Novel multi-probe RNase protection assay set for detection of endotoxin associated receptors gene expression

Objective: To construct the multi-probe ribonuclease protection assay (RPA) template set to be used for detecting expression patterns of MD-2, TLR4, CD14 mRNAs in human peripheral blood mononuclear cells. Methods : The designed cDNA fragments of the three genes were generated by polymerase chain reaction (PCR)using specific primers and directionally cloned into EcoR I and Hind III sites of expression plasmid pSP72 containing the T7/ promoter, the linearized plasmids was used as template to synthesize anti-sense RNA probes. Then we extracted total RNA from peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and detected the dynamic expression patterns of the three genes with RPA method. Results: The proper sequence and orientation of the template set were confirmed by sequencing and the template set was successfully used to assay TLR4, MD-2 and CD14 mRNAs in human PBMC. The results showed that the three detected genes decreased transiently 1-3 hours after 100 ng/ml LPS stimulation. Conclusions: These new RPA multi-probe set provided valuable tool for the simultaneous quantitative determination of expression of TLR4, CD14 and MD-2 mRNAs in both constitutive and inducible types.     

F一800血液分析仪对血瘀证的诊断价值

月下一８００血液分析仪，对临床确诊为血瘀证的５６例患者进行了白细胞计数（ＷＢＣ）、红细胞计数（ＲＢＣ）、血红蛋白浓度（ＨＧＢ）、血细胞压积（ＨＣＴ）、平均红细胞体积（ＭＣＶ）、平均红细胞血红蛋白量（ＭＣＨ）、平均红细胞血红蛋白进度（ＭＣＨＣ）、血小板计数（ＰＬＴ）、红细胞体积分配宽度（ＲＤＷ一ｃｖ）、血小板体积分配宽度（ＰＤＷ）及平均血小板体积（ＭＰＶ）的测定，并与６０例健康者进行了对比分析，结果表明：除ＭＣＶ、ＲＤＷ一ｃｖ、ＭＰＶ及ＰＤＷ四项指标血瘀证组与健康人组相比差异非常显著（Ｐ＜０．０１）外，其余七项指标则差异不显著（Ｐ＞０．０５）。实验表明：ＭＣＶ对血瘀证具有一定的诊断价值，其敏感性高达８５；７％，而特异性为７３．３％。四项指标的联合检测，其阳性率高达９２．７％，有助于血瘀证的筛选与诊断。     

不同血细胞分析系统间检测结果的偏差评估及应用

目的 分析同一临床实验室不同型号的血细胞分析仪的性能特点，并对其检测结果进行评估，对有偏差的项目进行调整，使同一实验室不同型号的血细胞分析仪的检测结果具有可比性。方法 对本实验室所使用的Sysmex KX-21、Sysmex SE-9500和Beckman Coulter Ac．T 5diff三台血细胞分析仪的准确度、精密度、线性度分别进行评价，选定其中一台指标最优的仪器作为比对仪器，将另外两台仪器的血细胞参数进行调整。结果 因Sysmex KX-21的WBC、RBC、HGB及PLT四项指标的准确度、精密度、线性度均较理想，故选为比对仪器。Sysmex SE-6500和Beckman Coulter Ac．T 5diff有部分指标的部分评价项目与Svsmex KX-21有偏差。对有偏差的项目进行调整后，三台仪器的四项指标的相关系数的平方均不低于0．95。结论 同一实验室在使用不同型号的血细胞分析仪时，应对其进行相互校准。校准后，保证三台仪器的检测结果具有可比性。     

补阳还五汤治疗早期脑梗塞SOD、MDA变化的研究

3年来，我们分别用补阳还五汤（中药组）及706代血浆合维生素E（西药组）治疗早期脑梗塞患者各30例，观察治疗前后血清总S（）D、MDA值，探讨补阳还五汤对自由基损伤的保护作用。三资料与方法1．1；临床资料：60例患者为由CT确诊的发病3～7d住院脑梗塞患者，按人院先后．中药组     

肝酶谱测定对汉防己甲素抗肝纤维化作用的价值分析

由CCl4诱发的肝纤维化实验大鼠，经汉防己甲素（tetrandrine，Tet）治疗证明：Tet有确实可靠的抗肝纤维化作用。而Tet抗肝纤维化的作用可通过由丙氨酸氨基转移酶（ALT）、胆碱酯酶（ChE）、单胺氧化酶（MAO）、碱性磷酸酶（AKP）、r-谷氨酰转肽酶（r－GT）组成的肝酶谱的活性变化规律加以了解和掌握，因肝酶谱的检测系非介入性检测，较介入性的病理肝组织穿刺检测具有简便、准确、快速并可进行动态观察等优点。     

