阿霉素肾病小鼠病理机制中白细胞介素-18水平分析

目的探讨白细胞介素-18(IL-18)在阿霉素肾病模型(微小病变型肾病,MCN)小鼠病程中的免疫失调作用。方法采用阿霉素单次尾静脉注射昆明种小鼠,诱导形成微小病变型肾病模型,设置模型组、生理盐水对照组和IL-18mAb抗体中和实验组(mAb)。测定3组小鼠第1、2、4、6周24h尿蛋白(24hUPQ)水平;于第42天时心脏采血法留取血清,检测模型组与对照组血清总蛋白(TP)、清蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(Tch)的水平;取单侧肾做病理检测,同时制备脾淋巴细胞悬液、肾组织匀浆液检测3组IL-18、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及IL-4水平。结果模型组小鼠从注射阿霉素第2周起,24hUPQ值均高于对照组,差异均有统计学意义(P0.01);血清TP、ALB、BUN、Cr、Tch、TG结果和病理诊断结果显示,模型小鼠出现低蛋白血症、高脂血症等类肾病综合征症状。检测显示模型组小鼠血清、肾组织匀浆上清液、脾淋巴细胞培养上清液IL-18、INF-γ、TNF-α水平均高于对照组,而IL-4水平均低于对照组,组间比较差异均有统计学意义(P0.01)。mAb组小鼠24hUPQ及IL-18、IFN-γ、TNF-α水平均低于模型组,组间比较差异有统计学意义(P0.01)。结论模型小鼠病程中,Th1类细胞因子分泌增强,Th2类因子受抑制,且IL-18mAb起到部分中和内源性IL-18的作用,表明IL-18是小鼠MCN病程中重要的免疫失调因子。     

原发性肾病综合征模型小鼠IL-18水平表达的研究

目的 探讨白细胞介素-18（interleukin-18,IL-18）在微小病变型肾病综合征（minimalchangenephropathy,MCN）模型小鼠免疫失调过程中的作用。方法采用阿霉素单次尾静脉注射昆明种小鼠,诱导形成MCN模型,设置生理盐水对照组进行比较。测定两组小鼠第1、2、4、6周各时期24小时尿蛋白量（24hoursurinaryproteinquantity,24HUPQ）水平;于第42天检测两组小鼠血清总蛋白（totalprotein,TP）、白蛋白（albumin,ALB）、尿素氮（bloodureanitrogen,BUN）、肌酐（creatinine,Cr）、甘油三酯（triglyceride,TG）、总胆固醇（totalcholesterol,TC）的含量;并采用ELISA法检测两组小鼠血清、肾组织匀浆上清、脾淋巴细胞培养液上清IL-18、INF-y,TNF—a及IL-4水平。结果模型组小鼠第2、4、6周24HUPQ值均显著高于对照组,且差异均有统计学意义（P均〈0．01）。模型组的TP、ALB水平较对照组均显著降低,TC、TG水平均显著升高,且差异均有统计学意义（P均〈0．01）,而BUN、Cr水平两组间差异均无统计学意义（P均〉0．05）。模型组小鼠血清、肾组织匀浆上清、脾淋巴细胞培养液上清IL—18水平、INF-y和TNF-a的水平均显著高于对照组,而IL-4的水平则低于对照组,且差异均有统计学意义（P均〈0．01）。结论IL-18是参与小鼠MCN发病过程中重要的免疫因子。     

