双调控溶瘤腺病毒携带SEA基因靶向鼠膀胱癌的表达

目的:研究hTERT和HIF启动子双调控的溶瘤腺病毒能否感染鼠膀胱癌细胞并表达治疗基因,为动物实验提供依据.方法:以不同浓度溶瘤腺病毒感染鼠膀胱癌细胞,生物倒置显微镜下动态观察细胞形态变化,RT-PCR检测SEA在细胞内mRNA表达,Western blot检测SEA蛋白表达.结果:镜下可见细胞感染腺病毒并最终裂解,RT-PCR和Western blot分别检测到实验组mRNA和蛋白的表达.结论:携带SEA基因的hTERT/HIF双调控溶瘤腺病毒可在鼠膀胱癌细胞内复制增殖并表达SEA基因,可用于治疗鼠膀胱癌的动物实验研究.     

中西医结合治疗慢性鼻炎疗效观察（附1200例报告）

我科自1992年以来，采用中西医结合方法治疗慢性鼻炎1200例，疗效极为显著，现报道如下。一、临床资料（一）西医组：1190例，男645例，女545例；年龄6～71岁，平均33．5岁；病程2个月～25年，平均病程4．1年。其中慢性单纯性鼻炎700例；慢性肥厚性鼻炎（轻、中度）490例。（二）中西医结合组；1200例，男647例，女553例；年龄6～71岁，平均年龄33.8岁；病程2个月～27年；平均病程4．5年。其中慢性单纯性鼻炎704例；慢性肥厚性鼻炎496例。二、研究方法（一）诊断标准1．慢性单纯性鼻炎（1）病史：有急性鼻炎反复发作史。（2）症状；鼻塞时轻…     

术中尿外渗导致腹腔高压综合征的诊断及治疗

目的 探讨泌尿外科术中尿外渗导致的腹腔高压综合征的诊断和治疗原则。方法 2013年5月—2020年8月诊治泌尿外科手术中尿外渗所导致的腹腔高压综合征患者19例,均给予内科综合治疗,其中2例同时行开放手术减压,对比治疗前后心率、血压、呼吸、动脉血氧分压、尿量、肾功能和腹腔压力的变化。结果 19例患者除1例死亡外,其余18例通过综合治疗均获治愈。治愈患者治疗前动脉血氧分压为(59.56±3.34) mm Hg、血肌酐为(164.94±75.10)μmol/L、尿量为(0.83±0.24 )mL/(kg·h)、腹腔内压为(23.61±2.77) mm Hg;治疗后上述各指标分别为(91.61±3.32) mm Hg、(160.22±76.01)μmol/L、(1.59±0.44) mL/(kg·h)、(14.06±3.92) mm Hg。均获明显改善,(t=23.07、5.63、8.67、12.18,P值均＜0.05)。结论 及时的内科综合治疗和手术减压是治疗术中尿外渗导致的腹腔高压综合征的有效方法,减少术中尿外渗才能避免泌尿外科腹腔高压综合征的发生。     

经新型阴囊内窥镜下绿激光附睾囊肿切除术的临床疗效观察

目的探讨经新型阴囊内窥镜下绿激光附睾囊肿切除术的安全性和有效性。方法选取2021年4月至2022年5月在徐州市中心医院收治的35例单侧附睾囊肿患者的临床资料。采用随机数字表法将患者分成经新型阴囊内窥镜下绿激光附睾囊肿切除术组(A组, 18例)和开放附睾囊肿切除术组(B组, 17例)。分析两组患者的手术切口大小、手术时间、术后阴囊疼痛程度、术后阴囊水肿时间以及术后住院天数。结果两组患者均顺利完成手术。A组患者的手术切口、视觉模拟疼痛评分(VAS)小于B组, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。A组患者的术后阴囊水肿较B组症状轻, 差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者术后均未出现阴囊血肿、阴囊感染以及切口愈合延迟等并发症。1个月后复查阴囊彩超, A组患者出现1例轻度睾丸鞘膜积液, 随访6个月积液无进展, 所有患者均未见附睾囊肿复发。结论经新型阴囊内窥镜下绿激光附睾囊肿切除术安全有效, 具有手术微创、术后疼痛轻以及术后阴囊水肿消退快的特点, 适合临床推广应用。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白表达及条件优化

