西格玛性能验证图联合QGI在血细胞分析仪质量管理中的应用

目的探讨应用西格玛性能验证图结合质量目标指数(QGI)和Westgard西格玛规则,评价血细胞分析仪的性能,以指导血细胞分析仪质量管理的持续改进。方法收集2016年10月Sysmex XS1000i血细胞分析仪8个项目室内质量控制(简称质控)及同期全国室间质量评价数据,计算变异系数(CV)、偏差(Bias)和西格玛值(σ);利用西格玛性能验证图评价其分析性能,结合QGI选择优先改进措施,运用Westgard西格玛规则选择室内质控方案。针对2016年10月σ6的项目,在2017年10月采用新的质控方案及改进措施,收集数据,评价改进效果。结果采用新的质控方案及改进措施后,血细胞分析仪分析性能均有不同程度提升,但血红蛋白项目仍需持续改进。结论西格玛性能验证图能简洁、直观地评价血细胞分析仪的分析性能,与QGI和Westgard西格玛规则结合,可有效分析性能不佳的原因及选择最优的质控方案,有利于血细胞分析仪质量管理的持续改进。     

RNAi沉默PLCε对Crocin抑制人膀胱癌BIU-87细胞增殖作用调控的研究

目的:观察RNAi沉默膀胱癌BIU-87细胞磷脂酶C-ε(Phospholipase C epsilon,PLCε)表达后对藏花素(Crocin)抑制人膀胱癌BIU-87细胞增殖作用的影响.方法:将携有siRNA基因的真核表达质粒PGenesil-PLC?转染BIU-87细胞后,分为5组:未转染组、pGenesil-NP阴性质粒组、pGenesil-PLC ε质粒组、Crocin组、pGenesil-PLCε联合Crocin组.MTT法观察不同处理组对BIU-87细胞的生长抑制作用.RT-PCR法检测转染后对PLCε mRNA表达的影响及各处理组PCNA(Proliferating cellnuclear antigen)、CyclinD1 mRNA表达.Western-blot检测PCNA、CyclinD1蛋白表达.结果:RNAi可抑制BIU-87细胞78.06%的PLCεmRNA表达.pGenesil-PLCε联合Crocin组可增强Crocin对BIU-87细胞的生长抑制作用,48h抑制率达45.30%,且与pGenesil-PLCε质粒组和Crocin组相比较有显著性差异(P<0.01).RT-PCR和Western-blot结果显示与RNAi沉默PLCε组比较,RNAi PLC?联合Crocin组明显下调了PCNA、Cyclin D1基因和蛋白的表达(P<0.05);较单独Crocin组比较,RNAiPLC ε联合Crocin组显著降低了PCNA基因和蛋白的表达(P<0.05),降低了Cyclin D1蛋白的表达(P<0.05),Cyclin D1 mRNA表达变化两组间无显著性差异(P>0.05).结论:沉默PLC ?基因可增强Crocin对BIU-87细胞的抑制作用,其机制与进一步下调PCNA、CyclinD1的表达有关.     

磷脂酶Cε基因在膀胱移行细胞癌中表达及其临床意义

目的 探讨磷脂酶Cε(phospholipase Cε,PLCε)基因在膀胱移行细胞癌表达及临床意义.方法 采用逆转录PCR(RT-PCR)方法检测27例膀胱移行细胞癌和12例正常膀胱对照组中PLCε mRNA表达,分析其与膀胱病理学特征的关系.结果 PLCεmRNA在膀胱移行细胞癌的表达显著高于正常膀胱组织(P＜0.01),PLCε的表达和膀胱移行细胞癌分期有关(P＜0.05)而与分级无关(P＞0.05).结论 PLCε基因在膀胱移行细胞癌组织中呈高表达,可能是未来检测膀胱移行细胞癌一种新的有价值的肿瘤标志物,同时也可能成为膀胱肿瘤生物学治疗中一个新靶点.     

阻断PLCE基因对膀胱癌细胞侵袭能力的影响

目的构建PLCE基因的shRNA表达载体转染膀胱癌细胞T24株,观察其对T24细胞转移侵袭等恶性行为的影响。方法设计合成PLCE基因mRNA的寡核苷酸序列,插入绿色荧光蛋白质粒真核表达载体pGenesil中,构建重组载体pGenesil-PLCε。重组载体转染T24细胞后,RT-PCR和Western blot检测PLCE基因和蛋白表达;以侵袭小室、明胶酶谱分析及免疫组化检测细胞侵袭能力。结果成功构建了针对PLCE基因的shRNA表达载体。两个阳性重组质粒P1和P2转染膀胱癌细胞T24,P1和P2组目的基因/内参照吸光度比值较空载HK-A组明显降低(P<0.01);P1和P2组目的蛋白/内参照吸光度比值较空载HK-A组明显降低(P<0.01)。细胞侵袭实验中阳性质粒P1和P2转染组穿膜细胞数也明显低于空白对照组和阴性质粒HK-A转染组(P<0.01);转染P1、P2均使细胞分泌MMP-2、MMP-9明显低于空白对照和HK-A转染组(P<0.01)。结论阻断PLCE基因能有效抑制膀胱癌T24细胞系中PLCE基因和蛋白表达,并对T24细胞的侵袭转移能力具有一定的抑制作用。     

