破骨细胞血系起源的活细胞成像观察

目的:采用活细胞成像技术,观察血系单核细胞诱导形成破骨细胞的全过程,旨在进一步阐明破骨细胞血系起源的发生及其细胞动力学。方法:取成年SPF级纯种雄性SD大鼠1只,体重280 g,腹主动脉采血8 ml,经密度梯度离心分离单个核细胞,在RANKL与M-CSF诱导下,分为倒置相差显微镜观察组、抗酒石酸酸性磷酸酶染色组、噬骨试验扫描电镜观察组、活细胞成像组4组进行培养。倒置相差显微镜观察组从培养开始,在数字显微成像系统下,每天观察记录1次;抗酒石酸酸性磷酸酶染色组培养21 d作酶活性染色鉴定;噬骨试验扫描电镜观察组培养21 d取出骨磨片作扫描电镜观察;活细胞成像组采用多点位缩时电影法对整个培养过程进行长达35 d的连续观察记录。结果:诱导培养2周后,倒置相差显微镜观察可见大量多核细胞形成,外形呈圆形、梭形、扇形、椭圆形及不规则突起状;抗酒石酸酸性磷酸酶染色绝大部分多核细胞与单核细胞均呈阳性反应;骨磨片扫描电镜观察可见较多骨吸收陷窝、坑洼及沟道,还有位于陷窝及沟道内正在行使骨吸收功能的破骨细胞;活细胞成像观察到起源于周围血的多核破骨细胞是由单核细胞、单核细胞与多核细胞及多核细胞之间相互融合而成,其细胞间的融合均发生在贴壁状态,显微缩时电影观察显示破骨细胞形态表现复杂多变。结论:大鼠周围血单核细胞在RANKL和M-CSF诱导下,可以向破骨细胞分化,形成具有骨吸收功能的多核破骨细胞。破骨细胞的形成是发生在贴壁状态下多种形式的细胞融合过程,破骨细胞的粘附特性对其存活及功能发挥至关重要。破骨细胞具有吞噬功能,其形态结构动态多变。破骨细胞不仅是一种多核细胞,还可能包括单核破骨细胞。破骨细胞通过融合形成多核巨细胞的特性,可能是其适应功能需求与骨吸收效率的一种特殊生物学行为。实验结果进一步证实了破骨细胞的血系起源学说,并为深入阐明破骨细胞的细胞动力学与细胞生物学特性提供了新的实验研究依据。     

右归饮对体外成骨细胞增殖和分化影响的实验研究

目的在右归饮治疗激素性股骨头坏死的临床研究和动物实验研究基础上,进一步观察对体外成骨细胞增殖和分化的影响.方法采用血清药理学方法,对体外培养的大鼠成骨细胞作MTT法细胞增殖测定、PNPP法ALP活性测定、以及茜素红染色矿化结节计数.结果培养48、72h,10%和15%右归饮血清组的细胞增殖速度较对照组快(p＜0.05);培养72h,10%和15%右归饮血清组的ALP活性较对照组增加(p＜0.05);培养2w,矿化结节计数显示15%右归饮血清组多于对照组(p＜0.01).结论右归饮对体外大鼠成骨细胞的增殖和分化具有促进作用.     

浅谈桡骨远端骨折中的旋转移位

桡骨远端骨折,在骨伤科临床上十分常见。根据损伤机理及骨折移位特点,可分为伸直型和屈曲型两种。其诊断和治疗一般均无多大困难。但在临床上经整复后骨折远端残留旋转移位者也不乏其例。究其原因主要是对桡骨远端骨折中可能发生的旋转移位,未能引起足够的重视,有的甚至根本未加注意。虽然轻度的旋转移位,对功能影响不     

非创伤性股骨头坏死的病理组织学探讨

股骨头坏死（Necrosis of femoral head）是骨坏死的一个局部表现，在所有的骨坏死中，占有极其重要的位置，其发病率最高，它是由创伤或其他致病原因造成股骨头血供障碍所引起的综合病症。股骨头坏死分创伤性坏死和非创伤性坏死两种，到目前为止，除创伤作为病因之一已经明确外，其他的相关病因还在研究之中。非创伤性股骨头坏死是除创伤以外的一组原因不清和／或发病机理未明的骨坏死，它们都有一个共同的病理特点，在组织病理学上表现基本一致，大体呈现出骨坏死局部在不同阶段、不同程度上类似的病理组织和影像学改变。     

升清降浊合剂质量标准的研究

升清降浊合剂由当归、赤芍、白芍、川芎、白芷、桃仁、荆芥、防风、石菖蒲、柴胡、陈皮等14味中药组成，具有升清降浊，活血化瘀的功效，用于外伤引起的头痛，头昏恶心等，是我院临床上应用多年而疗效显著的自制制剂。为有效控制该制剂质量，采用薄层色谱法对其方中当归、川芎、赤芍、白芍进行了定性鉴别，并应用高效液相色谱法对该制剂中赤芍、白芍的有效成分芍药苷进行了定量研究。结果表明采用本定性定量方法，可较严格地控制该制剂的内在质量。     