目的:优化肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)蛋白表达条件,探索包涵体复性和纯化方法。方法:用IPTG诱导pGEX-6P-1/TRAIL在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物经稀释复性和透析复性法使GST-rTRAIL蛋白恢复天然构象;并运用Glutathione-Superflow Resin亲和层析柱纯化GST-rTRAIL目的蛋白,Western blotting分析目的蛋白。结果:GST-rTRAIL在大肠杆菌BL21(DE3)中表达约40 kDa的蛋白条带,与预期值相符,该蛋白以包涵体形式存在;0.2 mmol.L-1IPTG 37℃诱导8 h时,全菌蛋白表达量最高;复性后的蛋白溶液经Glutathione-Superflow Resin亲和层析纯化获得纯的目的蛋白,Western blotting显示能被鼠抗GST的标签抗体识别。结论:本实验结果显示IPTG浓度为0.2 mmol.L-1,37℃诱导8 h,GST-rTRAIL全菌蛋白的表达量最高;GST-rTRAIL蛋白包涵体经稀释复性、透析复性和Glutathione-Superflow Resin亲和层析柱分离纯化获得目的蛋白,为进一步研究其生物学功能及临床应用奠定基础。     

双调控溶瘤腺病毒对膀胱肿瘤EJ细胞的杀伤作用

目的：构建由人端粒酶启动子（hTERT）和缺氧诱导因子启动子（HIF）双向调控的携带SEA基因的选择性增殖腺病毒,体外试验其对肿瘤的杀伤功能。方法：将hTERT和HIF分别酶切、连接在缺陷型腺病毒的穿梭质粒的E1A和E1B序列前,调控E1A和E1B蛋白的表达,共同转染人胚肾293细胞进行同源重组,获得双调控选择性复制性腺病毒,进行PCR鉴定。获取病毒转染膀胱肿瘤细胞EJ,MTT检测细胞存活和生长情况。结果：淋巴细胞与肿瘤细胞共培养12、24、48h,实验组肿瘤细胞明显少于对照组;MTT检测实验组在12、24、48h活细胞数低于对照组。结论：成功构建了携带SEA基因的选择性腺病毒,且其可表达目的基因,对膀胱肿瘤细胞有一定的杀伤作用。     

手术治愈反复性鼻出血36例体会

我科自1989年2月～1996年6月用手术方法治疗反复性鼻出血36例，效果均甚满意。现总结如下。1临床资料与方法1．1病例资料：本组36例，均为反复鼻出血者，出血部位均在黎特氏区。其中男性22例，女性14例；年龄14～71岁，平均41．5岁；病程3个月～10年，平均病程4．9年；出血次数3～21次，平均7．8次；每次出血量10ml～110ml，平均38.6ml。出血诱因为劳累者10例，情绪激动者9例，高血压者5例，鼻中肠粘膜糜烂者6例，遗传性出血性毛细血管扩张症2例，原因不明者名倒。1．2手术方法1.2.1术前术创剪鼻毛，并用1灿新法尔灭消房术区，用1％地卡因（…     

自拟清窦散治疗副鼻窦炎临床观察 --附 1500例资料分析

目的观察自拟中药清窦散治疗急、慢性副鼻窦炎的临床疗效.方法将患者 2990例随机分为治疗组与对照组,两组均按常规予相应的西医处理,治疗组加服清窦散.结果治疗组治愈率高于对照组.结论在西医常规处理基础上加服清窦散治疗急、慢性副鼻窦炎均能收到良好疗效.     

小干扰RNA对小鼠淋巴细胞cbl-b基因表达的抑制作用

目的 设计合成及筛选自身免疫关键基因--cbl-b (Casitas B-cell lineage lymphoma-b,cbl-b)基因小分子干扰RNA(siRNA).方法 应用RNA设计软件,模拟cbl-b小鼠cbl-b mRNA二级结构,设计并合成针对cbl-b mRNA的4对21核苷酸(nt)siRNA,96孔板转染小鼠淋巴细胞,以空白及转染非特异siRNA(与cbl-b mRNA无同源性的21nt siRNA)作为对照,应用蛋白免疫印迹(Western blot)方法 检测小鼠淋巴细胞cbl-b蛋白表达.结果 cbl-b基因siRNA工作浓度为100nmol/L时转染小鼠淋巴细胞转染率最高,可达(87.48±1.94)%,平均荧光强度最强,可达33.09±1.77.与对照相比,转染cbl-b siRNA的小鼠淋巴细胞蛋白表达明显下调,以siRNA-4最显著,抑制率达85%,转染非特异性siRNA的小鼠淋巴细胞cbl-b蛋白表达水平无明显变化.结论 得到cbl-b siRNA转染小鼠淋巴细胞最佳转染条件,成功筛选能高效抑制cbl-b蛋白表达的siRNA-4,其有效抑制时间约为48h,有望通过沉默cbl-b基因直接活化淋巴细胞,增强机体主动免疫杀伤肿瘤细胞.

