畸形精子症患者精子DNA碎片与MTHFR C677T基因多态性的相关性研究

目的探讨畸形精子症患者DNA碎片与MTHFR C677T基因多态性的相关性。方法实验组为45例畸形精子症患者,对照组为正常生育的健康男性88例,检测精子的DNA碎片率和MTHFR C677T基因多态性分布的关系。结果两组比较精子DNA碎片率差异有统计学意义(P0.05),而MTHFR C677T基因型的分布频率差异不显著无统计学意义(P0.05)。结论畸形精子症患者的DNA碎片率与MTHFR基因C677T多态性分布无相关性,MTHFR C677T基因多态性可能不是造成畸形精子症患者的DNA碎片率高的危险因素。     

济宁地区汉族人群MTHFR基因的SNP与非梗阻性无精子症和重度少弱精子症相关性分析

目的探讨济宁地区汉族人群5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR)C677T多态性与非梗阻性无精子症和重度少弱精子症男性不育患者的相关性原因分析。方法采用病例对照研究方法,应用统计学方法分析145例男性不育症患者(其中无精患者29例、重度少弱精子症28例)和88例正常男性的MTHFR C677T等位基因型及基因频率分布特点。结果 (1)病例组与正常对照组MTHFR C677T的各基因型分别为CC 7(12.28%)vs11(12.50%)CT 31(54.38%)vs48(54.55%)和TT 19(33.33%)vs 29(12.28%),两组间基因型分布及等位基因频率差异无统计学意义(P0.05)。(2)将不育患者分为无精患者组和严重少弱精患者组后,两组MTHFR C677T基因型分布分别与正常组比较差异仍无统计学意义(P0.05)。结论 MTHFR基因C677T多态性在无精症患者、重度少弱精症患者和健康人中,分布无显著差异,该基因多态性可能并不是导致济宁地区男性不育的高危因素。     

生殖医学科门诊患者支原体感染状况与药敏分析

目的:探讨生殖医学科门诊患者支原体感染状况及其药物敏感试验结果,为临床用药提供参考。方法:对2015年5月至2016年10月生殖医学科门诊患者送检的6826例支原体培养和药物敏感试验结果进行回顾性分析。结果:支原体感染阳性率为51.2%(3495/6826),解脲脲原体(Uu)、人型支原体(Mh)及Uu+Mh同时感染阳性率分别为49.66%、3.06%和1.52%;男性患者和女性患者Uu检出率分别为44.95%和63.8%;男性患者和女性患者Mh检出率则分别为1.6%和7.41%;12种抗菌药物的敏感率分别为交沙霉素(JOS)99.86%、强力霉素(DOX)99.45%、美满霉素(MIN)99.37%、四环素(TET)96.79%、克拉霉素(CLA)93.53%、罗红霉素(ROX)92.80%、阿奇霉素(AZI)91.93%、红霉素(ERY)88.7%、司巴沙星(SPA)24.88%、氧氟沙星(OFL)22.06%、左氧氟沙星(LEV)21.70%和环丙沙星(CIP)2.28%。结论:生殖医学门诊患者中支原体感染率较高,Uu为主要感染类型,女性感染率高于男性,大环内酯类抗生素(JOS、ERY、ROX、AZI)和四环素类抗生素(TET、DOX、MIN、CLA)为抗菌药物选择首选。     

人Muse细胞体外诱导为神经前体细胞的研究

探讨成人骨髓来源的Muse细胞体外诱导为神经前体细胞的技术方法。从健康成人骨髓中分离出骨髓基质细胞（hBMSCs）,利用流式细胞分选技术从中筛选出Muse细胞,采取免疫荧光细胞化学染色和qPCR技术鉴定Muse细胞的多能干细胞特性;通过神经诱导培养基体外诱导Muse细胞分化为神经前体细胞（Muse-NPCs）,采用免疫荧光细胞化学染色和qPCR技术鉴定其神经干细胞标志物表达情况。从hBMSCs中分选出约0.58%的Muse细胞,Muse细胞表达多能干细胞标志物SSEA-3、Nanog和Oct4,其mRNA表达水平均高于hBMSCs（P＜0.01）;诱导后的Muse-NPCs表达神经干细胞标志物Nestin、βIII-tubulin,其mRNA表达水平均高于hBMSCs及Muse 细胞（P＜0.01）。从成人骨髓中成功分离出具有多能干细胞特性的Muse细胞,用体外诱导形成Muse-NPCs,可为今后细胞治疗修复神经损伤提供新的种子细胞。     

