构建携带EGFP标志人白细胞介素10基因的重组腺病毒载体

目的 构建携带EGFP标志人白细胞介素10(hIL-10)基因腺病毒载体.方法 以pSNAV2.0-hIL-10重组质粒为模板.PCR扩增hIL-10基因,获得hIL-10 cDNA片段,并酶切连接到带有含强绿色荧光蛋白基因(EGFP)标记的pDC316-IRES-EGFP-lacZalpha载体质粒上,Pmel线性化重组质粒pDC316-hIL-10-IRES-EGFP,与腺病毒包装系统AdMax转染293包装细胞,包装产生复制缺陷型重组腺病毒,经反复感染293细胞扩增病毒后,进行离子交换法纯化病毒,并测定病毒颗粒数、滴度.结果 经PCR鉴定、限制性酶切分析及序列测定,证明已正确构建重组穿梭质粒pDC316-hIL-10-IRES-EGFP和重组腺病毒质粒Ad-hIL-10-IRES-EGFP.扩增纯化后.测得重组腺病毒颗粒数为3.2×1011VP/ml,OD260/OD280值约为2.0,滴度为1.1×1010TCID50/ml.结论 成功构建了重组腺病毒质粒Ad-hIL-10-IRES-EGFP,为进一步研究hIL-10基因奠定实验基础.     

单腔气管导管和呼吸暂停在胸腔镜下胸交感神经干切断术的应用

目的 观察单腔气管导管插管和呼吸暂停在胸腔镜下胸交感神经干切断术中应用的安全性和经济性.方法 40例手汗症患者在电视胸腔镜下行双侧T2～T4交感神经干切断术.根据气管插管麻醉的不同分为单腔气管捕管组(A组)和双腔气管插管组(B组),每组20例.分别于右侧胸切皮前(T1)、右侧膨肺前(T2)、右侧膨肺后正常机械通气时(T3)、左侧膨肺前(T4)、左侧膨肺后正常机械通气时(T5)、麻醉结束时(T6)记录患者NBP、HR,SpO2、PErCO2及手术侧肺萎陷情况、暂停通气(或单肺通气)时间、相关并发症和麻醉费用情况.结果 围术期两组患者SBP、DBP、HR均在正常范罔内,两组SpO2均能维持在98%以上.T3、T5时A组PErCO2较T1,时明显升高(P<0.01),并显著高于B组(P<0.01).A组手术侧肺萎陷理想,手术野暴露满意,平均暂停通气时间为7.3 min,最长为16 min.B组患者双腔气管导管插管均成功,有7例肺萎陷不理想.术后第1天A组声音嘶哑、咽喉痛的发生率较B组略低.A组麻醉费用显著低于B组(P<0.01).结论 单腔气管导管麻醉和呼吸暂停在胸腔镜下胸交感神经干切断术中应用具有插管快速、安全、并发症少和花费少的优势.     

T型接头内镜面罩通气复合瑞芬太尼镇静清醒气管插管的效果

目的 探讨带有T型接头的内镜面罩(专利号:201120467717.9)通气复合瑞芬太尼持续输注镇静在纤维支气管镜(FOB)引导清醒气管插管(AFOI)的效果.方法 选择拟行经鼻气管插管全身麻醉口腔颌面外科手术患者45例,ASA Ⅰ或Ⅱ级,年龄25～60岁,随机分为三组,R1组采用T型接头内镜面罩通气复合瑞芬太尼镇静,R2组鼻导管吸氧复合瑞芬太尼镇静,F组鼻导管吸氧复合芬太尼镇静.记录三组插管操作时间,插管期间呛咳发生率以及术后随访患者的满意度.结果 与F组比较,R1和R2组在FOB操作时和气管插管时MAP降低、HR减慢,AFOI操作时间缩短,操作期间呛咳发生率减低,术后随访患者的满意度增加(P＜0.05).结论 自行设计的带有T型接头内镜面罩通气复合瑞芬太尼持续输注镇静可提供满意的清醒气管插管条件,且患者易于接受.     

