环境军团菌的分离培养及鉴定方法探讨

目的 建立地表环境水军团菌的分离培养及种属鉴定方法.方法 在广州市内8个公园中采取了44份地表湖泊水样,进行军团菌的分离培养.同一湖泊来源的分离株以扩增片段长度多态性(amplifled fragment length polymorphism,AFLP)进行同源性分析;进一步的种属鉴定采用生化血清学鉴定、细胞脂肪酸成分分析、16 S rRNA基因测序、巨噬细胞感染增强蛋白(mip)基因测序等多种手段相结合的方法进行分析和比较.结果 8个公园内的27份水样分离出军团菌,阳性率为61.36%.初步分离的108个菌株,经AFLP同源性鉴定,得到不同菌株31株,包括嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)20株,橡树岭军团菌(Legionella oakridgensis)1株,圣海伦军团菌(Legionella sainthelensi)1株,长滩军团菌(Legionella longbeachae)4株,菲氏军团菌(Legionella feeleii)5株.其中,嗜肺军团菌可直接通过常规的生化实验、血清学鉴定得到种属鉴定结果.但包括细胞脂肪酸成分分析在内的表型鉴定方法,均存在不同程度的不稳定性因素.结论 生化实验、血清学鉴定、细胞脂肪酸成分分析等能够为军团菌的分类学鉴定提供有价值的资料,但最终的种属鉴定仍必需依赖于16 SrRNA基因或mip基因的序列分析.     

β地中海贫血一个特殊基因突变的家系分析

目的：对一个国人罕见的重型地中海贫血基凶突变[CD41／42（-TCTT）·-90（C→T）]及其父母进行基因分析。方法：采用PCR／ASO探针杂交法检测中国人常见17种β-地贫基因突变，β-珠蛋白基因全长DNA克隆测序技术分析其突变基闲型。结果：发现先证者父亲携带中国人常见基因突变CD41／42（-TCTT），母亲则为中国少见地中海贫血基因突变-90（C→T），而先证者则为密码子CD41／42（-TCTT）缺失突变复合-90（C→T）转录子突变。结论：-90（C→T）在我国目前仅发现1例家系突变。     

广东地区环境水源和临床标本嗜肺军团菌培养与基因快速鉴定

目的建立嗜肺军团菌培养与基因快速鉴定方法,探讨广东地区环境水源和非典型肺炎患者嗜肺军团菌感染状况。方法对广东地区采集的57份中央空调冷凝塔水、30份湖泊水和53份临床标本,用本室改良BCYE-α培养基作培养和PCR试验。结果57份中央空调冷凝塔水培养检出嗜肺军团菌20株(35.1%),PCR检测LP-DNA阳性38份(66.7%);30份湖泊水细菌培养均阴性,PCR阳性4份(13.3%);53例非典型肺炎患者支气管洗液和痰液细菌培养均阴性,PCR阳性5例(9.4%);本实验设计的PCR扩增引物,只和标准嗜肺军团菌和本地分离株产生反应;不与其他病原菌扩增,而显示其良好特异性;本PCR敏感性可检出检体中0.6个细菌DNA含量。结论广东地区环境水源中普遍存在嗜肺军团菌,是引起非典型肺炎的重要病源之一。     

β-地中海贫血三重突变杂合体的基因型分析

目的 对1例罕见的β-地中海贫血三重基因突变杂合子进行基因型分析.方法 采用反向点杂交和DNA测序法分析患者β-珠蛋白基因型.结果 反向点杂交结果显示,此病例β-珠蛋白基因上有转录子+40～+43、密码子41/42、IVS-2-654 3种突变.基因克隆以及DNA测序分析证实患者一条染色体上存在+40～+43(-AAAC)+CD41/42(-TCTT)复合突变;其同源染色体上存在IVS-2-654(C→T)点突变.患者基因型为[+40～+43(-AAAC)·CD41/42(-TCTT)]/IVS-2-654(C→T).结论 β-地中海贫血[+40～+43(-AAAC)·CD41/42(-TCTT)/N]突变基因型是我国一种新的地中海贫血突变类型.     

