低氧环境可体外促进人诱导多能干细胞分化为拟胚体

目的 探讨人诱导多能干细胞向拟胚体分化过程中,生理性低氧环境在拟胚体悬浮和贴壁阶段的影响及其相关机制。方法 本研究中拟胚体悬浮阶段分为悬浮常氧组（21% O2）和悬浮低氧组（5% O2）,贴壁阶段分为贴壁常氧组（21% O2）、贴壁低氧组（5% O2）、贴壁低氧组＋HIF-1α抑制剂Echinomycin。首先采用免疫荧光法鉴定人诱导多能干细胞的多能性,人诱导多能干细胞消化后分别在21%氧气和5%氧气条件下悬浮培养5 d,利用显微镜观察悬浮阶段拟胚体的形成和形态变化,5 d后检测拟胚体中三胚层标记基因的表达情况。接着分别取等量的拟胚体接种到明胶包被的培养皿,继续在21%和5%氧气条件下培养2 d,观察贴壁阶段拟胚体的粘附性能和粘附后向外周扩增速度的差异,检测低氧信号通路相关的HIF-1α、β-catenin和VEGFA的表达情况,随后在5%氧气条件下使用HIF-1α特异性抑制剂Echinomycin后,再次检测低氧信号通路相关的HIF-1α、β-catenin和VEGFA的表达情况。结果 常氧组和低氧组的拟胚体均具有三胚层分化的潜力。与常氧培养组相比,低氧组悬浮拟胚体周围的凋亡碎片明显减少,且较早出现囊性拟胚体,获得的拟胚体大小更加均匀一致。此外,低氧组的拟胚体贴壁数量明显高于常氧组（P<0.05）,拟胚体贴壁后向外生长的速度明显快于常氧组（P<0.05）。低氧组HIF-1α的mRNA未显著上调（P>0.05）,而β-catenin和VEGFA的mRNA显著上调（P<0.05）;在蛋白质水平,低氧信号通路相关的HIF-1α、β-catenin和VEGFA的表达均上调（P<0.05）。低氧组使用HIF-1α特异性抑制剂Echinomycin后,低氧信号通路相关的HIF-1α、β-catenin和VEGFA的蛋白质表达均下调（P<0.05）。结论低氧条件不影响拟胚体的三胚层分化潜力。生理性低氧可以促进悬浮拟胚体的形成和成熟,并且能增强拟胚体的贴壁和贴壁后增殖性能,初步证实通过激活HIF-1α/β-catenin/VEGFA信号通路,提升人诱导多能干细胞的分化能力。     

颈椎曲度与脊髓型颈椎病的关系研究

目的:探讨颈椎曲度与脊髓型颈椎病的关系.方法:选取2018年1月至2020年1月在郑州大学第一附属医院接受颈椎X线检查的114例脊髓型颈椎病患者(脊髓型颈椎病组)和同期在医院进行颈椎X线检查的61例健康体检者(非颈椎病组)进行研究.采用Borden法在拍摄的侧位X线片上测量颈椎曲线深度(cervical curve d...     

两种不同手术方式治疗难复性寰枢椎脱位并颅底凹陷效果对比研究

目的 评价经颈前咽前路松解结合枕颈融合内固定术与单纯后路枕颈融合内固定术治疗难复性寰枢椎脱位并颅底凹陷的临床效果.方法 回顾性分析2015-01—2019-06郑州大学第一附属医院收治的32例难复性寰枢椎脱位并颅底凹陷患者的临床资料,按手术方式分为经颈前咽前路松解结合枕颈融合内固定术组(前后路联合组)和单纯后路枕颈融合...     

