体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为胆碱能样神经元

目的 探讨大鼠骨髓间充质干细胞能否分化为胆碱能样神经元.方法 分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),取2～4代MSCs,进行诱导其向胆碱能神经元分化.诱导方案:10% 胎牛血清诱导2 d; 换液为DMEM/F12培养基,加入碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、巯基乙醇(ME)、维甲酸(RA)、神经生长因子(NGF),诱导8 d;加入表皮生长因子(EGF),肝素(Heparin)继续诱导8 d.空白对照组不作任何处理.观察诱导后的形态变化.采用RT-PCR检测巢蛋白(nestin),核受体相关因子(Nurr1),胆碱乙酰转移酶(ChAT)mRNA 的表达,间接免疫荧光法检测表达 nestin、ChAT、神经核蛋白(NeuN),乙酰胆碱酯酶(AchE) 的阳性细胞.结果 诱导后细胞形态逐渐由长梭形变为圆形或椭圆形,突起形成;RT-PCR显示,诱导后的细胞高表达 nestin、Nurr1、ChAT,且基因表达相对强度与未诱导的MSCs比较有显著差异(P<0.01).免疫荧光法检测显示,诱导后的细胞高表达nestin、ChAT、NeuN、AchE,且阳性细胞大于80%,而对照组除ChAT 阳性细胞为1%外,其他均为阴性.结论 大鼠MSCs可诱导为胆碱能样神经细胞.     

大鼠骨髓间充质干细胞向多巴胺样神经细胞分化

目的探索大鼠骨髓间充质干细胞向多巴胺能样细胞分化。方法全骨髓培养法分离大鼠骨髓间充质干细胞;体外培养至第3代,用碱性成纤维细胞生长因子,抗坏血酸和表皮生长因子诱导分化;免疫荧光法鉴定胞质中的多巴胺神经元相关蛋白的表达;RT-PCR鉴定多巴胺神经元相关基因的表达;ELISA法检测上清及胞质中的多巴胺。结果诱导后,免疫荧光法检测到诱导后的细胞表达多巴胺神经元相关蛋白:酪氨酸羟化酶、多巴胺转运蛋白和神经核蛋白;RT-PCR检测到诱导后的细胞表达多巴胺神经细胞相关基因TH、AADC;ELISA法检测到诱导后的上清及胞质中有多巴胺分泌。结论间充质干细胞具有向多巴胺能样细胞分化的能力。     

人胎盘间充质干细胞体外向胆碱能样神经元的分化

背景:胎盘中含有与骨髓中类似的间充质干细胞,也可能具有多向分化能力.目的:探讨人胎盘间充质干细胞体外能否定向诱导分化为胆碱能样神经元.方法:采用酶消化法分离培养人胎盘间充质干细胞,传至第4代,先用胎牛血清+碱性成纤维细胞生长因子诱导培养2 d,然后分为3组:方案Ⅰ加入含碱性成纤维细胞生长因子、2-巯基乙醇、维甲酸、神经生长因子的DMEM/F12继续诱导19 d;方案Ⅱ在其基础上,诱导液中另加入表皮生长因子、Heparin;阴性对照组仅加入含胎牛血清的DMEM/F12培养液,不添加任何诱导剂.结果与结论:胎盘组织消化后获得的贴壁细胞,经2周培养后逐渐形成扁平单层细胞,呈平行排列或漩涡样成簇生长,为梭形,传至第3代细胞形态较均一.第4代人胎盘间充质干细胞强表达CD44,CD29,不表达CD34,CD45,CD106及HLA-DR.人胎盘间充质干细胞经方案Ⅰ和方案Ⅱ诱导2周后,均可检测到nestin、chat mRNA的表达,且chat,Ache,nestin阳性率显著高于阴性对照组细胞(P < 0.05).与阴性对照组比较,经两种方案诱导的人胎盘间充质干细胞培养上清液中乙酰胆碱浓度均明显升高(P < 0.05),且方案Ⅰ诱导组升高幅度明显大于方案Ⅱ诱导组(P < 0.05).提示联合多种生长因子分阶段进行诱导,人胎盘间充质干细胞可在体外分化为具有合成及释放降解乙酰胆碱能力的胆碱能样神经元细胞.     

