糖尿病大鼠玻璃体腔注射缺氧诱导因子-1α siRNA对血管内皮生长因子蛋白表达的影响

目的：观察缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)小干扰RNA(siRNA)对糖尿病大鼠视网膜组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达的抑制作用,及其用于糖尿病新生血管性疾病治疗的可行性。

方法：以pSilencer2.1-U6neo为质粒载体,构建HIF-1α.siRNA 重组质粒。选取雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠54只,随机分为正常对照组(15只)和实验组(39只)。实验组采用尾静脉注射链尿佐菌素(STZ)的方法建立糖尿病大鼠模型,造模成功后将实验组随机分为糖尿病组(15只)、基因治疗组(12只)和空载体组(12只)。正常对照组及糖尿病组大鼠均不做转染; 基因治疗组和空载体组分别转染HIF-1α.siRNA 重组质粒和pSilencer空载体质粒。行苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE染色)观察视网膜组织形态,并采用免疫组织化学法检测VEGF蛋白的表达。分别于干扰后24、48、72h,1wk时计算VEGF蛋白的抑制效率。采用单因素方差分析和LSD-t检验进行统计学分析。

结果：HIF-1α.siRNA 重组质粒经酶切、测序鉴定,确定为目的序列。HE染色显示：正常对照组大鼠视网膜各层细胞排列整齐,细胞形态基本正常。糖尿病大鼠视网膜各层细胞排列紊乱,内界膜不完整,新生血管芽、新生血管簇呈垂直状突破内界膜生长。免疫组织化学染色显示：VEGF阳性表达为细胞浆出现棕黄色颗粒,主要位于神经节细胞层。正常对照组VEGF蛋白呈弱阳性表达,而DR对照组和空载体组表达明显增强,基因治疗组较DR组和空载体组表达明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。VEGF蛋白抑制率24、48、72h和1wk时分别为：27.4%、40.6%、47.5%、64.5%。

结论：HIF-1α.siRNA重组质粒能够抑制糖尿病大鼠视网膜中VEGF蛋白的表达,可能成为一种治疗糖尿病性新生血管疾病的新方法。     

国医大师王玉川谈养生：大德必得其寿

静以养神《素问·痹论》中说：“静则神藏,躁则消亡。”刘元素在《素问病机气宜保命集》中指出：“神太用则劳,其藏在心,静以养之。”所谓“静则神藏”、“静以养之”,乃指神静而不妄思,即便用神,也要防止用神太过。静是一种心态,是老子所说的“致虚极,守静笃”,是不为名利所困扰的自然之静。这种静有助于神气的潜降内守。反之,神气的过用、躁动,为名利所诱惑,往往容易耗伤人的元气,使人的元气在不知不觉中耗散消亡。     

类克输注开始时间精确输液滴数调节对发生不良反应患者的影响

目的:观察类克治疗中,精确输注开始时间时输液滴数的调节,对发生不良反应患者的影响。方法:将400例次使用类克治疗的风湿病患者按时间的先后顺序随机分为对照组和观察组,每组各200例。对照组患者采用将头皮针连接输液器中生理盐水作为引液开始输注类克,并计算输注开始时间及输液滴数;观察组患者采用头皮针连接注射器建立静脉通路后直接连接类克稀释液,并计算输注开始时间及输液滴数。比较两组患者的不良反应发生率。结果:观察组患者的不良反应发生率明显低于对照组(P<0.05)。结论:精确类克输注开始时间的滴数调节可有效降低不良反应发生率。     

人类端粒酶逆转录酶mRNA选择性剪接的研究进展

端粒酶的激活是细胞永生化和恶性转化的关键事件之一,而端粒酶的激活需要端粒酶逆转录酶(hTERT)的表达。hTERT基因转录后的选择性剪接是调节端粒酶活性的重要机制之一。转变hTERTmRNA的剪接模式为肿瘤治疗提供了一个新的方案。     

食管癌高发区食管癌预防的非医疗措施探讨

当前在食管癌高发区食管癌预防中,存在只注重诊疗而忽略预防和术后康复的问题。通过对若干病例病前生活习惯及术后手术恢复情况进行观察及食管癌高发区具有代表性农村居民的生活状况调查,分析了导致食管癌的各种因素之间的联系。提出了加强食管癌高发区"安全饮水"工程等基础设施建设;在食管癌高发区建立预防及术后康复的医疗保障体系;加强宣传和食管癌知识普及,引导高发区居民改善生活条件和改良生活习惯;加强调查研究等非医疗措施。探讨在食管癌高发区建立预防、治疗和术后康复一体的食管癌预防体系。     

发掘经方,古为今用——评《经方方论荟要》

北京中医药大学聂惠民教授主编的《经方方论荟要》一书 ,已由湖南科学技术出版社出版。它着力弘扬经方之奥旨 ,博采百家方论之精髓 ,结合作者近 40年伏膺仲景学术之心得 ,博览广搜 ,历经 2 0余年的潜心整理编写而成 ,并由当代著名中医学家刘渡舟教授、焦树德教授为其撰写序文 ,给予极高的评价。它是一部有关经方方论的历代名医名著、名论、名验总汇 ,可谓“名家验萃 ,集于一书”的力作。全书 91万余言 ,内容丰富翔实 ,全面、系统、实用 ,理论结合实践 ,是一部难得的大型中医参考工具书 ,可供中医专业本科生、研究生 ,以及临床中医执业医师学…     

大鼠瘦素受体RNAi慢病毒载体的构建及鉴定

[目的]构建大鼠OBRb基因的RNAi慢病毒载体,并评估其对OBRb基因表达的沉寂作用。[方法]设计大鼠OBRb的siRNA靶序列,合成包含各正反义靶序列的互补单链寡核苷酸,退火后插入到慢病毒载体质粒pRNA-lentivector-VGFP上,构建pRNA-Lenti-OBRb-VGFP表达重组体;为了评估RNAi基因沉寂作用,将构建的慢病毒载体转染表达OBRb的C6大鼠神经胶质瘤细胞,利用Realtime PCR方法检测OBRb mRNA表达水平。[结果]将目的序列连接到慢病毒载体上,成功构建pRNA-Lenti-OBRb-VGFP表达重组体;通过PCR、电泳初步鉴定该重组体有OBRb表达,并进一步进行基因测序证实插入序列正确;成功将慢病毒载体转染到C6大鼠神经胶质瘤细胞,转染效率可达40%;荧光实时定量PCR检测OBRb基因表达量,结果干扰组的OBRb mRNA表达水平明显低于非干扰序列的对照组,可使OBRb mRNA表达量下调近80%。[结论]成功构建大鼠OBRb的RNAi慢病毒载体,为进一步的体内研究奠定了基础。     

子宫颈癌HLA-DRB1基因型的初步研究

宫颈癌是严重危害妇女健康的一种疾病,世界上每年大约有50万例新增病例.现已明确,宫颈癌是一种与人乳头状瘤病毒(HPV)感染明确相关的肿瘤,90%以上的宫颈癌HPV呈阳性[1].