广东新会环境水源军团菌分布类型研究

目的对广东新会公共环境水源中军团菌进行分离培养及种属鉴定，了解其分布状况，为军团菌病的预防控制提供依据。方法2007年8月在广东新会两个天然湖泊及6家宾馆的内湖和空调冷凝塔中共采集水样23份，作军团菌分离培养，用生化试验和PCR等方法进行初步鉴定，最后根据16srRNA和mip基因测序，最终确定菌种。结果23份水样中检出军团菌20份，检出率高达86．9％；检出军团菌30株，其中嗜肺军团菌21株，非嗜肺军团菌9株，包括戈尔曼军团菌5株，菲氏军团菌2株，长滩军团菌2株；同时发现同一水样中有多种军团菌共存现象。结论在广东矫会环境水源中军团菌普遍存在，且有多种军团菌共存状况，应引起相关部门的重视．以防军团病的暴发流行。     

广东省汉族1型糖尿病患者HLA-DRB1基因多态性分析

目的 探讨HLA-DRB1基因多态性在广东汉族1型糖尿病(T1DM)患者中的分布规律及相关性.方法 采用PCR-SBT技术对58例1型糖尿病患者和454例正常对照人群进行HLA-DRB1等位基因分型.结果 在HLA-DRB1基因位点上,T1DM组和正常对照组共检出38种等位基因.与正常对照组相比,T1DM组的DRB1*0301、DRB1*0405、DRB1*0701、DRB1*0901频率明显升高,而DRB1*1202、DRB1*1502、DRB1*1602频率明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 HLA-DRB1位点上的DRB1*0301、DRB1*0405、DRB1*0701、DRB1*0901是广东汉族人群1型糖尿病的易感基因,而DRB1*1202、DRB1*1502、DRB1*1602为保护基因.     

广东新会地区公共环境冷却塔水系军团菌污染状况调查

目的查明广东新会地区公共环境冷却塔水系军团菌分布状况,为预防和控制军团菌病暴发流行提供依据。方法自2004-2006年8～10月,在新会区各大宾馆、饭店、学校、医院和公共娱乐场所共采集中央空调冷却塔水样112份,进行军团菌分离培养和PCR快速鉴定。结果在新会区采集的112份公共环境中央空调冷却塔水样中分离培养检出嗜肺军团菌26株,检出率23.2%;PCR直接检测嗜肺军团菌(LP-DNA)阳性57份,阳性率50.9%。结论在广东新会地区环境水源中嗜肺军团菌污染具有普遍性,PCR检测嗜肺军团菌是一种快速、敏感、特异性良好的检测法。     

k-ras 基因突变与结直肠癌的关系

 目的　探讨k-ras 基因在结直肠癌患者中的突变状况,为k-ras基因突变检测提供理论依据。方法　提取基因组DNA,采用PCR扩增和双向直接测序法,检测56例结直肠癌k-ras基因的突变状况。结果　56例结直肠癌中k-ras基因的突变率为46.63 %（26／56）,其中20例（20／26,76.92 %）为密码子12的突变,6例（6／26,23.08 %）为密码子13的突变,未发现同时存在两个位点突变的样本。突变类型以G>A为主,密码子12的突变以GGT>GAT（G12D）为主。密码子13的突变以GGC>GAC为主。统计学分析发现,k-ras基因突变与患者的性别密切相关而与其他临床病理特征如：肿瘤发生部位、有无淋巴结转移等无关。结论　在结直肠癌患者中,k-ras基因突变主要发生于密码子12;突变类型以G>A为主;k-ras基因的突变可能与患者的性别相关。     

广东汉族人群1型糖尿病与HLA-DQB1基因的相关性

目的:探讨广东汉族人群1型糖尿痛(T1DM)与HLA-DQB1等位基因的相关性.方法:选取57例T1DM患者(T1DM)和454名正常对照人群(对照组),运用PCR-SBT对HLA-DQB1等位基因进行分型.结果:在HLA-DQB1位点上,T1DM组的DQB1*0201频率显著高于对照组,而DQB1*0502的频率则明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:HLA-DQB1*0201是广东汉族人群T1DM的易感基因,DQB1*0502则是保护基因.     

Sebia检HbA2值诊断β-珠蛋白生成障碍性贫血

VS-2nt654,CD17,TATA-28,CD71-72,TATA29等基因表型.其余3.5%是HBC/E分子病,而它的HbA2的含量可达20%以上. 结论 Sebia全自动血红蛋白琼脂糖凝胶电泳检测HbA2含量增高在β-珠蛋白生成障碍性贫血诊断中是一种快速有效的方法.