肺动脉高压大鼠肺组织肝细胞生长因子和c-met表达的变化

目的 观察肺动脉高压大鼠肺内肝细胞生长因子(HGF)及其受体(c-met)表达的变化.方法 雄性SD大鼠80只,7周龄,体重180～250 g,采用随机数字表法,将其随机分为2组(n=40):对照组(C组)和肺动脉高压组(PH组).PH组经左侧开胸行左肺切除术,手术结束后关胸,待自主呼吸恢复后拔除气管导管,2周后颈部皮下注射野百合碱60 mg/kg,制备肺动脉高压模型;C组仅开胸,2周后颈部皮下注射等容量生理盐水.分别于注射野百合碱前1 d(基础值)、注射野百合碱后7、14、21和28 d时,各取8只大鼠,监测肺动脉压(mPAP),计算右心室与左心室+室间隔质量比[RV/( LV+S)],计算肌型肺小动脉血管中膜相对厚度(RWT1和RWT分别表示直径为50～100 μm和100-150μm的血管中膜相对厚度).采用RT-PCR法检测肺组织HGF mRNA和c-met mRNA的表达,采用Western blot法检测肺组织HGF蛋白和c-met蛋白的表达,采用ELISA法检测肺组织转化生长因子-β(TGF-β)含量.结果 与C组比较,PH组注射野百合碱后14、21和28 d时mPAP、RV/ (LV+S)和RWT2升高,HGF蛋白表达下调,注射野百合碱后7、14、21和28 d时RWT1升高,肺组织HGF mRNA表达下调,TGF-β含量升高(P＜0.01),c-met mRNA及其蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 肺组织HGF合成不足可能参与了肺动脉高压的形成,其机制与肺组织TGF-β含量升高有关.     

内膜新生性肺血管重构肺动脉高压大鼠模型的建立及评价

背景：目前尚缺乏简单易行、实用、操作性强的血管内膜新生性肺血管重构肺动脉高压动物模型。目的：建立内膜新生性肺血管重构大鼠肺动脉高压模型。方法：40只雄性SD大鼠随机分为2组：M＋P组（n=26）大鼠行左肺切除,2周后皮下注射野百合碱60mg/kg;对照组（n=14）大鼠仅行假手术处理。于术后5周检测肺动脉压、右心室/（左心室＋室间隔）质量的比值,同时观察右肺动脉病理形态学改变。以光镜下每1mm2面积内Ⅷ因子标记阳性的直径小于100μm的肺血管数评价肺内微血管密度。结果与结论：M＋P组大鼠存活率85%（22/26）,对照组存活率为100%（14/14）。与对照组相比,M＋P组大鼠肺动脉压力和右心室/（左心室＋室间隔）质量的比值明显增高（P〈0.01）;与对照组相比,M＋P组大鼠肺内直径为50-100μm和100-150μm的肌型小动脉中膜相对厚度均显著增加（P〈0.01）,肺内微血管密度显著减少（P〈0.01）。光镜显示M＋P组大鼠注射野百合碱后5周肌型肺小动脉中膜明显增厚,肺腺泡内小动脉明显肌化、内膜增厚。对照组大鼠肺小动脉未见血管结构重建。实验成功建立了内膜新生性肺血管重构大鼠肺动脉高压模型,操作相时简便,动物死亡率较低。     

微囊化人嗜铬细胞对大鼠异种移植的免疫隔离作用

目的探讨微囊化人嗜铬细胞(ME-HCC)移植于大鼠眼前房或足胝部的免疫隔离作用。方法雌性SD大鼠48只,3月龄,体重180-250g。随机分为3组,HCC组、空微囊组、ME-HCC组,每组16只。HCC组、空微囊组、ME-HCC组分别将HCC、空微囊、ME-HCC移植于大鼠的眼前房(n=8)或足胝部(n=8)。移植术后7d大鼠断尾取血,测定白细胞介素-2(IL-2)、IgG和IgM浓度。移植术后28d 处死大鼠,光镜下观察右侧眼球或左侧足组织形态学变化。结果与HCC组比较,空微囊组和ME- HCC组大鼠血清IL-2、IgG、IgM浓度均降低(P<0.01);ME-HCC、空微囊组血清IL-2、IgG、IgM浓度比较差异无统计学意义(P>0.05)。HCC组大鼠眼前房和足胝部可见大量淋巴细胞和中性粒细胞浸润。空微囊组、ME-HCC组大鼠眼前房和足胝部仅见少量淋巴细胞和中性粒细胞。结论微囊化人HCC 对大鼠异种移植的免疫排斥具有隔离作用。     