Prss37基因转录起始位点的确定及其转录调控的初步探讨

目的 确定Prss37基因的转录起始位点,并利用转基因技术在整体水平验证该启动子的组织特异性.方法 运用cDNA 5'末端快速扩增法(5' RACE)对C57BL/6J小鼠睾丸mRNA进行分析,确定Prss37的转录起始位点;构建Prss37内源启动子区域转录起始位点上游不同长度DNA片段(1 kb、2 kb、4 kb)驱动的荧光素酶基因表达的质粒;通过受精卵雄原核显微注射技术获得上述三种启动子驱动荧光素酶基因表达的转基因小鼠;利用活体成像技术观察荧光素酶基因的表达,明确启动子的组织特异性.结果 Prss37基因的转录起始位点位于NCBI GeneBankTM(NM_026317.2)报道序列上游的40 bp处;成功获得三种转基因小鼠,其中1kb启动子驱动的转基因小鼠检测到荧光素酶基因的表达,且在脑、睾丸和附睾组织中的表达较强.结论 明确Prss37的转录起始位点,成功获得了睾丸和附睾表达荧光素酶基因的转基因小鼠,为进一步的Prss37基因转录调控研究奠定了基础.     

睾丸间质细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的建立

目的苗勒氏管激素受体-2（anti—mullerianhormonereceptor-2,Amhr2）是睾丸间质细胞中的特异性标志分子,我们构建了Amhr2基因启动子介导的睾丸间质细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠（Amhr2一Cre）。方法采用显微注射法将7．1kb的转基因片段导入小鼠基因组,获得子代小鼠睾丸组织进行PCR检测,再将转基因小鼠与ROSA26报告小鼠交配,利用LaeZ染色对Amhr2-Cre双转基因进行检测。结果获得子代Amhr2-Cre转基因小鼠经PCR检测显示,睾丸间质细胞中Cre重组酶介导的Amhr2基因发生重组;LacZ染色进一步表明,Cre重组酶在睾丸间质细胞中特异性表达,并介导ROSA位点LoxP序列间的重组。结论建立的睾丸间质细胞特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠在睾丸组织中具有一定的组织特异性,并能在体内成功介导这些睾丸间质细胞基因组上LoxP位点间的重组,是一种研制在睾丸特定细胞中特异性基因剔除小鼠的良好遗传工具小鼠。     

Trp53基因剔除小鼠的制备及其在药物致癌性评价中的应用

目的建立Trp53基因剔除小鼠模型。方法本研究拟通过基因工程技术建立Trp53基因剔除小鼠模型,通过RT—PCR、Western—blot等技术检测野生型、杂合子、纯合子小鼠中Trp53基因的表达;观察三种基因型小鼠自发肿瘤情况并进行病理分析;以N．甲基亚硝基脲（MNU）为致癌剂,探索该模型用于药物致癌性评价的可行性。结果DNA、RNA及蛋白水平的研究证实,已成功获得Trp53基因剔除小鼠模型。初步的表型分析显示：Trp53基因纯合缺失小鼠自出生13周起陆续发生肿瘤,至36周时所有观察纯合小鼠均死于肿瘤,以恶性胸腺淋巴瘤为主（60％）。与野生型小鼠相比,基因杂合缺失小鼠对致癌剂的敏感性显著提升,杂合小鼠经75mg／kg体重的N一甲基亚硝基脲（MNU）诱导,90％的小鼠发生肿瘤,其中86％为恶性胸腺淋巴瘤,而野生小鼠经药物诱导后只有60％发生肿瘤。腹腔注射枸橼酸缓冲液的80只对照组小鼠均未观察到肿瘤的发生。结论这一模型的建立为Trp53基因功能研究和药物致癌性评价提供了理想的动物模型。     

Leprtm1Srcmo基因敲入小鼠模型的建立及表型分析

目的 建立Leprtm1Srcmo基因敲入小鼠模型并开展相关表型分析,以满足我国糖尿病相关研究和药物研发的需求.方法 通过基因工程技术建立Leprtm1Srcmo基因敲入小鼠模型,测定三种基因型小鼠体质量、血糖变化;分别取三种基因型8月龄小鼠,检测血糖、血清胰岛素,以及肝功能、肾功能、血脂等血液生化指标,进行统计分析;对纯合子和野生型小鼠的肝脏、肾脏进行病理分析.结果 成功获得Leprtm1Srcmo基因敲入小鼠模型;初步表型分析显示:Leprtm1Srcmo基因敲入纯合子小鼠出生4周起即表现出过度肥胖,纯合子雄鼠表现出高血糖、高胰岛素、脂质代谢紊乱、肝肾功能异常等表型,13月龄Leprtm1Srcmo小鼠血糖恢复正常;病理检测发现,Leprtm1Srcmo小鼠肝肿大,并出现肝细胞空泡化等脂肪变性现象,以及肾小球肥大等病理改变.结论 该模型的建立为进一步研究2型糖尿病发病机制及治疗方法奠定了基础.     

