髓鞘相关生长抑制因子Nogo-A及胰岛素样神经生长因子受体在局灶性脑缺血再灌注损伤后大鼠脑组织的表达特征

目的:观察髓鞘相关生长抑制因子Nogo-A及胰岛素样神经生长因子受体在脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织区域的表达特点。方法:实验于2005-08/2006-04在青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所进行。将80只成年健康雄性Wistar大鼠,采用双盲法随机分为正常对照组8只、假手术组8只、缺血再灌注组64只,缺血再灌注组分为2h、6h、12h、24h、48h、3d、7d、14d8个时间点,每个时间点8只,其中4只用于Nogo-A检测,另外4只用于胰岛素样神经生长因子受体的检测。应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注动物模型,假手术组不插尼龙线,正常对照组不做任何处理。采用免疫组织化学方法检测脑组织Nogo-A与胰岛素样神经生长因子受体在神经细胞中的表达。结果:80只大鼠均进入结果分析。①Nogo-A蛋白表达:正常对照组及假手术组皮质、海马及纹状体区凋亡细胞呈基础表达。缺血再灌注6～12h皮质区及纹状体区Nogo-A表达达高峰,海马区表达明显增加。缺血再灌注24h均开始下降。缺血再灌注48h～3d皮质区及纹状体区均二次达高峰,海马区表达恒定。缺血再灌注7～14d均降至基础水平。缺血再灌注各组Nogo-A蛋白表达均高于正常对照组及假手术组(P<0.05)。②胰岛素样神经生长因子受体蛋白表达:正常对照组及假手术组在皮质、海马及纹状体区阳性细胞呈基础表达。缺血再灌注24h达高峰,48h恒定表达,3～14d仍维持高值表达。缺血再灌注各组胰岛素样神经生长因子受体蛋白表达均高于正常对照组及假手术组(P<0.05)。结论:脑缺血再灌注损伤后,大鼠脑海马、皮质、纹状体等区域Nogo-A与胰岛素样神经生长因子受体表达均增加。胰岛素样生长因子受体表达增加与损伤程度呈正相关,脑轻度损伤时胰岛素样生长因子受体表达仅限于大脑皮质区,重度损伤时弥漫整个海马及纹状体区。     

荧光定量PCR测定端粒长度

目的 应用实时荧光定量聚合酶链式反应(Q-PCR)方法测定端粒长度.方法 选取9种人类细胞株,提取基因组DNA,采用Q-PCR方法测定相对T/S比率,DNA印迹法测定末端限制性片段(TRF)长度,进行二者之间的相关性分析.结果 定量PCR测定端粒长度相对T/S比率为0.68±0.57,DNA印迹法测量平均TRF值为8.57±2.34,两种方法测定结果的相关性分析R2=0.7807(P＜0.01).结论 采用荧光定量PCR方法测量端粒长度具有重复性好、省时、简便、可靠的特点,可高通量处理大量样品.     

微核试验评价含磷酸氢钙涂层纯镁材料的致突变性

目的通过微核实验检测纯镁微弧氧化（MAO）、二水磷酸氢钙（DCPD）涂层对小鼠的致突变性以评价其生物相容性。方法 30只小鼠,随机分为5组,阴性对照和实验组按50m l/kg分别腹腔注射生理盐水、三种材料浸提液,阳性对照组腹腔注射环磷酰胺（CP）（40mg/kg）,二次注射后6h处死小鼠,取其股骨制备骨髓涂片,观察P/N值,计算微核率。结果各实验组微核率均小于5‰,实验组与阴性对照组无显著差异,与阳性对照组有显著差异。结论涂层后的纯镁对小鼠无潜在的致突变性。     