福建省2003年麻醉学学术会议召开

福建省 2 0 0 3年麻醉学学术会议于 1 0月 2 9日～ 1 1月 2日在我省东山县召开。到会正式代表 1 5 6人 ,与会 30 0余人 ,会议共收到学术讲座及论文等 1 90余篇。会议特邀第四军医大学西京医院熊利泽教授作学术报告。会议期间进行福建省麻醉学会换届改选 ,产生了第五届福建省麻醉学会委员会 :主任委员林财珠 (福建医科大学附属第一医院 ) ;副主任委员郭永正 (福建医科大学附属协和医院 ) ,陈彦青 (福建省立医院 ) ,陈国忠 (南京军区福州总医院 ) ;常委陈朴 (福州市第二医院 ) ,魏真 (福建省立医院 ) ,于荣国 (福建省立医院 ) ,张良成 (福建医…     

骨髓间充质干细胞介导大鼠肺内基因转移的可行性

目的评价骨髓间充质干细胞(MSCs)介导大鼠β-半乳糖苷酶(Lac-Z)基因肺内转移的可行性。方法对原代培养的Lewis大鼠MSCs进行Lac-Z表达载体(pSV-β-Gal)转染和DAPI荧光染色标记,再将MSCs(5×105细胞/每只大鼠)经颈静脉输入同基因背景受体Lewis鼠体内(n=10),48 h 和8周后处死大鼠(每时点5只大鼠),制作肺、脾、肝、肾、骨骼肌标本,荧光显微镜观察荧光标记的移植细胞,将肺组织与X-gal色素原一起孵育检测Lae-Z基因表达产物。结果静脉输入细胞后48 h及 8周,脾、肝、肾组织仅见少量DAPI标记的阳性细胞,骨骼肌组织未见阳性细胞,但肺组织内可见较多 DAPI标记的阳性细胞,主要分布于肺间质和肺泡腔内。经颈静脉输入转染了pSV-β-Gal的MSCs后48 h及8周,肺组织标本与X-gal色素原溶液一起孵育后,显微镜下可见大鼠肺内散布着许多深蓝色标记的MSCs,而脾、肾中则仅见少量深蓝色标记的MSCs,肝、骨骼肌未见深蓝色标记的MSCs。结论颈外静脉注射基因修饰的MSCs具有较好的肺内靶向性,且在受体鼠肺可较长时间表达外源基因。     

肝硬化病人乌司他丁预处理对罗库溴铵肌松作用的影响

目的观察肝硬化病人乌司他丁预处理对罗库溴铵肌松作用的影响。方法选择30例患有肝硬化的成年手术病人,随机均分为两组:乌司他丁组(Ⅰ组),静注乌司他丁5000U/kg后1min,静脉给予罗库溴铵0.6mg/kg;生理盐水组(Ⅱ组),静脉给予生理盐水0.1ml/kg后1min,静脉给予罗库溴铵0.6mg/kg。另选15例无肝脏疾患的、ASAⅠ～Ⅱ级择期成年手术病人为对照组(Ⅲ组),处理同Ⅱ组。肌松监测仪检测四个成串刺激(TOF)的变化,记录三组注药后罗库溴铵的起效时间(注药到TOFr=0)、TOF无反应时间(T1=0持续时间)、T1最大抑制程度、临床时效(TOFr恢复至25%时间)、T1恢复至75%时间、恢复指数。结果与Ⅱ、Ⅲ组比较,Ⅰ组插管剂量罗库溴铵的起效时间明显延长(P<0.05)。Ⅱ、Ⅲ组罗库溴铵肌松的起效时间相似。与Ⅱ组比较,Ⅰ、Ⅲ组T1恢复25%时间和恢复指数明显缩短(P<0.05)。Ⅰ、Ⅲ组罗库溴铵肌松的恢复时间相似。结论肝硬化病人乌司他丁预处理延长罗库溴铵的起效时间,但缩短罗库溴铵肌松作用时间。