鞘氨醇激酶1对结肠癌细胞血管生成拟态的影响及其机制

目的:研究鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase1,Sphk1)对人结肠癌HT-29细胞生成血管拟态(vasculogenic mimicry,VM)的影响及其可能的机制.方法:将人结肠癌HT-29细胞分为Sphk1抑制组、Sphk1激活组、对照组.Sphk1抑制组加入N,N-二甲基鞘氨醇(N,N-dimethyl-D-erythro-sphingosine,DMS)50μmol/L;Sphk1激活组加入佛波醇-12-豆蔻酸酯-13-乙酸酯(phorbol12-myristate-13-acetate,PMA)100nmol/L;对照组加入等量的培养基.采用MTT法检测细胞生长增殖;透射电镜观察细胞形态学变化;Matrigel三维培养法观察VM形成能力;Transwell小室模型观察细胞侵袭迁移能力的变化,QT-PCR、Western blot及ELISA技术检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达.结果:DMS显著抑制细胞的增殖、侵袭、迁移并促进细胞凋亡;透射电镜可见典型的凋亡特征;三维培养中不能形成管状VM;明显减弱VEGFmRNA及蛋白表达.PMA则显著促进HT-29细胞的增殖、侵袭、迁移并抑制细胞的凋亡;透射电镜可观察到细胞增殖特征;促进三维培养中管状VM的形成;明显增强VEGFmRNA及蛋白表达.对照组、DMS组及PMA组的侵袭细胞数:112.00±6.25vs57.00±8.00,142.00±5.57;迁移细胞数:69.33±4.04vs42.00±4.16,111.00±8.03;VEGFmRNA表达量:1.000vs0.740±0.122,1.220±0.075;VEGF蛋白表达:0.39±0.05vs0.23±0.02,0.65±0.06;VEGF蛋白分泌:103.00±8.96vs63.89±8.44,201.01±17.93,均P<0.05.结论:Sphk1可促进HT-29细胞增殖、侵袭、迁移并抑制细胞的凋亡,诱导VM的形成,其机制可能是通过增强结肠癌细胞的侵袭迁移能力并促进VEGF表达而发挥作用.     

硫氧还蛋白-1在急性坏死性胰腺炎并急性胃黏膜损伤中的作用

目的探讨硫氧还蛋白-1（TRX-1）在实验性急性坏死性胰腺炎（ANP）并急性胃黏膜损伤发病机制中的作用以及抗氧化剂褪黑素对其的影响。方法72只大鼠随机分为对照组（C组,n=24）、ANP组（A组,n=24）和褪黑素干预组（M组,n=24）。A组分3次腹腔内注射6％L-精氨酸（L—Arg）1．5g／kg建立ANP模型;C组同法注射等量生理盐水;M组于首次注射L—Arg前0．5h腹腔内注射1％褪黑素50μg／kg。各实验组大鼠于末次腹腔内注射后6h、12h和24h分批处死。光镜下观察胰腺和胃组织并进行病理学评分,采用免疫组化检测TRX-1在胃黏膜的表达,并检测胃黏膜中MDA、MPO的含量。结果A组各时点胃黏膜TRX-1的染色积分及MDA、MPO的含量明显高于C组（P均〈0．05）;M组各时点胃黏膜中TRX一1的染色积分及MDA、MPO的含量明显低于A组（P均〈0．05）,胰腺和胃组织病理改变较A组明显减轻（P均〈0．05）。结论内源性的TRX-1可能是胃黏膜组织抵御氧化应激损伤的重要因子之一,TRX-1的表达量可能与组织氧化应激损伤的严重程度有关。外源性的褪黑素在ANP时可能通过其抗氧化作用,减轻胃黏膜氧化应激损伤的程度,对胃黏膜有一定的保护作用。     

鞘氨醇激酶-1在结肠癌中的作用研究进展

鞘氨醇激酶(Spk)是一种新近发现的脂类激酶.近年来的研究逐渐阐明了Spk结构特征及其功能,并发现Spk1对肿瘤尤其是结肠肿瘤的发生发展具有促进作用.抑制Spk1不但能促进肿瘤细胞的凋亡,还能提高结肠肿瘤对化疗药物的敏感性.     