神经细胞移植对大鼠脑损伤修复及行为功能的影响

目的:观察神经胶质细胞、神经元颅内移植对大鼠脑损伤修复作用及其神经行为功能的变化。方法:实验于2005-04/11在青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所完成。①选取出生24h清洁级Wistar大鼠2只作为供体。另选用4月龄清洁级Wistar大鼠48只,随机分为4组:正常对照组3只,模型对照组3只,神经胶质纤维酸性蛋白(Glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)移植组21只,5-溴脱氧尿嘧啶尿苷(5-bromo2’-deoxy-uridine,Brdu)移植组21只。②取供体鼠脑组织进行神经干细胞的培养,经GFAP抗体、Brdu免疫荧光标记的阳性细胞分别制成单细胞悬液待移植。③除正常对照组外,其余组均建立脑损伤模型。造模后GFAP移植组进行神经胶质细胞移植,Brdu移植组进行神经元移植,正常对照组不接受任何细胞移植。④细胞移植后观察大鼠行为变化,并进行神经行为功能评分。采用免疫荧光法检测组织片GFAP、Brdu标记阳性细胞在脑皮质区、海马齿状回及纹状体区的动态变化。结果:实验选取清洁级4月龄Wistar大鼠48只,全部进入结果分析。①神经行为功能测试及等级评分:与模型对照组比较,GFAP移植组、Brdu移植组于移植1d无明显变化,均呈重度损伤(15～16分);移植8d差异明显,呈中度损伤(9～10分);移植12d差异有显著性意义(P<0.05),呈轻度损伤(4～5分);移植16d差异有非常显著性意义(P<0.01),呈完成不稳定或反射缺陷(1分),接近正常对照组;移植24d呈稳定持续状态。②不同时间点各梗死区域GFAP标记阳性细胞的表达:GFAP移植组标记阳性细胞,第1天脑皮质区、海马齿状回、纹状体区的细胞表达无明显变化;第4天各区细胞表达略有增加;第16天细胞表达为最高值;第20天细胞表达呈下降趋势;第24天细胞表达为最低值。③不同时间点各梗死区域BrdU标记阳性细胞的表达:Brdu移植组标记阳性细胞,第1天脑皮质区、海马齿状回、纹状体区的细胞表达无明显变化;第4天各区细胞表达略有增加;第16天细胞表达为最高值;第20天细胞表达呈下降趋势;第24天细胞表达为最低值。结论:神经胶质细胞、神经元颅内移植能够促进大鼠脑损伤的修复,改善大鼠神经行为功能。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后GAP-43及IGF-1的表达

生长相关蛋白(GAP-43)在突触重建过程中,新生发芽末梢中的含量非常高,一旦突触重建完成,其含量呈幅度性下降,甚至呈微量或无阳性表达.胰岛素样生长因子-1(IGF-1)作为一种特异性神经营养因子,不仅有利于神经细胞生长发育和修复再生,而且能阻止细胞凋亡和死亡,有助于神经细胞受损后的功能恢复.     

骨髓间充质干细胞移植及生长相关蛋白43表达在脑修复中的作用

背景：研究证实骨髓间充质干细胞移植能够促进脑功能恢复,并对大鼠脑皮质及海马结构损伤具有修复作用,可能与细胞的自身代偿以及神经生长递质的参与有关,也可能是由于神经应激性损伤刺激靶组织细胞分泌各种神经因子的表达有关。 目的：从细胞生物学的角度,观察大鼠脑缺血损伤后骨髓间充质干细胞移植对神经再生及脑的修复作用。 方法：参考改良Nagasawa法建立大脑中动脉闭塞再灌注模型后,实施骨髓间充质干细胞移植,并分别进行跑台运动训练和水迷宫康复训练,进行神经功能评分及学习记忆评分。采用TUNEL法检测脑皮质区及海马区凋亡神经元的表达以及免疫组化技术检测生长相关蛋白43蛋白在两区的表达变化。 结果与结论：移植组16 h移植骨髓间充质干细胞在皮质区及海马CA1区表达明显增加;7 d细胞表达达高峰,分化细胞明显增加。移植后运动训练7,19,21 d移植组mNSS评分低于模型组(P均< 0.01);移植组大鼠水迷宫试验平台潜伏期的时间较模型组明显缩短(P < 0.05);移植组大鼠穿越平台次数较模型组增多(P < 0.05);缺血再灌注24 h凋亡细胞达高峰,3 d梗死体积测量为最大值;再灌注19 d生长相关蛋白43达高峰。提示大鼠脑缺血损伤介导了神经功能缺损,骨髓间充质干细胞移植促进了神经再生,生长相关蛋白43表达上调抑制神经元凋亡,进一步促进了脑梗死灶的修复。     