人胎盘间充质干细胞体外向胆碱能样神经元的分化*

背景：胎盘中含有与骨髓中类似的间充质干细胞,也可能具有多向分化能力。 目的：探讨人胎盘间充质干细胞体外能否定向诱导分化为胆碱能样神经元。 方法：采用酶消化法分离培养人胎盘间充质干细胞,传至第4代,先用胎牛血清+碱性成纤维细胞生长因子诱导培养2 d,然后分为3组：方案Ⅰ加入含碱性成纤维细胞生长因子、2-巯基乙醇、维甲酸、神经生长因子的DMEM/F12继续诱导19 d;方案Ⅱ在其基础上,诱导液中另加入表皮生长因子、Heparin;阴性对照组仅加入含胎牛血清的DMEM/F12培养液,不添加任何诱导剂。 结果与结论：胎盘组织消化后获得的贴壁细胞,经2周培养后逐渐形成扁平单层细胞,呈平行排列或漩涡样成簇生长,为梭形,传至第3代细胞形态较均一。第4代人胎盘间充质干细胞强表达CD44,CD29,不表达CD34,CD45,CD106及HLA-DR。人胎盘间充质干细胞经方案Ⅰ和方案Ⅱ诱导2周后,均可检测到nestin、chat mRNA的表达,且chat,Ache,nestin阳性率显著高于阴性对照组细胞(P < 0.05)。与阴性对照组比较,经两种方案诱导的人胎盘间充质干细胞培养上清液中乙酰胆碱浓度均明显升高(P < 0.05),且方案Ⅰ诱导组升高幅度明显大于方案Ⅱ诱导组(P < 0.05)。提示联合多种生长因子分阶段进行诱导,人胎盘间充质干细胞可在体外分化为具有合成及释放降解乙酰胆碱能力的胆碱能样神经元细胞。     

端粒酶在大肠肿瘤中的表达及其临床意义

端粒 -端粒酶模式是目前肿瘤研究的热点 ,已证实其与细胞周期、细胞增殖分化具有密切关系。我们采用半定量端粒重复扩增 ( TRAP) -银染法 ,观察了端粒酶在大肠良、恶性病变中的表达 ,并探讨其临床意义。1　资料与方法1 .1　研究对象　本组大肠癌患者 2 7例 ( 组 ) ,其中男 1 4例 ,女 1 3例 ,年龄 37～ 77岁 ,平均 5 .78岁。大肠良性病变患者 9例 ( 组 ) ,男 7例 ,女 2例 ,年龄1 4～ 72岁 ,平均 41 .44岁 ;包括大肠腺瘤 6例、炎症性肠病 2例、炎性大肠息肉 1例。取 1 3例正常大肠粘膜标本 (取自距离病变 5 cm以上的部位 )作为对照 ,所有…     

甲状腺功能低下误诊为更年期综合征六例报告

甲状腺功能低下(甲低)实不少见,但由于其临床症状多样,早期易误诊,尤其是更年期女性患者,1994年11月～2000年4月我们曾误诊的6例,报告如下。     

诱导大鼠骨髓间充质干细胞表达神经胆碱乙酰化转移酶

目的:胆碱乙酰化转移酶是胆碱能神经系统功能变化的重要标记。观察大鼠骨髓间充质干细胞表达神经胆碱乙酰化转移酶的情况,探讨其定向诱导分化为特异胆碱能神经元的有效条件。方法:实验于2006-09/2007-05在暨南大学医学院血液病研究完成。①实验方法:SD大鼠颈椎脱臼处死,无菌条件下取股骨,从骨髓中分离间充质干细胞,待80%～90%融合后胰酶消化传代。体外培养传3代后,向胆碱乙酰化转移酶阳性神经细胞进行诱导分化。实验Ⅰ组:DMEM/F12 0.1mmol/L2-巯基乙醇 1mmol/L维甲酸诱导2d。实验Ⅱ组:体积分数为0.1的胎牛血清 10μg/L碱性成纤维细胞生长因子 0.1mmol/L2-巯基乙醇预诱导2d,换液后再加入1mmol/L维甲酸、10μg/L表皮生长因子、10μg/L神经生长因子继续诱导7d。实验Ⅲ组:在Ⅱ组方案的基础上加入1250u/mLHeparin。空白对照组不作任何处理。②实验评估:观察间充质干细胞诱导后的形态变化;诱导9d,采用RT-PCR检测及凝胶电泳分析实验Ⅱ组胆碱乙酰化转移酶mRNA的表达;诱导2,9d,以CY3间接免疫荧光法检测各组胆碱乙酰化转移酶阳性细胞分化情况。结果:①骨髓间充质干细胞诱导后形态学变化:诱导1d细胞形态逐渐由长梭形变为圆形或椭圆形,折光性及立体感增强,部分细胞可见突起开始形成;诱导2d细胞突起伸长,胞间或细胞与间质可形成连接;诱导9d细胞突起变粗,胞浆内分泌颗粒增加并见胞核。②胆碱乙酰化转移酶mRNA的表达:诱导后的细胞高表达胆碱乙酰化转移酶mRNA。③胆碱乙酰化转移酶阳性分化细胞检测:实验Ⅱ组胆碱乙酰化转移酶阳性分化细胞表达率为80%～90%,明显高于实验Ⅰ组的50%～70%,且细胞生长状态较好;实验Ⅲ组细胞脱壁死亡率最高,亦有较高的胆碱乙酰化转移酶阳性分化细胞表达率。结论:①鼠骨髓间充质干细胞能被转化为表达神经胆碱乙酰化转移酶的细胞。②胎牛血清、碱性成纤维细胞生长因子、2-巯基乙醇预诱导后,再加入维甲酸、表皮生长因子、神经生长因子继续诱导是分化为特异胆碱能神经元的有效条件。