Compact XR型全自动血凝分析仪的性能评估

目的全面评估德国 BE公司生产的 Compact XR全自动血凝分析仪.方法用病人血浆、质控血浆和定值血浆从精密度、准确度、线性度、抗干扰性及交叉污染率等方面对 Compact XR型全自动血凝仪进行评估.结果 Compact XR型全自动血凝分析仪检测的 PT、 APTT及 FIB三项指标的精密度、准确度及 FIB的线性度等指标均较理想,而且具有一定的抗干扰能力.结论德国 BE全自动血凝分析仪性能良好,所检测项目的结果可靠,可供大中型医院使用.     

血瘀证患者血细胞参数与血液流变学指标的相关性分析

对９６例血瘀证患者和６０例健康人进行了血细胞参数和血液流变学指标的对比分析，结果表明：①平均红细胞体积（ＭＣＶ）、红细胞体积分配宽度（ＲＤＷ－ＣＶ）、平均血小板体积（ＭＰＲ）、血小板体积分配宽度（ＰＤＷ）４项血细胞参数和全血粘度、全血还原粘度、血浆粘度、红细胞沉降率、血沉方程Ｋ值５项血液流变学指标，血瘀证组明显高于健康对照组（Ｐ〈０．０１），其余指标两组相差不显著（Ｐ〉０．０５）②血瘀证组白细胞参     

内毒素相关受体基因共转染肠上皮细胞最佳转染条件的探索

目的探讨内毒素（LPS）相关受体CD14、Toll样受体4（TLR4）和MD-2基因共转染人小肠上皮细胞株（HIC）的最佳转染条件。方法用核糖核酸酶保护法（RPA）检测基因转染效率，分别研究质粒DNA的量、FuGENE 6转染试剂与质粒DNA的比例、转染试剂-质粒DNA复合物与靶细胞的作用时间及培养液中血清存在与否对转染效果的影响。结果FuGENE6转染试剂转染HIC的最佳转染条件是：每种质粒DNA的量为2．0μg（使用6cm培养皿）、转染试剂与质粒DNA的比例为4：1、转染试剂-质粒DNA复合物与HIC的作用时间为5h，而培养液中血清存在与否对转染效率无明显影响。结论建立了CD14、TLR4和MD-2三种表达质粒共转染HIC的优化转染方法。     

人肠上皮细胞耐受内毒素的分子机制

目的　观察人肠上皮细胞对内毒素刺激的反应性 ,探讨其耐受内毒素的分子机制。方法　分别用凝胶迁移阻滞法 (EMSA)和酶联免疫吸附分析 (ELISA)法检测系列浓度的内毒素刺激人小肠上皮细胞株 (HIC) 1h后细胞核转录因子 (NF κB)的活性变化和刺激 18h后细胞白细胞介素 8(IL 8)的分泌水平。用核糖核酸酶保护法 (RPA )检测HIC内毒素相关受体———Toll样受体 4(TLR4)、CD14和MD 2mRNA的表达。将转入TLR4、CD14和MD 2表达质粒的HIC经内毒素刺激后 ,检测细胞NF κB和IL 8水平的变化。结果　用系列浓度的内毒素刺激HIC后 ,均检测不到NF κB的活性和IL 8的分泌 ;HIC不表达TLR4、CD14和MD 2mRNA ;转染TLR4、CD14和MD 2质粒的HIC受脂多糖 (LPS)刺激后 ,可检测到较强的NF κB活性和明显的IL 8分泌(2 17.3 3± 3 3 .2 1)ng/L。 结论　HIC呈内毒素无反应性 ,其表面内毒素相关受体TLR4、CD14和MD 2不表达是其耐受内毒素作用的重要分子机制。     

基因多态性与脓毒症的关系研究进展 (文献综述)

脓毒症产生和转归的遗传学因素日益受到重视。基因多态性可致相同感染状况的患者有截然不同的发展过程及结果。本文总结了肿瘤坏死因子、白介素 - 1家族、白介素 - 10、热休克蛋白 - 70及纤溶酶原激活物抑制剂 - 1基因多态性与脓毒症易感性及转归的相关性研究进展。