蓝氏贾第鞭毛虫α-19贾第素的单克隆抗体制备与亚细胞定位研究

目的 制备蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,简称贾第虫)α-19贾第素的特异性抗体,并通过免疫荧光对该贾第素的亚细胞定位进行鉴定。方法 经PCR获得α-19贾第素编码区片段,双酶切将目的 片段连入原核表达载体pET-28a(+)-α-19,重组载体转化E.coli Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE及 Western blot验证表达情况;采用设计的合成抗原肽免疫小鼠经细胞融合和筛选制备特异性单克隆抗体,分别用贾第虫滋养体裂解物和α-19贾第素重组蛋白Western blot验证抗体特异性和结合力,选择特异性最好的单克隆抗体通过免疫荧光技术对α-19贾第素的亚细胞定位进行观察。结果 成功构建了原核表达载体pET-28a(+)-α-19,经SDS-PAGE及 Westernblot分析显示重组载体在大肠杆菌中表达出相对分子量约49 kD的重组蛋白,与理论值相符;Western blot显示单克隆杂交瘤细胞株α-19-3-7-3-5分泌的抗体结合力和特异性俱佳,可用于定位研究;免疫荧光定位结果表明α-19贾第素主要位于贾第虫滋养体的腹鞭毛。结论 制备了α-19贾第素的特异性单克隆抗体,免疫荧光显示α-19贾第素定位于贾第虫滋养体的腹鞭毛。     

中性粒细胞胞外诱捕网在抗寄生虫免疫中的作用研究进展

中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps, NETs）是活化的炎性中性粒细胞在感染或炎症应答期主动释放的一种串珠样纤维网状物质,由染色质DNA和多种胞内蛋白成分组成,可通过缠绕致病菌限制其扩散,同时通过各种抗菌蛋白杀伤致病菌,被认为是中性粒细胞除吞噬和脱颗粒作用外的第三种杀菌机制。近年研究显示,NETs也参与抗寄生虫免疫过程。本文就NETs在抗寄生虫免疫中作用的研究进展作一综述,以期为寄生虫病发病机制研究以及相关治疗药物开发提供参考。     

蓝氏贾第鞭毛虫滋养体有丝分裂的初步观察

目的观察体外培养的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体有丝分裂。方法用改良的TYI-S-33培养基培养贾第虫。从培养第6h开始,每间隔2h取分裂的细胞直至第24h,制备涂片,Giemsa染液染色,用光镜和透射电镜观察细胞分裂状况。结果有丝分裂前期:染色质凝集形成细长的染色质丝;中期:形成大小约1μm的棒状染色体,且全部排列在细胞核中央,或分散在核内;后期:姐妹染色单体分开,向细胞核两极移动,核膜拉长;末期:核膜中间向内缢束呈葫芦状,细胞核缢裂成两个子核,随即进行胞质分裂。结论蓝氏贾第鞭毛虫滋养体有丝分裂与典型真核细胞相似,但分裂期核膜始终存在,为半开放式分裂。     

蓝氏贾第鞭毛虫末端结合蛋白 1 基因的克隆与原核表达

目的 克隆并原核表达 C2 株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lambia,简称贾第虫)末端结合蛋白 1(End-bind- ing protein 1,geb1)基因,获得重组 gEB1 蛋白。 方法 由于 geb1 基因无内含子,我们以 C2 株贾第虫基因组为模板,以国际标准株WB 株geb1 基因序列为参考序列,设计引物克隆 geb1 基因,经 NcoⅠ和 XhoⅠ双酶切与原核表达载体 pET-28α(+)连接,转化感受态 E. coli TOP10,经筛选和测序验证后导入大肠杆菌 E. coli Rosetta(DE3),异丙基-β-D -硫代半乳糖(IPTG)诱导 gEB1 蛋白表达,产物经 SDS-PAGE 和 Western blot 进行检测和验证。 结果 成功构建了表 达 C2 株贾第虫 geb1 基因的原核表达载体 pET-28α(+)- gEB1,转化入大肠杆菌 E. coli Rosetta(DE3),重组菌株经 0. 1 mmol / L IPTG ,30℃低温诱导 5 h, SDS-PAGE 和 Western blot 显示,在相对分子量约 29 KDa 的位置出现目的蛋 白条带,与理论值一致。 结论 用大肠杆菌成功表达了 gEB1 蛋白,为 gEB1 蛋白的功能研究和抗体制备提供了材料。     

老年人心肌梗死与血管紧张素原基因T174M多态性关系

目的 探讨血管紧张素原（angiotensinogen，AGT）基因T174M变异与老年人心肌梗死（MI）的发病关系。方法 采用聚合酶链反应（PCR）、限制性片段长度多态性（RFLP）分析，对55例呈MI患者和60例无冠心病证据的对照组（老年人）进行AGT基因T174M等位基因检测。结果 MI患者AGT基因174MM型（7．27％）和M174等位基因（16．36％）的频率显著高于健康对照组（分别为1．67％和9．17％，X^2=7．55，P=0．022，X^2=5．79，P=0．016），经校正冠心病的主要危险因素后，AGT基因174MM仍可显著增加心肌梗死发生的危险性（比数比3．66，P=0．018）。结论 AGT基因T174M可能是老年人MI发病的重要危险因素之。     

蓝氏贾第鞭毛虫滋养体细胞核分裂过程研究进展

蓝氏贾第鞭毛虫在动物分类学中属于原生动物门,鞭毛虫纲,双滴虫目,贾第虫属.贾第虫从细胞及分子水平上来看其是真核生物中最先分支出来的类群,尚不具有线粒体和典型的高尔基氏器,核糖体为70S型,为源真核生物,属于低等的真核生物,其繁殖方式主要是有丝分裂,在分裂过程中核膜始终不解体,为半开放式分裂.因此关于贾第虫滋养体核分裂过程成为近年来研究的热点,本文从细胞核结构和细胞核分裂两方面对贾第虫有丝分裂过程进行综述.     

蠕形螨流行病学研究进展

蠕形螨俗称毛囊虫(follicle mite),在动物分类上属于节肢动物门,蛛形纲,真螨目,蠕形螨科,是一类永久性寄生螨,寄生于人和哺乳动物的毛囊和皮脂腺内.……     

蓝氏贾第鞭毛虫细胞骨架蛋白的分子生物学研究进展

蓝氏贾第鞭毛虫作为真核生物的模型,越来越受到广大生物学学者的重视,贾第虫借助细胞骨架蛋白附着于宿主肠上皮细胞,导致贾第虫病。将蓝氏贾第鞭毛虫细胞骨架蛋白成分作为新药物开发靶点的研究与日俱增。本文综述了蓝氏贾第鞭毛虫细胞骨架蛋白的分子生物学研究方法及最新进展,为新药物的开发及贾第虫骨架蛋白的进一步研究提供有价值的资料。     

医学研究生创新教学模式探讨

在一个创新成为国家竞争优势主要来源的时代,培养学生的研究创新能力无疑成为教育最重要的目标之一,研究生教育尤其如此。与发达国家的研究生培养相比较,我国研究生教育的差距主要体现在自主创新能力的匮乏,这和我国的教育体制和教学模式有着密切的关系。因此笔者将 CBL 与 PBL 融合到传统的教学方法中,探讨三轨式教学模式在医学研究生教育中能否促进学生对所学知识进一步的理解和深入;在实验和实践教学中是否能提高学生解决问题及创新的能力,从而对医学研究生教育中的传统模式进行相应的改革与创新。