高甘油三酯血症对大鼠急性胰腺炎模型中胰腺导管上皮细胞间紧密连接的影响研究

目的研究高甘油三酯血症(hypertriglyceridemia,HTG)对大鼠急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)模型胰腺组织细胞间紧密连接(tight junctions,TJs)的影响。方法48只4周龄雄性SD大鼠随机分成普通饲养组(24只)和高脂饲养组(24只),4周后普通饲养组随机分为C组和AP组,高脂饲养组随机分为HTG组和高甘油三酯血症急性胰腺炎(HTGP)组。AP组和HTGP组经腹腔注射雨蛙肽建立AP模型,C组和HTG组经腹腔注射同等剂量的生理盐水,分别于造模24 h、48 h处置大鼠,采用HE染色法观察胰腺病理改变,免疫组织化学法检测胰腺组织中TJs蛋白脂解刺激脂蛋白受体(LSR)、Tricellulin蛋白(TRIC)、ZO-1、occludin、claudin-7定位及表达,透射电镜观察胰腺导管上皮细胞间TJs变化情况。结果高脂饲养组的大鼠血清甘油三酯(triglyceride,TG)较普通饲养组明显升高(P<0.05);HTG组胰腺组织病理评分高于C组(P<0.05),相同时点HTGP组胰腺组织病理评分高于AP组,但差异无统计学意义(P>0.05);HTG组LSR、TRIC表达显著低于C组(P<0.05),AP组和HTGP组的24 h时点LSR、TRIC、occludin、claudin-7表达均低于相应对照组(P<0.05),HTGP组24 h时点LSR和TRIC的表达显著低于AP组的对应时点(P<0.05);透射电镜观察AP组和HTGP组的24 h时点,发现主胰管上皮细胞TJs较C组和HTG组减少、细胞间隙增宽,且HTGP组比AP组的细胞间隙增宽更明显。结论TJs蛋白LSR、TRIC、ZO-1、occludin、claudin-7在HTG及HTGP大鼠胰腺组织中表达较非高脂模型下降,其中以三细胞间紧密连接(tricellular tight junctions,tTJs)蛋白LSR及TRIC下降明显,提示HTG可能减弱胰腺组织的tTJs,进而加重胰腺组织损伤。     

急性坏死性胰腺炎大鼠硫氧还蛋白-1肺表达的实验研究

目的：探讨内源性硫氧还蛋白一1（Thioredoxin-1,Trx-1）在急性坏死性胰腺炎（AcuteNecrotizingPancreatitis,ANP）大鼠模型肺组织中的表达。方法：将48只SD大鼠随机分成对照组（C组,n=24）、急性胰腺炎组（A组,n=24）。A组用6％的左旋精氨酸（L-Arginine,L—Arg）腹腔内注射,每次1．5mg／g体重,共3次,注射间隔1h,诱导ANP模型;C组同法注射等量生理盐水。在注射完L—Arg后的第6小时、第12小时和第24小时3个时点分批处死大鼠,应用免疫组织化学技术检测各组ANP肺组织Trx-1的表达,并观察各组对应各时点胰腺和肺组织病理学改变的变化。结果：①A组大鼠胰腺和肺组织病理损伤在各时点比C组明显加重（P〈O．01）;②A组肺组织Trx-1各时点表达较C组明显增强（Pd0．01）;③在第24小时,A组血清淀粉酶较C组显著升高（Pd0．01）;④A组胰腺病理损伤与血清淀粉酶、肺损伤评分、肺免疫组化评分呈正相关（rx=0．374,P=0．046;rx=0．452,P=0．027;n=0．500,P=0．013）。结论：在ANP肺组织损伤程度与胰腺组织损伤程度密切相关。在ANP肺损伤组织中Trx-1表达显著增加,肺组织Trx-1过度表达与急性胰腺炎相关性肺损伤关系密切。     

急性坏死性胰腺炎大鼠Ghrelin表达的变化及GHRP-2对其的影响

重症急性胰腺炎（server acute pancreatitis,SAP）患者早期病情变化迅速、病死率高,虽然近年SAP的治疗手段有很大进步,但寻找早期干预疾病进程、减少疾病重症化仍是本领域的研究热点之一.生长激素释放肽-2（growthhormone releasing peptides,GHRP-2）是ghrelin受体激动剂,它可以减轻肝脏炎症、急性肺损伤,而且外源性ghrelin对急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP）的炎症反应有抑制作用,但内源性ghrelin与AP发病机制的关系未明确.本研究观察GHRP-2干预急性坏死性胰腺炎（acute necrotizing pancreatitis,ANP）大鼠后内源性ghrelin表达的变化.     

