树鼩高密度脂蛋白亚类及其载脂蛋白构成与抗动脉粥样硬化的关系

树鼩HDL_3和HDL_2共占血浆总脂蛋白的90%以上,是转运血浆胆固醇的主要脂蛋白,其HDL_2中载脂蛋白构成独特,琼脂糖电泳显示为β脂蛋白,可能在转运脂质中起特殊作用。喂高胆固醇饲料后,血浆HDL_3及HDL_2浓度明显增加,HDL_2中的apo E比例也显著增加,高酪蛋白饲料则能抑制高胆固醇对HDL的作用,并使HDL_3中出现一新的MW22.4kD蛋白成分。这些改变有利于HDL加快转运胆固醇至肝脏分解代谢。     

人冠状动脉Ⅰ、Ⅲ型胶原的变化与动脉粥样硬化形成、进展的关系

目的观察Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原蛋白在正常和动脉粥样硬化病变的人冠状动脉内的分布和表达，探讨Ⅰ、Ⅲ型胶原增生及其比例变化在人冠状动脉粥样硬化病变形成、进展过程中的作用。方法应用HE、天狼星红染色和免疫组化染色对人冠状动脉不同类型病变及年轻人和老年人斑病变的Ⅰ、Ⅲ型胶原的分布进行比较观察；用原位核酸分子杂交技术，对正常及班块病变的Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达进行比较分析．结果①随着病变的进展，冠状动脉内膜中Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维的分本增多，同时斑块病变Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA表达增高；②年轻人斑块平滑肌细胞增殖较活跃，并以Ⅲ型胶原增多为主，老年人斑块平滑肌细胞数量减少，大多以Ⅰ型胶原增多为主。结论动脉粥样硬化病变时Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达与Ⅰ、Ⅲ型胶原增多相关；动脉壁内平滑肌细胞的增殖状态、Ⅰ和Ⅲ型胶原的增多及其两者间的比例变化可能在动脉粥样硬化病变的演变、进展过程中起着重要作用。     

树鼩血清脂蛋白的研究 Ⅰ.树鼩血清脂蛋白的分离、提纯和某些理化性质的鉴定

Barr~[1]等曾指出,血清高密度脂蛋白(HDL)含量多的人群比含量少者较少出现缺血性心脏病。近年来不少流行病学调查和实验研究都支持这一看法。 一九七五年以来,Bondjers等人证明,HDL既可促进培养细胞内胆固醇外移,又能把动脉壁内自由胆固醇动员出来,还能抑制组织对胆固醇的吸收,减少平滑肌细胞、内皮细胞及纤维母细胞对低密度脂蛋白(LDL)的摄取。这些结果表明,HDL似乎既能防止动脉粥样硬化斑块形成,又能促使斑块消退。Vesse-     

血管紧张素Ⅱ对人内皮细胞转录因子NF-κB的激活机制及其对PDGF-B基因转录的影响

目的　研究血管紧张素Ⅱ对ECV304细胞中转录因子NF-κB的作用和对PDGF-B 基因表达的影响.方法　采用电泳迁移率移动分析法(EMSA)和免疫组化方法,包括共聚焦显微镜及金颗粒标记免疫电镜技术；荧光素酶报告基因与变异型激酶质粒共转染的方法及Northern 印迹法研究血管紧张素Ⅱ激活NF-κB的信号传递路径和检测了血管紧张素Ⅱ刺激前后PDGF-B mRNA的表达水平.结果　血管紧张素Ⅱ刺激后,在ECV304细胞内有NF-κB的激活及核易位过程,应用免疫荧光共聚焦显微镜,免疫电镜及Northern 印迹等方法均可观察到PDGF-B或其基因表达增高.变异型激酶质粒IKKα-KM,IKKβ-KM 及 NIK-KM 可抑制经AngⅡ刺激的转染细胞内与NF-κB启动相连的荧光素酶的表达.结论　AngⅡ可激活胞浆内NF-κB并出现核易位,激酶NIK、IKKα和IKKβ参与了此信号传递路径.血管紧张素Ⅱ刺激后PDGF-B链mRNA水平增高.     