破骨细胞的传代、冻存与复苏

目的:探讨破骨细胞传代、冻存与复苏的可行性,为开展破骨细胞的相关研究提供新的技术手段与方法。方法:破骨细胞的传代:取成年SPF级雄性SD大鼠1只,体重250 g,腹主动脉采血,分离周围血单个核细胞,经RANKL、M-CSF诱导培养2周,形成多核破骨细胞后,采用胰蛋白酶消化、震荡、吹打法,制成细胞悬液,离心后用含RANKL、M-CSF的α-MEM完全培养基重悬,接种至6孔培养板与直径35 mm培养皿中。破骨细胞的冻存:取上述细胞悬液,离心后用DMSO、FBS、α-MEM(1∶2∶7)冻存液,按常规程序将细胞冻存于-196℃液氮中。破骨细胞的复苏:从液氮中取出冻存的破骨细胞,37℃水浴中快速解冻,加PBS离心清洗后,用含RANKL、M-CSF的α-MEM完全培养基重悬,接种至6孔细胞培养板与直径35 mm培养皿中。同时对传代与复苏培养中破骨细胞的消化与贴壁过程,采用倒置相差显微镜与活细胞工作站进行观察记录与动态成像,3 d后作TRAP染色。结果:破骨细胞经胰蛋白酶消化、震荡、吹打后,细胞基本上脱壁、悬浮,可以制成细胞悬液,用于传代与冻存。破骨细胞传代培养后,大多在2 h内开始贴壁,贴壁后胞内细胞核清晰可见。经液氮冻存的破骨细胞,复苏培养后2~3 h开始贴壁,胞质展开,可见多个细胞核。传代与冻存复苏培养后的破骨细胞,TRAP染色呈阳性反应。结论:破骨细胞虽然贴壁比较牢固,但经适当的消化、震荡及吹打,多数可脱壁悬浮,并能实现传代培养,同时还可采用常规方法进行细胞冻存与复苏培养,经传代与冻存的破骨细胞仍可保持破骨细胞的活性。破骨细胞的传代与冻存,可以按实验计划与用量需求,随时进行分量传代与复苏培养,为开展破骨细胞的相关研究提供新的技术手段与方法。     

踝部骨折弹力固定器的研制及临床应用

传统中医伤科以其独特的正骨之法,在临床治疗中积累了丰富的经验.中医正骨矫之以手法,辅之以器具,大多数骨折都可获得理想的治疗效果.其中许多外固定方法,至今一直仍在沿用,如柳木板、杉树皮、竹皮、纸壳等.随着新材料的产生,出现了塑料夹板、石膏绷带、以及高分子绷带等.为了进一步充实和完善中医治疗骨折的外固定方法,我们研制了一种新型的弹力固定器用于治疗踝部骨折,自2004年应用于临床,经30例观察,效果满意.现总结报告如下.     

细胞的"逆分裂"现象

在人体组织细胞的体外培养中,采用自行设计组建的计算机显微缩时电影系统(computer Time-lapse Microcinematography),反复记录到细胞分裂后的再融合现象.这种细胞由分裂随即又发生融合的过程,可能是一种特殊的"自然融合"(natural fusion),或是细胞的一种"逆分裂"(contra-division)现象.     

计算机显微缩时电影系统的组建与应用

应用计算机数字视频技术与倒置相差显微镜及显微CO2培养系统,自行设计组建了计算机显微缩时电影系统。该系统资金投入低,构建简单,使用方便,能获得高分辨率全屏数字视频图像,并且记录时间长、容量大、成本低,同时能实现数据资料的快速处理、动态分析。较传统的胶片记录式显微缩时电影及磁带记录式缩时视频录像机具有更多的优点,可用于显微观察对象的连续动态跟踪记录研究。     

强骨饮对骨质疏松患者抗酒石酸酸性磷酸酶-5b影响的研究

目的探讨自拟强骨饮对原发性Ⅰ、Ⅱ型骨质疏松症的疗效及其对骨吸收影响的相关性.方法选择86例原发性Ⅰ、Ⅱ型骨质疏松患者,随机分为强骨饮组43例,对照组(密盖息组)43例.分别于治疗前后评价症状改善情况,采用以色列Sunlight公司生产的超声骨强度仪测指骨骨密度,采用酶联免疫法测抗酒石酸酸性磷酸酶-5b.结果采用SAS6.12统计分析软件运行计算所有的统计检验,均采用双侧检验,P＜0.05将被认为所检验的差别有统计意义.结果服用强骨饮3个月后,症状改善优良率达86.05%,sos值平均增加110±25.4 m/s、血TRACP5b平均减少2.74±0.95 U/L,且优于对照组(P＜0.05～0.01).无明显副反应.结论采用强骨饮治疗骨质疏松有调整骨代谢作用,能增加骨密度,改善骨质疏松症患者的症状.该药安全可长期服用.