过表达PRRX1 通过p53 介导的线粒体凋亡途径诱导肝癌SMMC7721 细胞凋亡

[摘要] 目的：探讨配对相关同源框1 蛋白（PRRX1）过表达对肝癌SMMC7721 细胞凋亡的影响及其分子机制。方法：分别用慢病毒介导PRRX1 过表达载体（pGMLV-PRRX1）、空载质粒（Vector）感染人肝癌SMMC7721 细胞,用qPCR和WB实验检测慢病毒感染后细胞中PRRX1 mRNA和蛋白的表达变化,用CCK-8 法、Annexin-V FITC/PI 染色流式细胞术分别检测PRRX1 过表达对SMMC7721 细胞增殖、凋亡的影响,用线粒体膜电位检测试剂盒（JC-10 染色法）检测细胞线粒体膜电位变化,用caspase 活性检测试剂盒（分光光度法）测定细胞中caspase-8 和caspase-9 酶活性,用WB实验检测细胞中p53、Bcl-2、Bax、Fas、Cleaved-caspase-3以及线粒体和细胞质中细胞色素C（Cty C）蛋白的表达。结果：成功构建PRRX1 过表达的SMMC7721 细胞株,感染细胞中PRRX1 mRNA和蛋白的表达水平显著升高（均P<0.01）。与对照组和空载组比较,PRRX1 过表达组SMMC7721 细胞的增殖能力显著下降、细胞凋亡率显著增高、Cleaved-caspase-3 剪切水平显著升高、线粒体膜电位显著下降、线粒体中Cty C蛋白表达下调、胞质中Cty C蛋白表达上调以及caspase-9 酶活性升高（P<0.05 或P<0.01）,同时p53 和Bax 蛋白表达增加而Bcl-2 蛋白表达降低（均P<0.05）,但Fas 蛋白表达及caspase-8 酶活性无显著变化（均P>0.05）。结论: PRRX1 过表达可诱导肝癌SMMC7721 细胞凋亡,其机制可能与p53介导的线粒体凋亡途径被激活有关。     

开腹胆道旁路手术与开腹胆管切除术治疗胆管癌的疗效对比分析

目的对比分析开腹胆道旁路手术与开腹胆管切除术治疗胆管癌患者的临床疗效。方法随机从我院2014年4月～2018年8月期间收治的胆管癌患者中抽取60例,用随机数字法分为对照组和观察组各30例。对照组接受传统开腹胆管切除术治疗,观察组接受开腹胆道旁路手术治疗,观察比较治疗效果,如并发症、胆功能改善状况、手术指标等。结果观察组并发症总发生率为6.67%,低于对照组的43.33%,差异有统计学意义(P0.05);观察组手术时间、出血量、术后下床活动时间、肛门排气时间、住院时间均少于对照组,差异均有统计学意义(P0.05);治疗前,两者胆功能指标比较差异无统计学意义(P0.05),治疗后,观察组胆功能指标低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论相较于开腹胆管切除术,采用开腹胆道旁路手术治疗胆管癌可显著改善胆管癌患者胆功能,且并发症少、术后恢复速度快、创伤性小,值得推广。     

胰十二指肠切除术后不同胰肠吻合方式的对比研究

目的探讨胰十二指肠切除术后不同胰肠吻合方式的安全性和可行性,为临床胰肠吻合方式的选择提供依据。方法纳入我院2010年1月~2014年11月行胰十二指肠切除术的患者50例,根据胰肠吻合方式不同分为两组组:捆绑式吻合组(25例)、常规吻合组(25例)。分析不同胰肠吻合方式对患者术后并发症发生情况及严重程度,以及患者手术出血量、手术时间、吻合时间、术后排气时间、进食流质时间、住院天数、吻合口大小及并发症情况。结果术后死亡1例,术后并发症的情况参照国际胰瘘研究小组(ISGPF)标准,捆绑式吻合组和常规吻合组的术后并发症发生率无明显不同;并发症中发生率最高的是胰漏。两组患者手术出血量、手术时间、吻合时间、术后排气时间、进食流质时间、住院天数等指标比较差异无统计学意义。结论胰十二指肠切除术后采用捆绑式吻合方式并不能显著减低术后发生胰漏的风险。     

过表达配对相关同源框1( PRRX1) 通过调控Wnt / β-catenin 通路抑制肝癌细胞体内致瘤性

目的:研究慢病毒介导的配对相关同源框1(PRRX1)过表达对肝癌细胞体内致瘤性的影响及相关机制。方法:构建PRRX1过表达的慢病毒载体pLV-PRRX1-IRES2-EGFP,转染HEK293T细胞,获得慢病毒颗粒后,感染肝癌细胞株SMMC-7721,采用Western blot检测感染后细胞株中PRRX1蛋白表达。皮下注射SMMC-7721细胞(对照组、空载体组、PRRX1过表达组及PRRX1过表达+Wnt/β-catenin通路抑制剂XAV939干预组)构建裸鼠肝癌移植瘤模型,其中干预组使用XAV939处理,观察处理后移植瘤体积大小并绘制肿瘤生长曲线;采用HE染色观察各组移植瘤组织病变情况;采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测移植瘤中细胞凋亡情况;采用免疫组化检测移植瘤中细胞增殖相关抗原Ki-67的表达;采用Western blot检测移植瘤中PRRX1以及Wnt/β-catenin通路相关蛋白β-catenin、c-Myc的表达。结果:成功构建PRRX1过表达的慢病毒载体并成功感染肝癌细胞株SMMC-7721,感染后细胞中PRRX1蛋白水平明显升高;与空载体组比较,PRRX1过表达组裸鼠移植瘤生长缓慢,组织坏死加重,细胞凋亡及PRRX1蛋白表达增加,而Ki-67、β-catenin及c-Myc蛋白表达均受到抑制;与PRRX1过表达组比较,XAV939干预进一步促进PRRX1过表达对裸鼠移植瘤的作用效果,但不改变PRRX1的表达。结论:过表达PRRX1能显著降低肝癌细胞体内致瘤能力,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。