北京、广州人群的高脂血清对单核细胞(U937)结合高密度脂蛋白的影响

从北京，广义现场的血脂普查中选出脂血清，分别作用体外培养的单核细胞，然后检测Ｕ９３７细胞对高密度脂蛋白的结合率。结果显示经北京高脂血清作用后的Ｕ９３７细胞对高密度脂蛋白的结合率显著增加，高密度脂蛋白中的载脂蛋白Ｅ对结过程无明显影响；广州高血清对Ｕ９３７细胞无明显刺激作用，与正常血脂的作用相近。     

血管紧张素Ⅱ对人内皮细胞转录因子NF-κB的激活机制及其对血小板源生长因子B链基因转录的影响

目的研究血管紧张素Ⅱ对ECV304细胞中转录因子NF-κB的作用和对血小板源生长因子B链(PDGF-B)基因表达的影响.方法采用电泳迁移率移动分析法(EMSA),免疫组织化学方法,共聚焦显微镜及金颗粒标记免疫电镜技术;荧光素酶报告基因与变异型激酶质粒共转染的方法及Northern印迹法研究血管紧张素Ⅱ激活ECV304细胞NF-κB的信号传递路径和检测了血管紧张素Ⅱ刺激前后ECV304细胞PDGF-BmRNA的表达水平.结果血管紧张素Ⅱ刺激后,在ECV304细胞内有NF-κB的激活及核易位过程,应用免疫荧光共聚焦显微镜,免疫电镜及Northern印迹等方法均可观察到PDGF-B或其基因表达增高.变异型激酶质粒IKKα-KM,IKKβ-KM及NIK-Km可抑制经血管紧张素Ⅱ刺激的转染细胞内与NF-κB启动相连的荧光素酶的表达.结论血管紧张素Ⅱ可激活胞质内NF-κB并出现核易位,激酶NIK、IKKα和IKKβ参与了此信号传递路径.血管紧张素Ⅱ刺激后PDGF-B链mRNA水平增高.     

生长因子对成纤维细胞合成低密度脂蛋白受体的影响

用免疫印迹方法,以抗LDL受体的抗体为探针,直接检测细胞膜蛋白中的LDL受体蛋白,并对受体蛋白进行定量。用本方法分析了生长因子(PDGF)对培养的人成纤维细胞合成LDL受体的影响,结果表明,在PDGF作用4小时以后,细胞合成LDL受体始出现增加,8小时为对照细胞的2.2倍,至16小时增加至5倍。提示PDGF的作用机制是在基因转录水平。     

反义大鼠凝血酶受体基因的构建及其对主动脉血管平滑肌细胞增生的影响

凝血酶激活凝血酶受体引起的一系列细胞事件和内源性PDGF-A,bFGF的产生可能是血管病变发生发展过程中平滑肌细胞增生的重要因素。为进一步阐明血管损伤后平滑肌细胞增生的机理及探索有效治疗途径,针对凝血酶受体基因中一段包括转录起始点,翻译起始点,凝血酶结合和切割位点的序列作为靶序列,构建了凝血酶受体反义RNA重组表达载体pLXSN／ATR,并将其导入凝血酶刺激的动脉平滑肌细胞。结果表明重组基因转染能抑制凝血酶对大鼠平滑肌细胞DNA合成的刺激作用。提示序列特异的凝血酶受体反义重组基因的表达可以抑制凝血酶受体介导的血管平滑肌细胞增生。     

表达反义单核细胞趋化蛋白-1的重组逆转录病毒对家兔动脉平滑肌单核细胞趋化蛋白-1基因表达的影响

为研究反义单核细胞真挚化蛋白－１转基因表达对单核细胞进入动脉壁的作用,首先,构建了表达反义单核细胞趋化蛋白－１基因的逆转录病道理毒重组体,并观察它在培养的细胞中的表达。将家多单核细胞趋化蛋白－１ｃＤＮＡ反向插入到ｐＬＮＣＸ,构成ＬＮＣＸ－ａｎｔｉ－ＭＣＰ－１重组病毒质粒。再将重组质粒转染Ψ－２细胞,继以Ψ－２细胞产生的病毒上清感染ＰＡ３１７细胞,取得Ｇ４１８ＰＡ３１７抗细胞克隆。上述细胞经扩增培养     

一种快速简便的血浆脂蛋白分离方法

目前 ,较常用的血浆脂蛋白分离方法有固定角头密度梯度超速离心和甩头等密度超速离心 2种方法。但其缺点较多 ,如步骤繁琐 ,不宜操作 ,费时 (长达 2 4～ 72ｈ) ,也不经济 ,尤其对微量血浆中各种脂蛋白成分的分离和定量受到限制。我们用的血浆脂蛋白分离方法与国际上大多数实验室分离血浆脂蛋白所用的序列超离心法相比有以下不同 :将 2种密度梯度液简化成只用 1种液体 ;将 70 0 0 0ｒ/ｍｉｎ ,4ｈ的离心条件简化为只用 1 0 0 0 0 0ｒ/ｍｉｎ ,2ｈ ;同时 ,最小上样量由原来的3ｍｌ缩小到 6 μｌ,因此更简便、快速和经济。一、材料和方法1 .材…