蛋白激酶抑制剂H-7降低局灶性脑缺血半暗带和核心区半胱氨酸蛋白酶的活化

目的 研究蛋白激酶抑制剂H-7对局灶性脑缺血半暗带和核心区半胱氨酸蛋白酶Calpain和Caspase-3活性的影响.方法 采用动脉腔内插线法建立大鼠局灶性脑缺血模型,在缺血前15min经脑室给予H-7(125μg/大鼠),测定缺血1h再灌注23h(R23h)时,半暗带和核心区Calpain和Caspase-3的活性、Calpastatin和微管相关蛋白-2(MAP-2)的含量及梗死体积.结果 H-7明显降低R23h时半暗带和核心区μ-和m-Calpain及Caspase-3的活性,升高核心区Calpastatin的含量及半暗带和核心区MAP-2的含量,缩小梗死体积.结论 H-7通过抑制半暗带和核心区Calpain和Caspase-3的活性,降低局灶性脑缺血损伤.

Abstract：

Objective To investigate the effects of protein kinase inhibitor H-7 on the activation of calpain and caspase-3 in penumbra and core after focal cerebral ischemia in rats. Methods Rats received 1h focal cerebral ischemia by intraluminal filament. H-7 ( 125 μg/rat) was administered intracerebroventricularly 15 min before ischemia. The activities of calpain and caspase-3, the levels of calpastatin and microtubule-associated protein-2 ( MAP-2 ) , and the infarct volume were assessed by casein zymography,fluorometry, Western blot analysis,and staining the brain sections with 2,3 ,5-tripheny-ltetrazolium chlorides,respectively. Results Compared with ischemic control, H-7 markedly reduced the activities of μ-and m-calpain, and caspase-3 , increased the levels of MAP-2 in penumbra and core, and enhanced the levels of calpastatin in core. Moreover, animals treated with H-7 showed a significant reduction in infarct volume. Conclusions These data demonstrate the protection of H-7 against focal cerebral ischemia through inhibiting the activation of calpain and caspase-3.     

趋化因子CXCL12及其受体CXCR4与造釉型颅咽管瘤侵袭、复发的相关性研究

目的探讨趋化因子及其受体(CXCL12/CXCR4)在造釉细胞型颅咽管瘤中的表达并分析其与肿瘤侵袭、复发的相关性。方法应用免疫组化法和western blot方法对20例造釉细胞型颅咽管瘤标本(原发组11例,复发组9例)中CXCL12/CXCR4的表达进行检测。结果 CXCL12/CXCR4在复发组造釉细胞型颅咽管瘤中的阳性表达明显高于原发组(P<0.05)。结论 CXCL12/CXCR4可能在造釉细胞型颅咽管瘤侵袭、复发过程中起重要的作用。CXCL12/CXCR4可能成为评价造釉细胞型颅咽管瘤侵袭性生长和复发的标记物。     

腺相关病毒及慢病毒载体对骨髓间充质干细胞基因转染效率的比较

目的比较腺相关病毒(AAV)载体和慢病毒(LV)载体在间充质干细胞(MSCs)基因转染中的效率。方法密度梯度离心法分离培养MSCs,HE 染色、Nestin 免疫荧光染色鉴定,BrdU 标记观察增殖情况。分别包装AAV 与LV 假病毒颗粒,并感染MSCs,通过β-gal 染色和绿色荧光蛋白检测,分别计算两者的转染效率。结果MSCs成功从骨髓分离。AAV载体介导的基因转染率为49.1%,LV载体的转染率为91.4% (P<0.01)。结论LV载体介导的基因转染方法转染效率更高。     

N-甲苯磺基-L-苯乙胺酰氯甲基酮抗脑缺血作用

目的 研究表明丝氨酸蛋白酶及其抑制剂参与脑缺血引起的神经元损伤。本研究初步观察糜蛋白酶样丝氨酸蛋白酶抑制剂N－甲苯磺基－L－苯乙胺酰氯甲基酮（N-tosyl-L-phenylanyl chloromethyl ketone,TPCK)对局灶性脑缺血的保护作用。方法 利用大鼠线栓法局灶性脑缺血模型（脑缺血1h／再灌注23h)及激光多普勒血流计、氯化三苯基四氮唑（2，3，5－triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色和图像分析仪，观察TPCK对半暗带脑血流（Penumbral cerebral blood flow,pCBF)和梗死体积的影响。结果 TPCK虽不影响pCBF,但可缩小梗死体积。结论 糜蛋白酶样丝氨酸蛋白酶参与脑缺血继发性损伤，其作用机制有待进一步研究。     

用微动脉夹夹闭法制作局灶性脑缺血/再灌注模型

缺血性脑血管病的基础研究和疗效鉴定均需要建立有效、稳定的动物模型.至今为止,制备局灶性脑缺血再灌注模型运用了多种动物和实验方法,目前国内多采用大鼠线栓法,由于此模型受客观因素（尼龙线韧度、直径、线头制备,鼠种以及来源和体重）影响较大和实验者对插线力度大小的控制不同均可造成致模阳性率以及梗死程度的较大差异.因此,建立一种有效的脑缺血模型十分必要.     

局灶性脑缺血时吡拉西坦对缺血半球能量代谢的影响

目的　观察吡拉西坦对局灶性脑缺血时缺血半球能量代谢的影响。方法　采用动脉腔内插线大鼠局灶性脑缺血模型及测定缺血 2 h/再灌注 2 h后缺血半球内乳酸 ( L A)水平、乳酸脱氢酶 ( L DH)和肌酸激酶 ( CK)活性的变化 ,HE染色结合图像分析测定缺血后 2 4h的梗死体积。结果　吡拉西坦 ( 2 0 0 mg/kg)可明显降低缺血半球内 L A水平 ,增加 L DH的活性 ,对 CK活性无明显影响 ,它可明显降低缺血 2 h/再灌注 2 2 h后的皮质、皮质下结构和半球的梗死体积。结论　吡拉西坦具有明确的抗局灶性脑缺血作用 ,它可明显改善缺血组织的能量代谢状态 ,增加 L DH的活性 ,减轻乳酸堆积及组织酸中毒 ,缩小梗死体积。