肝癌细胞p15基因CpG岛甲基化研究

目的通过检测肝癌细胞株HepG2的抑癌基因p15基因启动子区CpG岛的甲基化状态,探讨其与肿瘤发生的可能相关性。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)技术,对人肝癌细胞株HepG2的p15基因启动子区域CpG岛的甲基化状态进行检测,以人淋巴瘤细胞株Raji为阳性对照,以正常人外周血单核细胞(PBMC)和肝细胞为阴性对照。结果肝癌细胞HepG2中p15基因启动子区域CpG岛甲基化和非甲基化检测均呈阳性,正常人外周血单核细胞和肝细胞甲基化检测阴性。结论肝癌细胞株HepG2抑癌基因p15基因CpG岛存在高度甲基化,可能与肝癌的发生相关。     

产抗生素角毛壳菌CH21的诱变育种

以角毛壳菌(Chaetomium cupreum)CH21的萌发孢子作为诱变材料,采用微波辐照和紫外线照射进行诱变处理,用辣椒炭疽菌(Colletotrichum capsici)作为测试菌株,结合PDA双层平板法初筛和管碟法复筛,选育高产抗生素的突变株.结果表明:最佳微波诱变条件为500W、2450MHz、15s,紫外诱变条件为15W、30cm、300s.对出发菌株CH21进行一轮微波诱变和一轮紫外诱变,筛选得到5株高产菌株,其中CH21-2-20抑菌圈直径最大,为20.20mm,较抑菌圈直径为12.50mm的出发菌株增大了62％.连续传代5次,CH21-2-20抑菌圈直径稳定在19.40～20.38mm.     

鞣酸蛋白酵母散对幼年大鼠腹泻的治疗作用及其机制研究

目的 研究鞣酸蛋白酵母散的治疗作用及其与保护肠黏膜、促进其修复的关系。方法 将48只21 d SD大鼠随机分为6组：对照组、模型组、蒙脱石散（阳性药,0.8 g/kg）组和鞣酸蛋白酵母散低、中、高剂量（0.1、0.3、0.9 g/kg）组。除对照组外,所有动物用4 g/kg番泻叶水煎剂连续ig 2周后,ig给药,对照组和模型组给予等体积的蒸馏水,每天2次,给药5 d。记录各组大鼠稀便率和腹泻指数。经治疗后,取各组大鼠空肠做苏木精-伊红染色和免疫组化,分别观察肠黏膜组织结构的改变和肠黏膜增殖细胞核抗原（PCNA）表达的变化。同时,刮取大鼠空肠黏膜分别测定DNA、总蛋白和IL-6的表达水平。结果 与模型组比较,经高剂量的鞣酸蛋白酵母散治疗后,大鼠稀便率和腹泻指数显著降低（P<0.001）,空肠绒毛结构基本恢复正常,空肠黏膜DNA含量显著增加（P<0.05）,PCNA表达显著增加（P<0.001）,IL-6表达减少。中剂量的鞣酸蛋白酵母散可改善大鼠腹泻,但对其他指标没有显著影响。而低剂量的鞣酸蛋白酵母散则无作用。结论 鞣酸蛋白酵母散对幼年大鼠腹泻有治疗作用,并可促进肠黏膜修复。     

对48周聚乙二醇干扰素-α治疗应答不佳的HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者治疗策略的探索

目的探索对于经聚乙二醇干扰素-α(PegIFNα)标准疗程治疗而未获得HBeAg血清学转换的慢性乙型肝炎(CHB)患者,延长PegIFNα疗程是否能提高疗效。方法选取PegIFNα治疗48周未能获得HBeAg血清学转换的患者,根据患者的意愿分为2组:A组将PegIFNα疗程延长24周,然后序贯恩替卡韦(ETV)治疗;B组立即改用ETV治疗。观察96周,每12周检测HBV DNA及HBV病毒学标志物。结果 A组在24、48、96周时HBeAg血清学转换率为0.00%、20.83%、25.00%。B组则分别为9.67%、29.03%、48.39%。B组的HBeAg血清学转换率较A组高,但差异无统计学意义(P=0.33、0.49、0.08)。2组在观察期血清HBsAg水平均无明显下降。结论对于经标准疗程PegIFNα治疗而未获得HBeAg血清学转换的CHB患者,延长PegIFNα疗程并未使患者的应答率提高。     

PEG-干扰素α-2a治疗低转氨酶乙型肝炎患者的回顾性研究

目的对于PEG-干扰素α-2a（PEG—IFNα-2a）治疗的低转氨酶水平慢性乙型肝炎患者进行回顾性研究。方法对治疗满48周并于治疗前完成肝活检的乙型肝炎患者,取用药后第12周、24周、48周为观察点,记录乙型肝炎病毒血清标志物与HBVDNA的变化情况,并分析其应答与肝组织炎症程度（G分级）、肝细胞HBcAg分布的相关程度。结果按炎症级别分组之HBeAg阳性组：治疗48周时G1组总有效率20％（2／10）,G2组总有效率56．25％（9／16）,G3组100％（6／6）;HBeAg阴性组炎症级别G1组10％（1／10）,G2组62．5％（5／8）,G3组100％（2／2）。按照肝细胞HBcAg表达分组之HBeAg阳性组：48周时浆型表达总有效率80％（8／10）,混合型表达组总有效率42．1％（8／19）,阴性表达组100％（3／3）。HBeAg阴性组：浆型分布组DNA阴转率为37．5％（3／8）,混合型组为28．57％（2／7）,阴性组为60％。结论无论按照炎症还是肝细胞HBcAg表达分组比较,最初统计学处理后发现各个级别分组所得数据未见明显差异（包括HBeAg阳性与阴性组）。加入时间因素后显示随时间延长,高炎症水平、HBcAg的阴性表达和（或）浆型表达会有更高的疗效。     

