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目的构建PLCE基因的shRNA表达载体转染膀胱癌细胞T24株,观察其对T24细胞转移侵袭等恶性行为的影响。方法设计合成PLCE基因mRNA的寡核苷酸序列,插入绿色荧光蛋白质粒真核表达载体pGenesil中,构建重组载体pGenesil-PLCε。重组载体转染T24细胞后,RT-PCR和Western blot检测PLCE基因和蛋白表达;以侵袭小室、明胶酶谱分析及免疫组化检测细胞侵袭能力。结果成功构建了针对PLCE基因的shRNA表达载体。两个阳性重组质粒P1和P2转染膀胱癌细胞T24,P1和P2组目的基因/内参照吸光度比值较空载HK-A组明显降低(P<0.01);P1和P2组目的蛋白/内参照吸光度比值较空载HK-A组明显降低(P<0.01)。细胞侵袭实验中阳性质粒P1和P2转染组穿膜细胞数也明显低于空白对照组和阴性质粒HK-A转染组(P<0.01);转染P1、P2均使细胞分泌MMP-2、MMP-9明显低于空白对照和HK-A转染组(P<0.01)。结论阻断PLCE基因能有效抑制膀胱癌T24细胞系中PLCE基因和蛋白表达,并对T24细胞的侵袭转移能力具有一定的抑制作用。 相似文献
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目的探讨人源磷脂酶Cε(PLCε)特异性短发夹RNA(shRNA)对人膀胱癌增殖、凋亡、侵袭、转移能力的影响。方法用携带PLCεshRNA基因的真核表达质粒pGenesil-PLCε转染BIU-87细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法检测各组细胞PLCεmRNA和蛋白的变化。分别用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)、流式细胞术和免疫组化检测BIU-87细胞及裸鼠移植瘤增殖情况和细胞周期的变化;采用RT-PCR检测各组细胞Bcl-2、Bax mRNA的变化;采用Transwell小室体外侵袭法及明胶酶谱分析细胞的侵袭能力。结果转染pGenesil-PLCε质粒的细胞可明显抑制PLCε基因和蛋白表达水平(P<0.05);MTT、流式细胞术与免疫组化检测结果表明转染pGenesil-PLCε质粒的细胞生长明显受抑制(P<0.05),且细胞周期阻滞于G0/G1期;转染pGenesil-PLCε质粒的细胞Bcl-2/Bax mRNA明显降低(P<0.05);明胶酶谱及侵袭实验显示转染pGenesil-PLCε质粒的细胞侵袭、转移能力明显下降(P<0.05)。结论特异性shRNA干扰PLCε基因可抑制... 相似文献
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目的 探讨吡柔比星对膀胱癌细胞增殖的影响及其作用机制。 方法 膀胱癌细胞T24和BIU-87分别用0.4、0.8、1.6、3.2 mg/L的吡柔比星处理24、48、72 h ,用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率,qRT-PCR、RT-PCR检测磷脂酶Cε(PLCε)mRNA及凋亡调控基因Bcl-2 mRNA的表达,蛋白质印迹法检测PLCε蛋白的表达。将膀胱癌细胞分为空白组、吡柔比星处理组、Ad-shPLCε处理组、吡柔比星联合PLCε干扰腺病毒载体(Ad-shPLCε)处理组,检测并比较各组细胞增殖和Bcl-2蛋白的表达量。 结果 在膀胱癌细胞T24、BIU-87中,吡柔比星对细胞的抑制率呈浓度、时间依赖性,即随着药物浓度增加、处理时间延长,细胞抑制率升高;吡柔比星促进T24和BIU-87细胞凋亡,并且抑制PLCε和Bcl-2表达。吡柔比星处理组、Ad-shPLCε处理组、Ad-shPLCε联合吡柔比星处理组均能抑制细胞增殖和Bcl-2表达,且Ad-shPLCε联合吡柔比星处理组的抑制作用高于吡柔比星处理组,差异有统计学意义 (P<0.05)。 结论 吡柔比星能有效抑制膀胱癌细胞的增殖,可能与其抑制PLCε癌基因及下游Bcl-2基因的表达有关。 相似文献
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目的 探讨血清癌胚抗原(CEA)、糖链抗原199(CA199)、糖链抗原125(CA125)、甲胎蛋白(AFP)和粪便隐血联合检测在Dukes B期结肠癌中的诊断价值.方法 检测2013年3月至2015年8月56例结肠癌患者(结肠癌组)、35例结肠息肉良性疾病患者(息肉组)、41例体检健康者(健康对照组)的上述指标及其对应的阳性检出率.分析5项指标单个检测和联合检测的灵敏度、特异度.结果 结肠癌组的血清CEA、CA125、CA199及粪便隐血水平均明显高于息肉组和健康对照组(P<0.05).与息肉组相比,AFP水平及其血清阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05).血清CEA、CA125、CA199及粪便隐血入选Logistic回归方程,对应的曲线下面积分别为0.745、0.886、0.792、0.864,阳性检出率分别为48.2%、35.7%、39.3%和78.6%;联合检测可使灵敏度、特异度、曲线下面积分别提高到87.5%、92.1%、0.957,显著优于单项检测.结论 CEA、CA199、CA125、隐血联合检测能为早期诊断结肠癌提供有力的依据. 相似文献