急性胰腺炎患者血清晚期氧化蛋白产物检测的临床意义

目的 检测急性胰腺炎患者血清晚期氧化蛋白产物（AOPP）的水平,结合IL-6及反映急性胰腺炎（AP）严重程度的指标及相关临床资料,探讨AOPP与AP严重程度的关系.方法 回顾性分析我院2010年ll月-2012年9月临床上确诊的AP患者58例.其中,重症急性胰腺炎（sever acute pancreatitis,SAP） 18例,轻症急性胰腺炎（mild acute pancreatittis,MAP）40例.应用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测AP患者入院24 h内的血清AOPP和IL-6含量.同时检测患者血常规、肝功能、血钙（Ca）、血糖（GLU）、乳酸脱氢酶（LDH）.结果 SAP组血清白细胞（WBC）、GLU、LDH高于MAP组,差异有统计学意义（P＜0.05）,白蛋白（ALB）、血Ca低于MAP组,差异有统计学意义（P ＜0.05）;SAP组、MAP组血清AOPP含量分别为（38.12± 11.67） ng/ml和（29.40±14.19） ng/ml,两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;SAP组、MAP组血清IL-6含量分别为（211.01±107.98） pg/ml和（129.72±56.53） pg/ml,两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.AP患者血清AOPP与WBC、GLU呈正相关性（P＜0.05）,与LDH、血Ca、ALB无明显相关性（P＞0.05）.结论 血清AOPP增高可能与AP的严重程度有关;AOPP可能参与AP发生、发展中的炎症反应过程.     

SphK1对结肠癌lovo细胞的增殖、迁移和凋亡的影响

目的:探讨鞘胺醇激酶1(SphK1)对结肠癌lovo细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其作用机制.方法:培养人结肠癌lovo细胞株,实验分3组:对照组、PMA组和DMS组.PMA组加入佛波醇-12-豆蔻酸酯-13-乙酸酯(PMA,100nmol/L),DMS组加入N,N-二甲基鞘胺醇(DMS,50μmol/L),对照组加入等量的培养基.采用MTT法和克隆形成实验检测细胞生长增殖的变化,流式细胞术检测细胞凋亡,Tranwell小室模型观察细胞迁移能力的变化,RT-PCR检测mRNA的表达,Westernblot检测蛋白的表达.结果:PMA显著促进细胞的增殖、迁移并抑制细胞的凋亡,DMS则显著抑制细胞的增殖、迁移并促进细胞的凋亡(对照组、PMA组和DMS组的细胞增殖活力:0.71±0.03vs1.05±0.05vs0.46±0.04;克隆形成率:1.32%±0.26%vs2.17%±0.17%vs0.73%±0.13%;凋亡率:16.25%vs9.15%vs32.58%;迁移细胞数:72.19±3.36vs98.46±6.25vs40.48±4.27;均P<0.05).PMA显著促进黏着斑激酶(FAK)的活性和表达,相反DMS则抑制FAK的活性和表达[对照组、PMA组和DMS组FAKmRNA的表达强度:0.151±0.008vs0.212±0.014vs0.114±0.021;蛋白:0.332±0.022vs0.374±0.029vs0.296±0.018;磷酸化FAK(p-FAKTyr397)蛋白:0.186±0.032vs0.234±0.017vs0.112±0.023;均P<0.05].结论:SphK1可促进lovo细胞的增殖和迁移能力并抑制细胞的凋亡,其机制可能是通过激活FAK通路而发挥作用.     

基于生物信息学分析NUSAP1在胰腺癌中的表达及临床预后分析

目的 研究核仁纺锤体相关蛋白1 (Nucleolar and spindle associated protein 1,NUSAP1)在胰腺癌组织中的表达及临床预后分析。方法 利用GEPIA数据库检索NUSAP1基因在胰腺癌组织和正常组织中的表达水平,TCGA数据库及组织芯片研究及验证NUSAP1在胰腺癌的临床预后分析。结果 GEPIA数据库分析结果显示胰腺癌组织中NUSAP1的表达高于正常对照组(P<0.05)。TCGA数据库结果显示,高表达NUSAP1的胰腺癌患者生存时间较低表达NUSAP1的患者更短(HR=2.02,P<0.05)。在病理分级G3-G4组、残余瘤R1和R2组、胰腺癌治疗进展组中NUSAP1的表达均分别高于病理分级G1-G2组、残余瘤R0组、治疗缓解组(P<0.05)。在死亡组中,NUSAP1的表达高于存活组(P<0.05)。组织芯片免疫组化结果显示,与癌旁组织相比,NUSAP1在胰腺癌中呈高表达(χ²=44.10,P<0.001),NUSAP1高表达的患者生存时间更短,预后越差。单因素回归分析结果显示NUSAP1...