不同时期高孕激素下促排卵在高龄卵巢低反应患者助孕中的应用

目的探讨卵泡期外源性高孕激素下促排卵(progestin-primed ovarian stimulation,PPOS)方案、黄体期内源性高孕激素下促排卵(luteal-phase ovarian stimulation,LPOS)方案和拮抗剂方案在高龄卵巢低反应(poor ovarian response,POR)患者体外受精/卵母细胞质内单精子注射-胚胎移植(in vitro fertilization/intracytoplasmic sperm injection-embryo transfer,IVF/ICSI-ET)助孕中的临床应用。方法回顾性分析2015年1月至2019年6月于济宁市第一人民医院生殖医学科行IVF/ICSI-ET助孕的高龄POR患者224个控制性超促排卵(controlled ovarian hyperstimulation,COH)周期的临床资料,根据促排方案不同分为3组,分别为A组(拮抗剂方案,88个周期)、B组(PPOS方案,61个周期)、C组(LPOS方案,75个周期),观察3组患者的助孕效果。结果①A、B、C组患者年龄[(39.65±2.73)岁、(40.16±2.75)岁、(39.89±3.30)岁]、不孕年限[(3.40±2.18)年、(3.92±2.08)年、3.33±2.23)年]比较,差异无统计学意义(P>0.05)。②3组患者周期临床资料比较:A、B、C组患者外源性促性腺激素(gonadotropin,Gn)使用总量[(2124.16±590.44)U、(2075.57±592.18)U、(1993.67±556.60)U]、Gn使用时间[(8.99±2.69)d、(8.77±2.47)d、8.17±2.23)d]比较差异无统计学意义(P>0.05);A组人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,h CG)日雌二醇(estradiol,E2)水平[(3404.38±1276.94)pmol/L]、h CG日优势卵泡数[(3.09±1.23)个]、卵泡输出率(follicular output rate,FORT)(66.34%)均小于B组[(4085.66±1033.77)pmol/L、(3.70±1.42)个、81.88%]和C组[(3954.49±1150.74)pmol/L、(3.64±1.54)个、81.01%],差异有统计学意义(P<0.05);A组早发黄体生成素(luteinizing hormone,LH)峰率(6.82%)大于B、C组(1.64%、0),差异有统计学意义(P<0.05);上述临床资料B组与C组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。③3组患者实验室指标比较:A组获卵数(88个)多于B、C组(61个、75个)(P<0.05);3组患者成熟卵率(85.27%、86.18%、85.56%)、ICSI率(15.89%、17.05%、16.30%)、2PN受精率(72.09%、74.19%、75.19%)比较差异均无统计学意义(P>0.05);A组卵裂数[(2.31±1.02)个]、可利用胚胎数[(1.63±0.86)个]、优质胚胎数[(1.16±0.78)个]均少于B组[(2.79±1.25)个、(2.07±0.98)个、(1.57±0.74)个]和C组[(2.85±1.29)个、(2.11±0.99)个、(1.53±0.79)个)],周期取消率(21.59%)大于B、C组(8.20%、9.33%),差异均有统计学意义(P<0.05),上述实验室指标B组与C组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论在高龄POR患者COH周期中,PPOS方案与LPOS方案有相近的促排疗效;与拮抗剂方案相比,PPOS及LPOS方案均能提高高龄POR患者FORT、有效预防早发LH峰、降低周期取消率,获得更多的优质胚胎,提示PPOS及LPOS方案是高龄POR患者理想的COH方案。     

RNA-Seq筛选脊髓损伤后的差异基因及部分基因功能分析

目的应用RNA-Seq技术分析脊髓损伤后不同阶段基因表达差异情况。方法使用IH脊髓打击仪制备脊髓损伤模型,SD大鼠48只随机分成两组,假手术组和实验组,实验组分别于损伤后1d、4d和7d取材。运用RNA-Seq技术筛选脊髓损伤后不同时间点的差异表达基因,对差异基因进行表达模式分析,功能注释,通路分析等,筛选出血红素氧化酶1(Hmox1)等感兴趣基因进行mRNA和蛋白水平的验证及功能分析。结果 RNA-Seq结果表明,与假手术组相比,脊髓损伤后1d、4d和7d发生显著变化的基因分别有944、1362和1421个。上述差异基因在损伤后不同时间点的变化趋势大致可分为8种形式。Real-time PCR结果显示,Hmox1、尿激酶型纤溶酶原激活剂(Plau)、纤溶酶原激活物抑制剂(Serpine1)和中性粒细胞胞质因子(Ncf2)的表达变化与RNA-Seq测序结果基本一致。Western blotting结果显示,脊髓损伤后Hmox1的蛋白表达变化趋势与核酸水平一致;免疫组织化学结果显示,损伤之后Hmox1主要表达于脊髓组织的神经元中。结论 RNA-Seq技术能高效分析脊髓损伤后的差异基因,从大量差异基因中筛选出感兴趣基因的验证和功能分析为阐述脊髓损伤的分子机制提供了部分资料。     

济宁地区汉族人群MTHFR C677T基因多态性与特发性男性不育症相关性研究

目的探讨济宁地区亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T基因多态性与特发性男性不育的相关性。方法选取特发性男性不育患者145例为实验组,精液正常且有正常孕育史的男性88例为对照组,分析MTHFR C677T基因多态性在各组中分布的差异。结果与对照组相比,特发性男性不育组MTHFR C677T基因型的分布和等位基因的频率无显著性差异(P0.05)。结论 MTHFR C677T基因多态性与特发性男性不育症相关性不大,表明MTHFR C677T多态性可能不是济宁地区汉族男性不育的危险因素。