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目的:探讨shRNA干扰沉默PLC ε基因对人膀胱癌T24细胞生长的影响.方法:体外构建PLCε基因的shRNA的重组质粒,Lipofectamilie2000介导法转染T24细胞,采用RT-PCR方法检测特异性shRNA的重组质粒对PLCε基因沉默效果,转染后采用MTT法检测shRNA的重组质粒对细胞增殖的作用,免疫细胞化学染色法检测T24细胞PCNA的表达,电镜观察细胞超微结构的改变.结果:shRNA的重组质粒能有效下调PLCε基因的表达,抑制率为78.01%,与对照组比较其差异有统计学意义(P<0.01);细胞增殖活性受到明显抑制,与对照组比较其差异有统计学意义(P<0.01);细胞内PCNA含量明显低于空白对照组和阴性质粒组,其差异有统计学意义(P<0.01);细胞形态改变产生凋亡小体.结论:PLCε基因有望成为应用RNAi技术探索治疗膀胱癌潜在的靶基因. 相似文献
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目的:研究磷脂酶C-ε(Phospholipase C epsilon,PLCε)siRNA表达质粒的转染对人膀胱癌细胞系T24侵袭转移能力的影响.方法:分别将携有PLCε siRNA基因的真核表达质粒两对p11-PLCε和p12-PLCε载体体外转染T24细胞,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测PLCε mRNA的表达情况,应用Transwell小室侵袭试验、明胶酶谱分析分别研究转染前、后膀胱癌细胞侵袭转移能力的变化,并以空载质粒HK-A转染和未转染细胞为对照.结果:RT-PCR检测显示p11-PLCε,p12-PLCε转染成功后T24细胞PLCεmRNA表达明显比空质粒HK-A转染和未转染细胞减弱;p12-PLCε siRNA转染细胞穿透侵袭小室滤膜的数目(26.8±5.8)和p11-PLCεsiRNA转染细胞穿透侵袭小室滤膜的数目(25.8±6.2)明显少于未转染细胞(34.8±6.9)和HK-A转染细胞(33.8±5.7)(P<0.01);明胶酶谱分析显示转染P11-PLCε、p12-PLCε均使细胞分泌MMP-2、MMP-9明显低于未转染细胞和HK-A转染细胞.结论:推测转染外源性PLCεsiRNA基因能下调PLCε基因的表达并能抑制膀胱癌细胞侵袭转移. 相似文献
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RNAi沉默PLCε基因对膀胱癌BIU-87细胞株的增殖调控作用 总被引:1,自引:1,他引:0
目的 探讨RNA干扰技术沉默PLCε基因表达对膀胱癌BIU-87细胞株增殖的抑制作用.方法 构建靶向PLCε基因特异性shRNA重组质粒pGenesil-PLCE,经脂质体介导转染BIU-87细胞株,蛋白质印迹法、RT-PCR方法检测PLCε在癌细胞蛋白及mRNA水平的表达,噻唑盐法观察重组质粒对BIU-87细胞增殖的抑制作用,免疫细胞化学染色分析增殖细胞核抗原(PCNA)含量改变,流式细胞仪检测细胞周期分布.结果 构建的重组质粒pGenesil-PLCε能明显抑制PLCE基因表达,且能明显抑制BIU-87细胞增殖;转染重组质粒0、24、48和72 h后细胞增殖抑制率分别为2.01%、32.85%、39.78%、37.19%,重组质粒组与对照组、阴性质粒组比较,差异有统计学意义(P<0.01).细胞内PCNA表达下调了33.08%;G0/G1期细胞(71.50±4.48)%与空白对照组(40.75±2.30)%、阴性质粒组(40.00±1.76)%比较明显增多,G2/M期细胞(8.16±0.51)%与空白对照组(31.20±1.76)%、阴性质粒组(35.94±1.58)%相比减少.差异均有统计学意义(P<0.01),细胞阻滞于G0/G1期,细胞增殖状态受到明显抑制.结论 PLCε基因在促进膀胱癌细胞增殖中发挥莺要作用,可能成为膀胱癌生物学治疗潜在的分子靶点. 相似文献
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蛋白激酶C(PKC)作为机体信号转导通路中的中心产物而成为肿瘤研究中的热点。现对PKC的分子结构、功能及其与膀胱肿瘤的发生、发展等生物学行为之间的关系及分子生物学机制作一简要综述。 相似文献