非配套检测系统溯源性的建立及其确认

目的探讨实现实验室非配套检验系统的溯源性及其确认的方法。方法以新鲜患者血清为临时校准品,在Roche Modular PI检测系统上定值后校准非配套检测系统,校准验证有效后,在非配套检测系统上对日常校准品进行定值,用新的校准值校准自建检测系统,经校准验证后,按EP9-2A文件进行方法比对,评估非配套检测系统与Roche Modular PI系统检测结果的偏倚是否在可接受范围内。结果非配套Alcyon300检测系统中总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、尿素(Urea)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)、血糖(Glu)、淀粉酶(AMY)及AFT检测系统中钾(K)、钠(Na)、氯(Cl)经过校准和校准验证后,与Roche Modular PI检测系统差异有统计学意义(P0.05),除Urea、UA、AST、ALT及Glu与目标检测系统在医学决定水平值处偏倚部分接受外,其余项目偏倚均小于CLIA′88允许总误差的二分之一(1/2TEa),临床可以接受。结论校准和校准验证可以实现非配套系统量值溯源性和可比性的有效途径。     

乙肝病毒共价闭合环状DNA标准品制备及鉴定

目的通过构建乙肝病毒(HBV)重组质粒来制备共价闭合环状DNA(cccDNA),为cccDNA定量检测提供合适的标准品。方法选择本院就诊的2名慢性乙肝患者,采取蛋白酶K消化法提取其血清病毒DNA,运用高保真聚合酶扩增HBV DNA,然后将扩增片段插入克隆载体构建HBV重组质粒。以重组质粒为模板制备环状DNA,经测序鉴定和PCR定量检测。结果 HBV DNA全长序列被成功扩增,并顺利构建重组质粒。2个重组质粒经内切酶消化均能得到预期的HBV DNA片段(约3.2 kb)和载体DNA片段(约2.7 kb);经测序鉴定,2个质粒分别为HBV B和C基因型,其插入序列保真性好,错配率低,每kb分别为1.24 bp和1.56 bp;以重组质粒为模板制备的2个环状DNA长度均约为2.1 kb,测序证实为HBV cccDNA;经定量检测,其纯度高,浓度分别为1.05×10~(10)IU/ml和6.19×10~9IU/ml。结论利用重组质粒方式制备的HBV cccDNA具有纯度高、获取量大等优点,可作为cccDNA定量检测和方法性能验证的标准品。     

心肌标志物的研究进展

上世纪50年代以来,速率法测定某些代谢酶活性一直是诊断急性心肌梗死（AMI）的金指标,但这些酶并不是心肌特有。而且酶的活性时间和窗口时间短,对临床诊断的帮助价值受限制。近几年来．一些新的具有高度特异性和敏感性的心肌标志物检测指标已较为普遍地应用于临床试验室诊断,在缺血性心脏病的诊断中占据重要地位,在AMI的诊断中更是必不可少。由于这些新的指标是近几年才开始在国内逐步普及应用．因此掌握与之相关的生物学特点,是临床对其合理应用和选择的前提条件。现对常用心肌标志物及其临床应用作一概述。     

shRNA干扰介导PLCε基因表达下调对膀胱癌T24细胞生长的影响

目的:探讨shRNA干扰沉默PLC ε基因对人膀胱癌T24细胞生长的影响.方法:体外构建PLCε基因的shRNA的重组质粒,Lipofectamilie2000介导法转染T24细胞,采用RT-PCR方法检测特异性shRNA的重组质粒对PLCε基因沉默效果,转染后采用MTT法检测shRNA的重组质粒对细胞增殖的作用,免疫细胞化学染色法检测T24细胞PCNA的表达,电镜观察细胞超微结构的改变.结果:shRNA的重组质粒能有效下调PLCε基因的表达,抑制率为78.01%,与对照组比较其差异有统计学意义(P<0.01);细胞增殖活性受到明显抑制,与对照组比较其差异有统计学意义(P<0.01);细胞内PCNA含量明显低于空白对照组和阴性质粒组,其差异有统计学意义(P<0.01);细胞形态改变产生凋亡小体.结论:PLCε基因有望成为应用RNAi技术探索治疗膀胱癌潜在的靶基因.     

产超广谱β-内酰胺酶细菌的耐药性及检测方法

产超广谱 β 内酰胺酶是近年来发现的对第三代头孢类抗生素耐药的主要原因。认识产超广谱 β 内酰胺酶细菌的耐药性及检测方法 ,正确选择抗生素进行治疗及控制产超广谱 β 内酰酶细菌的暴发流行等有着极其重要意义。