Abstract：

Objective To design, synthesize screen small interfering RNA (siRNA) targeting to Casitas B-cell lineage lymphoma-b (cbl-b).Methods Four pairs of 21 nucleotide siRNAs directed to Cbl-b mRNA were designed and synthesized by utilizing RNA design software to simulate secondary structure of cbl-b mRNA in mice. These siRNAs were respectively transfected into lymphocytes in 96 shadows mask by oligofectamine package, and untreated and unspecific siRNA-transfected lymphocytes served as controls. The expression of cbl-b protein was detected by Western blotting.Results When the work concentration of siRNA was 100 nmol/L, transfection efficiency of lymphocytes was highest, up to (87.48±1.94)% and the mean fluorescence intensity was strongest, up to 33.09±1.77. Compared with bland controls, the expression of cbl-b protein level was markedly down-regulated in siRNA-transfected lymphocytes. The inhibitory rate of the siRNA of the target-4 was highest, up to 85%. The expression of cbl-b protein in unspecific siRNA-transfected lymphocytes had no significant changes.Conclusion siRNA-4, which can highly effectively inhibit protein expression of cbl-b gene, was screened successfully, and its inhibition effect can maintain near 48 h. It is hopeful that the cbl-b siRNA will activate lymphocytes directly by cbl-b gene silencing, and kill tumor by activate immunization.     

染色质调节因子相关的lncRNA肾透明细胞癌预后模型的构建和验证

目的 构建染色质调节因子（CR）相关长链非编码RNA（lncRNA）的肾透明细胞癌（ccRCC）预后模型,提高ccRCC的预后管理。 方法 从TCGA数据库下载ccRCC的转录组数据和临床数据,并通过“caret”R包将ccRCC样本以7∶3的比例分为训练集（166例）和验证集（71例）。基于“DESeq2”R包筛选出差异表达的CR及相关的lncRNA。构建CR与lncRNA的共表达网络,并筛选出相关系数|rs|＞0.3且P＜0.05的差异lncRNA。利用单因素Cox、Lasso和多因素逐步Cox回归分析,构建CR相关的lncRNA预后模型。计算训练集和验证集样本的风险评分,根据风险评分的中位数将ccRCC患者分为高、低风险组。K-M曲线和受试者操作特征（ROC）曲线评价模型,单因素和多因素Cox回归分析评估风险评分的独立预测性能。“DynNom”和“shiny”R包开发在线预测工具。单样本基因集富集分析探索风险评分与免疫微环境及免疫检查点的关系。 结果 本研究最终纳入237个肿瘤样本和72个癌旁正常组织样本,鉴定了1 025个CR相关的lncRNA,最终筛选得到7个CR相关lncRNA（DUXAP8、AC026462.3、LINC01460、AL592494.1、AL353804.2、AC012462.1、AC009518.1）构建预后模型,并将其开发成在线工具（https://xzlmodelshiny.shinyapps.io/DynNomapp/）。高危组患者的生存率低于低危组（P＜0.05）,ROC曲线表明模型预测效能较好,单因素分析和多因素分析中风险评分的HR值分别为4.058（95%CI：2.530~6.508,P＜0.001）和3.096（95%CI：1.887~5.080,P＜0.001）。高风险组MDSC和Tregs细胞等免疫抑制细胞的浸润比例高于低风险组,趋化因子、免疫检查点及副炎症等通路的富集水平高于低风险组（P＜0.05）。此外,风险评分与免疫检查点TNFRSF25和TNFSF14呈正相关（r＞0.3,P＜0.05）。 结论 本研究构建的CR相关的lncRNA风险模型可独立有效地预测ccRCC患者的预后。