎(NASH)已越来越受到重视,本病发生的风险因素已基本明确,它们分别是:2型糖尿病、45岁或以上,体重指数≥26及AST/ALT比值<1。本文着     

刺五加转录组和差异性表达分析

目的获得刺五加Eleutherococcus senticosus转录组数据库和差异表达基因。方法采用皂苷高含量组和低含量组2个样本作为受试材料,采用二代测序方法中的Illumina Hi Seq 4000进行转录组测序,并进行系统的生物信息学分析。结果共获得8.34 Gb数据,拼接得到77 087条Unigenes,与5个基因数据库进行比对,可归类于55个Geneontology(GO)分类中,涉及到116个KEGG标准代谢通路。通过差异性分析发现,差异性表达基因共530条,其中上调基因占42.08%,下调基因占57.92%,相差较大。进行GO和Pathway富集,得到408个GO注释和40个代谢通路。结论对刺五加转录组进行拼接、组装和功能注释,得到大量转录本信息,为刺五加分子生物学研究提供了宝贵的基因组数据库资源。