低强度氦氖激光对内皮细胞增殖与ICAM-1的影响

应用低强度激光辐照体外培养的血管内皮细胞并观测其对内皮细胞增殖与细胞间粘附分子 (ICAM- 1)表达变化的规律 ,从细胞与分子水平揭示低强度激光辐照疗法的治疗机制。1　材料与方法1.1　内皮细胞培养　取体重为 180± 2 0 g健康 Wistar大鼠的腹主动脉段 ,切成 2× 2 m m小动脉片 ,贴入灭菌的5 0 m l培养瓶中 ,加塞后侧立置于 3 7℃、5 % CO2 培养箱中培养 ,将长成单层的原代内皮细胞消化后 ,加入 12 m l含有15 %胎牛血清的 M199培养基 ,加入另 1个 5 0 m l的培养瓶中 ,继续培养。1.2　鉴定是否为内皮细胞　血管内皮细胞具有合成与释放…     

隐性乳腺癌的诊治分析

目的:加深和提高对隐性乳腺癌诊断、治疗的认识.方法:对24例隐性乳腺癌的检查手段、病理类型、淋巴结转移、手术方式等进行回顾性分析. 结果:隐性乳腺癌占本院同期乳腺癌的2.5%,以腋窝肿物为首发症状者4例(16.7%),X线钼靶摄片及彩超检出有腺体内结节细小钙化及腺体局部增厚者20例(83.3%). 24例中原位癌18例,其中导管内癌10例,小叶原位癌8例;浸润性导管癌6例.腋窝淋巴结转移者9例.全部病例均行乳腺癌根治术或简化根治术.随访3年, 复发1例(4.2%).结论:隐性乳腺癌以X线钼靶摄片和彩色超声的检出率较高,病理以原位癌为主,淋巴结转移较少,治疗以根治术或简化根治术为宜.     

先天性多指畸形1例

患者女性,24岁,饮事员工作。住院号4515,因生后右手多指于1989年7月4日入院。主诉:生后右手长有8指。发育过程与正常相同,无麻木、疼痛等异常感觉,但完成运用拇指的工作如:写字,系扣等不如正常手灵活。查体:一般状态良好,血压、呼吸、脉搏均正常。身高1.59米,体重53公斤,心肺腹神经系统发育良好,无其他系统合并畸形,右手8指,每4指为一组,掌心相对,桡侧掌、背部皮肤相延续,对称的食指、中指、无名指、小指形状与正常     

脑缺血再灌注后内皮细胞凋亡与p53表达的关系

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后血管内皮细胞凋亡及其与p53蛋白表达的关系。方法 采用原位末端标记法和免疫组化法分别观察脑缺血再灌注不同时间后血管内皮细胞凋亡和p53蛋白的表达。结果 脑缺血再灌2h在缺血周围区即有凋亡内皮细胞出现，12－24h达高峰，之后逐渐下降，至21d与假手术组已无显性差异。脑缺血再灌注6h在缺血周围区p53蛋白开始表达，24－48h达高峰，之后逐渐下降，至7d与假手术组已无显性差异。p53蛋白表达高峰时间迟于内皮细胞凋亡24h。结论 脑缺血再灌注损伤中凋亡是血管内皮细胞的死亡形式之一，p53表达蛋白参与缺血再灌注后血管内皮细胞凋亡机制的调节。