II型登革病毒NS1基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达

目的获得II型登革热病毒NS1基因并在昆虫细胞中表达,为进一步研发登革热血清学检测试剂盒提供抗原。方法RT-PCR扩增II型登革热病毒NS1基因并测序列,并定向克隆入杆状病毒转移载体pFastBac-HTA,获得重组转移载体pFastBac-NS1。并将pFastBac-NS1转化到DH10Bac感受态细胞中,筛选到重组转座子rBacmid-NS1。在脂质体介导下将rBacmid-NS1转染Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒rBV-NS1。rBV-NS1感染Sf9细胞后,通过SDS-PAG和Western blot检测NS1重组蛋白。结果成功克隆II型登革病毒NS1基因,SDS-PAGE、间接免疫荧光和Western blot检测表明NS1基因在昆虫细胞得到表达,能与登革患者血清发生特异性免疫反应,具有免疫原性。结论II型登革病毒非结构蛋白NS1在昆虫中表达,为进一步研究NS1的生物学特性和血清学检测奠定基础。     

浙江省肾综合征出血热(HFRS)-Ⅰ型鼠脑纯化疫苗安全性、血清学、防病效果和免疫策略研究

目的　现场观察、考核兰州生物制品研究所生产的HFRS -Ⅰ型鼠脑纯化疫苗的安全性、血清免疫学与防病效果 ,并确定其免疫程序和免疫策略。方法　试验组和对照组按随机整群分组法进行分组 ;采用 0、7、2 8d及免后 1年加强 1针的免疫程序 ;分别采集免前、全程接种后 2周、加强前、加强后两周、加强后 1、2、3、4、5年的部分接种者全血和微量耳垂血 ,分别测定其中和抗体和IFA抗体 ,观察疫苗的血清免疫学效果和现场流行病学防病效果。结果　在 1995年 8月～ 2 0 0 1年 12月的 6年时间里从疫苗开始接种到加强后 5年 ,观察了HFRS -Ⅰ型鼠脑灭活纯化疫苗的安全性、血清免疫学效果和流行病学防病效果等。纵观结果 :证明该疫苗除了因疫苗中残留蔗糖导致较重较普遍的局部反应外 ,未发现其他严重的副反应 ,证明疫苗有较好安全性。从血清免疫效果看 ,86例全程接种后两周的免疫者血清 ,IFA抗体阳转率达 10 0 % ,中和抗体阳转率为4 4 4 4 % (8/ 18)。 1年后 ,IFA抗体和中和抗体阳性率分别下降到 2 8 5 7%和 14 80 %。但加强后 2周的血清IFA抗体和中和抗体阳性率分别反弹至 83 33%和 5 5 5 6 % ,其抗体几何平均滴度也随之回升 ,但不十分明显。此外 ,在加强后 2年IFA和中和抗体阳性率再次下降到较低水平 ,分别为     

2001～2003年浙江省肾综合征出血热监测分析

目的　分析浙江省肾综合征出血热 (HFRS)监测数据 ,提出预防策略。方法　描述流行病学方法分析HFRS疫情 ,调查宿主动物 ,用直接免疫荧光法 (FA)检测HFRS抗原 ,用间接免疫荧光法 (IFA)测特异性IgG抗体。 结果　近 3年来全省HFRS病例总数为 4 2 4 0例 ,死亡 19例 ,发病率为 3 12 / 10万 ,病死率为 0 4 5 %。其中 2 0 0 3年发病数和死亡数与 2 0 0 2年相比分别下降36 76 %和 5 0 0 0 %。 2 0 0 2年比 2 0 0 1年发病下降 2 4 0 0 %。全省HFRS发病仍具有相对集中和稳定的特点 ,主要分布在钱塘江沿岸的浙东、浙西丘陵地带和浙南山区。绍兴、宁波和台州发病最多 ,占全省发病总数的 5 6 30 %。全年均有发病 ,其中 5～ 7月份 (12 76例 )和 11至翌年 1月份(1341例 )发病较多 ,分别占总数的 30 0 9%和 31. 6 3%。发病以 2 0～ 5 0岁人群为主 ,占发病总数的 6 8. 35 %。职业以农民为主 ,占 79 .34%。男女性别比 2 5 :1。病例的临床诊断符合率为8…     