血竭的几种鉴别方法

血竭的几种鉴别方法匡颖闫小平中国中医研究院西苑医院，北京１０００９１近年来，许多名贵中药货源缺，价格高，市场上常有伪品流入。现将血竭的鉴别方法介绍给大家，以供收购者、医院药房参考，从而保证药品质量，安全有效服务于患者。１血竭１．１来源：本品为棕榈科植...     

均匀设计法优选祛斑凝胶剂基质处方

目的：优选祛斑凝胶剂基质处方。方法：采用U₆（6²×3）均匀设计法,以凝胶剂的流变学参数（在室温下的黏度和屈服值、在体表温度下的黏度和屈服值、触变性）为指标,优化凝胶剂成型处方。结果：祛斑凝胶剂基质最佳处方为卡波姆9 401.0 g,甘油5 mL,pH 5~6。结论：通过建立凝胶基质质量与凝胶流体学参数回归模型,能直接反应各因素影响作用,为凝胶基质处方的筛选能提供一定的参考依据,采用该方法制备的祛斑凝胶剂均匀细腻,黏度适中,触变性良好。     

条件性SV40 TAg转基因小鼠模型的建立

目的 建立可调控的脑组织特异性表达SV40 TAg的转基因小鼠模型.方法 构建由大鼠神经元特异性烯醇化酶基因(rat neuron-specific enolase, NSE)启动子驱动四环素基因表达调控系统的载体,从而控制SV40 TAg基因的表达;受精卵雄原核显微注射该线性化载体制备转基因小鼠;PCR方法鉴定首建鼠;RT-PCR方法检测小鼠组织中四环素反式激活子(rtTA)及SV40 TAg基因的表达情况.结果 显微注射获得17个首建鼠,其中的6个首建鼠建系成功;1#、6#品系小鼠的脑组织中表达rtTA基因;强力霉素诱导后,可检测到6#品系小鼠脑组织中SV40 TAg基因的特异性表达.结论 可调控的脑组织表达SV40 TAg的转基因小鼠模型已经建立.     

BMP-2体外诱导OPG-/-小鼠BMSCs向成骨方向分化的实验研究

目的 探讨骨形成蛋白-2(BMP-2)对OPG-/-小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外定向诱导成骨的能力,评价BMP-2活性多肽的成骨诱导性及诱导成骨的剂量依赖性.方法 取OPG-/-小鼠股骨,分离骨髓基质细胞进行体外培养,传至P1代时改用条件培养基,在15％FBS培养条件下培养基中分别加入浓度为0.3 μg、0.2 μg、0.1 μg、0.05 μg、0μg的BMP-2,并依次记为A、B、C、D和E组.细胞培养至1、3、5、7d,PNPP法测定碱性磷酸酶(ALP)、钙试剂盒测定细胞钙含量、酶联免疫法测定细胞上清中抗酒石酸酸性膦酸酶5b(TRACP5b)的表达,检测不同浓度BMP-2活性多肽体外诱导成骨的能力.结果 ALP活性和钙含量检测显示,A组和B组较其他组增加明显(P＜0.05),但A、B组间比较差异无统计学意义( P＞0.05).TRACP5b检测显示,A、B、C组第3、5和7日TRACP5b表达均低于D、E组(P＜0.05),但A和B组差异不显著(P＞0.05).结论 BMP-2活性多肽能有效地促进OPG-/-小鼠BMSCs向成骨方向分化,其诱导作用存在剂量依赖关系,最佳诱导剂量为0.2 μg/ml.