miR-205对Ⅱ型子宫内膜癌细胞生物学行为的调控作用研究

目的 通过实验研究下调miR-205的表达对Ⅱ型子宫内膜癌细胞增殖、侵袭力的影响及对裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用,以探讨将miR-205作为Ⅱ型子宫内膜癌的靶向治疗的潜在靶点的可能性。方法 利用脂质体Lipofectamine 2000将miR-205抑制物转染入Ⅱ型子宫内膜癌细胞HEC-1-B中;利用Q-RT-PCR检测转染后各组细胞中miR-205的表达情况;CCK-8检测细胞增殖能力变化情况;Transwell实验检测穿膜细胞数变化情况;利用BALB/c免疫缺陷裸鼠建立Ⅱ型子宫内膜癌皮下移植瘤模型,并测量各组移植瘤的瘤体重量。结果 Q-RT-PCR结果显示,转染miR-205抑制物组细胞中的miR-205表达水平显著低于无关序列组和空白对照组（P<0.01）;下调miR-205表达量对HEC-1-B细胞的增殖和侵袭力均有抑制作用,并能显著降低裸鼠移植瘤的瘤体体积及重量（P<0.01）。结论 在Ⅱ型子宫内膜癌中,miR-205表现出癌基因的生物学行为,下调miR-205的表达可以显著降低Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-B细胞的增殖侵袭能力,miR-205的过表达可能参与了Ⅱ型子宫内膜癌的发生、发展及侵袭转移过程,miR-205将有望成为Ⅱ型子宫内膜癌的生物靶向治疗的新靶点。     

苦杏仁苷调控PI3K/Akt/mTOR通路对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

目的研究苦杏仁苷对子宫内膜癌细胞RL95-2及HEC-1B增殖、侵袭及凋亡的影响。方法使用8、16、32、64和128mg/L浓度苦杏仁苷处理RL95-2、HEC-1B细胞24、48和72h后,采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力并计算苦杏仁苷的半数抑制浓度(IC50);Transwell试验检测苦杏仁苷对细胞侵袭能力的影响;流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;Western blot试验检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白以及PI3K/Akt/m TOR信号通路相关蛋白表达情况。结果苦杏仁苷呈浓度及时间依赖性抑制子宫内膜癌RL95-2、HEC-1B细胞生长活性,48h时半数抑制浓度(IC50)约为40mg/L;苦杏仁苷能抑制RL95-2、HEC-1B细胞穿膜细胞数[(227.67±11.06)个比(459.33±24.75)个,(188.67±11.14)个比(412.33±14)个,P均0.01];经苦杏仁苷处理后RL95-2、HEC-1B细胞凋亡率升高[(7.85±0.71)%比(1.49±0.08)%、(8.55±0.69)%比(1.61±0.13)%,P均0.01],凋亡蛋白Bcl-2表达下降[(0.19±0.03)比(0.36±0.04)、(0.25±0.04)比(0.39±0.05),P均0.01],Bax表达升高[(0.37±0.06)比(0.18±0.04)、(0.41±0.06)比(0.21±0.03),P均0.01];苦杏仁苷能显著下调RL95-2、HEC-1B细胞的PI3K[(0.42±0.04)比(0.78±0.05)、(0.36±0.05)比(0.63±0.03),P均0.01]、Akt[(0.73±0.05)比(0.92±0.05)、(0.65±0.03)比(0.86±0.04),P均0.01]及m TOR[(0.25±0.04)比(0.93±0.06)、(0.34±0.05)比(0.88±0.04),P均0.01]磷酸化水平,抑制PI3K/Akt/m TOR通路活化。结论苦杏仁苷通过抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路活化,促进子宫内膜癌RL95-2、HEC-1B细胞凋亡,降低其增殖活性,抑制细胞侵袭功能,从而发挥抗肿瘤作用。     

miR-375在子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的生物学功能

目的:探讨miR-375在Ⅱ型子宫内膜癌中的表达及对HEC-1-B细胞增殖、凋亡的影响.方法:miRNA芯片分析Ⅱ型子宫内膜癌miRNA表达谱.利用lipofectamine2000转染HEC-1-B细胞.实时荧光定量PCR检测转染后miR-375的表达.CCK-8检测转染后细胞增殖能力的改变.流式细胞仪检测细胞转染效率及转染后细胞凋亡情况.结果:miR-375在Ⅱ型子宫内膜癌组织中低表达.转染效率达73.43％.转染后实验组miR-375表达量较NC组和对照组明显增加(P＜0.05).实验组较NC组生长明显受抑(P＜0.05).实验组较NC组、对照组凋亡明显增加(P＜0.05).结论:初步证明miR-375抑制Ⅱ型子宫内膜癌细胞增殖并促进凋亡,可能成为Ⅱ型子宫内膜癌基因治疗的靶点.     

宫颈癌预后相关长链非编码RNA筛选及其临床意义研究

目的 通过筛选宫颈癌预后相关长链非编码RNA(lncRNA),检测其在宫颈癌组织中的表达水平，并探讨其临床意义。方法 利用“edgeR”包筛选到与患者生存相关的差异表达lncRNA-AP001528.2。采用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测AP001528.2的表达，并分析其与临床病理特征的相关性；生存曲线分析患者术后5年生存情况，Log-rank检测比较生存差异；Cox比例风险回归模型分析预后不良的独立危险因素；ROC曲线评价AP001528.2对宫颈癌的诊断价值。结果 宫颈癌组织中AP001528.2表达升高，且与FIGO分期、宫颈浸润深度和淋巴结转移相关；高表达AP001528.2的宫颈癌患者术后5年总生存率降低；FIGO分期、宫颈浸润深度、淋巴结转移和AP001528.2表达与宫颈癌患者生存率相关，且后三者是宫颈癌患者的独立危险因素。AP001528.2表达诊断宫颈癌ROC曲线下面积为0.84,敏感度为96.7%,特异度为60.7%。结论 AP001528.2可能是宫颈癌预后的独立不良因素之一，在宫颈癌的诊断中有一定的临床应用价值。