两种肥胖评定途径下不同性别冠心病患者冠状动脉病变情况的比较

目的探讨以体重指数（BMI）评定的全身性肥胖及以腰围（WC）评定的腹型肥胖的不同性别冠心病患者病变情况的差别。方法收集2010年11月至2011年7月心内科住院的临床疑诊或确诊冠心病的患者451例,患者入院后全部测量身高、体质量、腰围,计算BMI,之后全部行冠状动脉造影检查。分析2种肥胖评定标准下不同性别冠心病患者冠状动脉病变支数、Gensini评分及病变类型的差异。结果有腹型肥胖的男性、女性患者其冠心病比例分别是72．3％、92．1％,与无腹型肥胖者相比有差异。男性冠心病患者中,有腹型肥胖者其心肌梗死的比例、冠状动脉双支病变组、多支病变组及病变血管Gensini评分与无腹型肥胖患者比较有差异。有腹型肥胖的女性冠心病患者冠心病类型、冠脉病变支数及Gensini评分较无腹型肥胖的患者无差异。BMI评定的全身性肥胖在上述分组中,不论男性还是女性,均无差异。结论腹型肥胖对于冠心病尤其是男性冠心病患者是一个独立的危险因素,护理人员应将腰围纳入入院患者常规测量的人体学参数中。     

兔胫骨骨延长模型在低强度脉冲超声刺激条件下的骨再生与成熟

背景：实验证实,低强度脉冲超声有促进骨折愈合的作用。但低强度脉冲超声对骨折愈合早期骨质再生成熟的影响及其相关的作用机制仍不十分清楚。 目的：创新性提出低强度脉冲超声能够在兔胫骨骨延长动物模型牵拉成骨早期骨再生成熟中发挥正效效应的理论假设,并期望以超声干预与不干预进行对照比较予以验证。 方法：36只成年健康新西兰兔随机数字表法分为超声治疗组和对照组,每组18只。所有动物均行胫骨中段截骨,以Orthofix M103型迷你外固定架延长器固定,术后7 d以0.5 mm/12 h延长10 d,总延长长度为10 mm,超声治疗组在延长完成后以低强度脉冲超声骨折治疗仪治疗,20 min/d,1次/d,对照组不给予低强度脉冲超声治疗。治疗4,8,12周后,X射线评定胫骨骨折断端愈合程度,采用Image J图像分析软件分析计算骨痂生成率;延长区新骨作苏木精-伊红染色、Masson三色染色、VG染色后光镜下组织学分析,并在显微镜下测新骨占总骨痂的面积。 结果与结论：36只兔均进入结果分析。治疗4周后对照组仅见外骨痂连接形成骨桥,骨痂区密度低,还可见部分骨痂缺如;超声治疗组骨早期再生成熟优于对照组,表现在两断端骨痂影密度增高,数量增多,骨痂影由两端向中央生长,被密度高的骨痂取代,外骨痂已开始被吸收,骨痂充满延长区,密度增高增粗,骨折处皮质骨密度接近正常皮质骨,骨痂生成率明显提高(P < 0.05),与8,12周无差异。组织学分析显示,超声治疗组治疗4,8,12周时新骨形成早于对照组,治疗4周新骨占总骨痂面积的百分比大于对照组,治疗8,12周后两组新骨占总骨痂面积的百分比无差别。提示低强度脉冲超声可促进新骨形成,增加骨痂面积,在兔胫骨骨延长动物模型牵拉成骨后的骨再生成熟中有促进作用。     

槲皮素对高糖诱导血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:研究槲皮素(quercetin)对高糖(HG)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用,从而探讨其对糖尿病血管并发症的治疗作用及机制.方法:利用组织贴块法体外培养sD大鼠主动脉血管平滑肌细胞,实验分为正常糖组、高糖组、高糖+槲皮素不同浓度组.MTT法检测各组细胞增殖能力;流式细胞术分析各组细胞周期变化;Western-blot法检测细胞细胞周期调控蛋白CyclinD1、CyclinE的表达.结果:槲皮素呈浓度依赖性抑制高糖诱导的大鼠VSMC的增殖;明显降低细胞的S期数目百分比(P<0.05),增加G0/G1期数目百分比(P<0.05);同时,槲皮素治疗组大鼠CyclinD1、CyclinE蛋白质水平下调(P<0.05).结论:从细胞分子水平说明槲皮素可能通过降低CyclinD1、CyclinE的表达,阻止细胞进入s期,减少有丝分裂来发挥时高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用.     