后循环脑梗死的危险因素及影响预后的相关因素分析

目的：探讨后循环脑梗死的危险因素及影响预后的相关因素。方法采用回顾性分析,将379例脑梗死患者按梗死部位不同,分为后循环梗死组( n =172)和前循环梗死组( n =207);按入院时Barthel指数,172例后循环梗死患者为可能预后良好组( n =56)和可能预后不良组( n =116)。收集各组患者的临床资料,并采用Logistic回归分析,对相关资料进行分析。结果多因素Logistic回归分析,其中HBA1C≥8.5%是后循环脑梗死的独立危险因素(OR>1),房颤史为前循环脑梗死的独立危险因素;HBA1C≥8.5%、纤维蛋白原≥4 g/L、年龄>60岁是后循环脑梗死预后不良的独立危险因素(OR>1)。结论后循环脑梗死发生与HBA1C≥8.5%关系密切,纤维蛋白原、年龄、HBA1C影响后循环脑梗死患者预后。     

不同亚型乙型病毒性肝炎患者T细胞亚群调查研究

目的研究不同亚型乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群变化及其临床意义。方法选择40例慢性活动性乙型肝炎、30例乙型肝炎病毒携带者、30例乙型肝炎肝硬化、20例急性乙型肝炎患者和30例健康对照者,采用流式细胞仪检测各组外周血T淋巴细胞亚群的表型和频率。结果与正常对照组比较,慢性活动性肝炎、肝炎肝硬变患者外周血CD4 、CD4 /CD8 比值均有显著性下降(P<0.01),以肝炎肝硬变下降最显著,慢性病毒携带者肝炎、急性乙型肝炎外周血T细胞亚群数量和比值变化不明显(P>0.05)。HBV DNA病毒载量与患者外周血CD4 T细胞数量无相关性(P>0.05)。结论慢性活动性乙型肝炎和肝硬化患者的细胞免疫功能降低,其下降程度与病毒复制水平无相关性。     

催产素对癫痫大鼠大脑皮质和海马热休克蛋白70表达的影响

目的：探讨青霉素诱导大鼠癫痫发作中催产素对神经元代谢活动有关的持续性癫痫发作的标志-热休克蛋白70表达的影响。方法：实验于2005-02在武汉大学医学院生理实验室完成。取健康3月龄雄性SD大鼠18只，随机分为3组，即对照组、青霉素致痫组与催产素处理组，每组6只。青霉素致痫组腹腔注射青霉素30万U；催产素处理组腹腔注射催产素20岷，30min后再腹腔注射青霉素30万U；对照组腹腔注射等量的生理盐水。各组动物均于给药24h后用100g／L氨基甲酸乙酯（1g／kg）腹腔注射麻醉，断头取脑，切取冠状脑片。免疫组化方法观察青霉素诱导大鼠癫痫发作及催产素干预后大鼠大脑皮质和海马内热休克蛋白70的表达。每只动物脑切片标本抽取3张，每张切片随机选取5个高倍镜视野（SP&;#215;200），测定每个视野下阳性反应的吸光度。以每只动物脑切片标本15个视野的平均吸光度为该例的测量值。结果：18只大鼠均进入结果分析。①大鼠给予青霉素后10min左右出现不同程度的癫痫发作症状。表现为不动、凝视、蹲伏、湿狗样抖等。②对照组大脑皮质和海马神经元胞内偶见散在分布的棕黄色颗粒，热休克蛋白70表达弱；青霉素致痫组大脑皮质和海马神经元胞内出现密集的深棕黄色颗粒，热休克蛋白70表达呈强阳性；催产素处理组大脑皮质及海马神经元胞内出现密集的棕黄色颗粒，热休克蛋白70表达呈阳性，但表达量较见青霉素致痫组减少。③青霉素致痫组热休克蛋白70阳性神经元的平均吸光度明显高于对照组，差异有显著性意义[（0．6652&;#177;0．0261），（0．1030&;#177;0．0040），t=-51．158，P〈0．001]；催产素处理组降为（0．5692&;#177;0．0645），与青霉素致痫组比较差异有显著性意义（t=5．092，P〈0．05）。结论：在癫痫发作过程中，预先用催产素可通过抑制热休克蛋白质70的合成而降低大脑皮质与海马热休克蛋白70的表达。     

凋亡和坏死细胞的DNA含量分析和链缺口标记检测法

目的 以流式细胞术法简便、有效地检测凋亡和坏死细胞。方法 将热处理、喜树碱诱导和紫外线诱导的急性早幼粒白血病细胞株（ＨＬ－６０）细胞分别用碘化丙锭（ＰＩ）摄入试验、亚ＧＩ峰法和ＤＮＡ链缺口标记法（ＴｄＴ）进行检测，并与对照组细胞进行比较，观察三种方法在凋亡和坏死细胞检测中的应用情况。结果 ＰＩ摄入试验显示，死细胞可大量摄取染料，ＤＮＡ含量直方图上其相对荧光强度明显较活细胞高；凋亡细胞在经磷酸－柠檬