浙江新分离汉坦病毒ZT71株S基因片段的克隆及序列分析

目的为了获得浙江省汉坦病毒基因组更为详尽的资料,研究汉坦病毒的进化状况及变异程度,为疫苗病毒株的选择使用提供科学依据。方法本实验室利用RT-PCR方法扩增ZT71株S基因片段并克隆入质粒载体,进行核苷酸序列测定及分析。结果ZT71株S基因由1754个核苷酸组成,只有一个开放读码框架,共编码429个氨基酸。与HTN型病毒(76-118)的核苷酸和氨基酸同源性分别为72.0%和82.6%,与SEO型病毒(SR-11、R22、Guo3、8610)核苷酸和氨基酸同源性分别为88.4%—96.5%和98.1%—99.0%,与其它型汉坦病毒的同源都很低。结论表明此分离的病毒为SEO型汉坦病毒,为进一步研究其进化和变异提供了有利条件。     

ANIMAL MODEL OF RABBITS FOR RESEARCHING EPIDEMIC HEMORRHAGIC FEVER

This study reveals that the rabbit is susceptible to all epidemic hemorrhagic fever virus strains isolated from both wild rodents and humans with epidemic hemorrhagic fever. Specific fluorescence for epi- demic hemorrhagic fever virus antigen was detected in many kinds of rabbit tissue, especially in the spleen, small intestine and pancreas on the 7th-13th day of experimental infection. Using fluorescence antibody positive lungs of wild rodents, epidemic hemorrhagic fever virus can easily be isolated in rabbits as well as Apodemus agrarius. Viremia was detected in rabbits on the 4th6th day after inoculation of epidemic hemorrhagic fever virus. Epidemic he- morrhagic fever virus strains can be serially passaged in rabbits. Therefore, the rabbit provides a new animal model for the isolation and propagation of epidemic hemorrhagic fever virus and for testing the safety of epidemic hemorrhagic fever vaccine.     

响应面分析法优化黄芩总黄酮提取工艺的研究

目的优选超声波法提取黄芩总黄酮的工艺条件,为工业化生产黄芩总黄酮提供参考。方法采用超声波法提取黄芩总黄酮,对使用Al（NO3）3-NaNO2显色法测定黄芩总黄酮进行方法学考察;选取乙醇浓度、液固比、提取时间3个影响因素进行BoxBenhnken中心组合设计,利用响应面分析法（RSM）对提取工艺参数进行优化。结果方法学考察结果表明本实验室采用Al（NO3）3-NaNO2显色法测定黄芩总黄酮及超声提取工艺可靠;提取黄芩总黄酮最佳提取工艺为：乙醇浓度60%,液固比40mL/g,提取时间45min;预测值为1.776%,实际得率为1.704%,两者吻合度较高。结论 Box-Benhnken设计结合响应面分析法对黄芩总黄酮提取工艺进行优化既方便又快捷,得出的参数可信度高、实用性好。     

浙江省2000年肾综合征出血热监测分析

为探索肾综合征出血热 (HFRS)流行特征 ,以制定有针对性的防治措施。采用间接免疫荧光法 (I FAT)检测EHF病人血清中抗体 ,采用直接免疫荧光法 (FAT)检测鼠肺汉坦病毒 (HV)抗原。结果表明 ,全省 15 0 7例病人 ,主要分布在浙东和浙西丘陵区、浙南山区 ,5、6月及 12月和翌年 1月为二个发病高峰 ,青壮年农民发病最多。今后应对以姬鼠型为主的混合型疫区选择双价疫苗进行预防接种 ,以降低发病率。     

肾综合征出血热I型灭活疫苗安全性研究

肾综合征出血热（ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃｆｅｖｅｒｗｉｔｈｒｅｎａｌｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＨＦＲＳ）灭活疫苗已研制成功，推广应用后防病效果良好。为了进一步考核其在高发疫区人群接种时的安全性，我省于１９９３～１９９７年开展了有关研究，现报告如下。１材料与方法...     

浙江省肾综合征出血热鼠间疫情调查

肾综合征出血热(简称HFRS)是一种多宿主自然疫源性疾病,主要传染源为鼠类.为全面了解我省HFRS宿主动物鼠间疫情特点,更好地控制传染源,加强HFRS防制,现将1994～1996年全省HFRS宿主动物资料进行整理、分析,报告如下:1 材料和方法1.1 鼠类来源 统一用江西贵溪捕鼠器械厂生产的中号铁板夹,用夹夜法定期在室内外捕鼠,调查鼠种构成和计算鼠密度.解剖取鼠肺和用滤纸擦鼠血,置低温冰箱冷冻保存待检.