婴幼儿心室辅助泵——20mL罗叶泵体外测试平台的建立和性能研究

目的 设计并制作基于婴幼儿心室辅助泵——罗叶泵的体外测试平台,分别完成20 mL婴幼儿罗叶泵的流体性能实验和耐疲劳实验。方法 将罗叶泵驱动装置、20 mL婴幼儿罗叶泵、前负荷腔、前负荷压力传感器、后负荷腔、前负荷压力传感器、心电监护器、阻尼器和流量计等按不同的实验目的组装成不同的测试平台,流体温度控制为37 ℃,分别用来完成20 mL婴幼儿罗叶泵的流体性能实验和耐疲劳实验。结果 所制作的流体性能实验平台能较好的模拟人体前后负荷;在固定泵输出压力时,测量了20 mL婴幼儿罗叶泵泵频率与泵前压力（前负荷）、泵后压力（后负荷）和流量的关系;所组装的耐疲劳实验平台能够测试罗叶泵的耐疲劳性能;20 mL婴幼儿罗叶泵在连续搏动70 d后,其形变率仅为4 %。结论 所组装的搏动泵测试平台能测试20 mL婴幼儿罗叶泵的流体性能和耐疲劳性能;所制作的20mL婴幼儿罗叶泵具有较好的稳定性和耐疲劳性。 更多还原     

脉动式张应力环境下培养组织工程血管的初步实验

目的探讨脉动式张应力环境下,在生物反应器内进行组织工程血管（TEBV）培养的可行性。方法从人脐动脉获取血管平滑肌细胞（VSMC）,经体外培养扩增后接种到聚乙醇酸（PGA）支架并置于生物反应器内进行三维培养。实验组利用气动式左心循环辅助泵对VSMC施加模拟人体内血管环境（压力120mmHg,1mmHg=0．133kPa,频率60次／rain）的脉动式张应力作用。对照组无张力环境下进行三维培养。2周后收获TEBV分别行扫描电镜（SEM）检测、组织切片HE染色和Masson染色。结果实验组TEBV外观色泽鲜亮,具有一定厚度和弹性,能自我维持管腔形状。SEM显示实验组TEBV管壁表面光滑平整,横切面有丰富的细胞外基质（ECM）,ECM分布均匀,把PGA完全包裹。HE染色管壁均匀致密,ECM及细胞的排列具有一定方向性,其中含有未降解的PGA碎片。Masson染色管壁胶原纤维丰富。对照组TEBV外观色泽暗淡,管壁薄,弹性差,从支架取下后管腔塌陷。SEM显示管壁表面欠光滑,横切面上ECM含量少,大部分PGA没有被包裹。组织切片染色管壁结构疏松,ECM和胶原纤维含量较少,层次感差。结论在生物反应器内的脉动式张应力环境下,可培养出具有良好形态结构的组织工程血管样组织。     

基于罗叶泵的搏动式组织工程培养体系的构建

目的:设计并制作基于心室辅助泵-罗叶泵的搏动式组织工程培养体系,并完成其基本性能测试。方法:根据血管组织工程的需求进行生物反应器的设计,生物反应器主体部分由玻璃构成。启动罗叶泵,调节罗叶泵的输出压力和频率,利用心电监护仪监测生物反应器内流体压力的大小和频率,利用流量计测量其实际流量。结果:生物反应器的主体部分由玻璃制备而成。所组装的培养系统经14d运行无松脱、无渗漏。心电监护仪显示罗叶泵产生的压力波形为脉冲波。当罗叶泵的输出频率固定时,循环管路中的实测压力和流量随罗叶泵输出压力的增加而增加。当罗叶泵的输出压力固定时,循环管路的实测压力和流量随输出频率的增大而增加。结论:本研究所开发的组织工程培养体系稳定性好,可产生脉动刺激,可初步应用于血管组织工程三维培养。通过调节输出压力、频率等参数,可产生不同的流体规律,可用于调节心血管组织工程的微环境。