腺相关病毒注射稀疏标记神经元方法优化研究

目的 探究利用腺相关病毒(AAV)稀疏标记策略对神经元进行标记时,不同稀释倍数和注射剂量条件下荧光标记神经元的数量、形态及范围差别,为实现神经元投射纤维的精细结构追踪提供参考.方法 利用携带Cre/LoxP控制系统的AAV,采用小鼠颅内微量注射方式进行表达.在梯度稀释编码Cre重组酶的AAV之后,将携带有DIO表达元件的AAV按照1∶1混合比例注射到目标脑区,注射4周后心脏灌流取脑切片,观察荧光表达情况.结果 在稀释20 000倍50 nl注射剂量条件下可提供较为稀疏且范围较小的标记效果,稀释20 000倍150 nl注射剂量则可实现范围更广且较稀疏的标记,但在稀释10000倍150 nl注射剂量条件下,在注射位点中央区域会出现较为密集的标记.结论 通过比较不同AAV稀释倍数和注射剂量条件下神经元标记情况,发现高剂量较低浓度稀释的AAV可达到更佳的表达效果.该研究为利用稀疏标记病毒开展神经环路和神经元树突棘形态的研究提供了实验依据.     

基于Imaris 3D图形渲染方法对神经元形态量化分析

目的 利用Imaris软件对在体稀疏标记神经元及体外培养原代神经元所收集的实验数据进行多种统计量化分析.方法 利用Imaris软件的Filament模块、Spots模块、Surface模块,对神经科学领域中涉及神经元的荧光采集图像进行3D渲染并分析数据,包括质量检查、去除背景、神经元重构、胞体测量、突触棘分型统计以及体外培养神经元的量化统计.结果 基于Imaris的在体神经元的量化统计结果 显示,各级神经元平均体积存在显著差异,长度和面积差异无统计学意义;不同分型突触棘表面积差异存在统计学意义.结论 Imaris 3D图形渲染方法 可有效应用于神经元及树突棘形态重构、神经元胞体测量等量化分析中,从而为神经生物学的精准量化分析提供有力手段.