供体猪心在UW液中的保存时间和温度对其组织结构的影响

目的:探究体外保存时间和UW液温度对供体猪心组织结构的影响.方法:按照临床上现行的供体心脏标准获取流程获取18头中华小型猪的心脏,分别用21℃、4℃和-4℃的UW液在体外保存供体猪心;每一温度下,分别保存供体猪心3 h、6 h和9 h(每种保存条件下保存2个猪心).然后对体外保存后的猪心进行组织取材,通过苏木素-伊红(...     

纳米介导的缺氧诱导因子1α小干扰RNA抑制人食管鳞癌TE-1细胞生长

背景:纳米微粒作为一种比较理想的非病毒基因递送载体,具有无免疫原性和致瘤性等优越性.利用纳米技术和基因干扰技术阻断缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1,HIF-1α)在食管鳞癌组织的表达,降低癌细胞对化疗药物的耐药性,理论上成为能够抑制食管癌细胞生长的有效方法.目的:探讨HIF-1α小干扰RNA纳米微粒对人食管鳞癌TE-1细胞生长的抑制作用.设计、时间及地点:以体外培养的食管鳞癌TE-1细胞为对象,基因水平完全随机对照实验,于2007-01/2008-12在中山大学附属第三医院中心实验室完成.材料:由上海生物工程公司合成HIF-1α小干扰RNA,采用超声乳化法制备纳米微粒.人食管鳞癌TE-1细胞株购自中科院上海细胞库.方法:体外培养的人食管鳞癌TE-1细胞分为4组:分别为生理盐水组,不含基因的纳米微粒组,HIF-1α小干扰RNA组,HIF-1α小干扰RNA纳米微粒组.主要观察指标:RT-PCR检测HIF-1αmRNA的表达,Western-blot法检测HIF-1α蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;MTT法检测细胞增殖情况.结果:处理72 h后HIF-1α小干扰RNA纳米微粒组细胞的HIF-1αmRNA表达和HIF-1α蛋白表达低于其他3组(P＜0.01),细胞凋亡率高于其他3组(P＜0.01).HIF-1α小干扰RNA纳米微粒组细胞增殖受明显抑制,生长缓慢,与其他3组比较,差异有显著性意义(P＜0.01).结论:HIF-1α小干扰RNA纳米微粒能够有效减少食管鳞癌TE-1细胞的HIF-1αmRNA和蛋白的表达,提高肿瘤细胞的凋亡,显著抑制TE-1细胞的生长.     

恩度联合吉西他滨和顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的可行性研究

背景与目的 观察抗血管生成药物--恩度联合吉西他滨+顺铂方案一线治疗晚期非小细胞肺癌的疗效及毒副反应.方法 回顾性分析2006年1月-2008年4月我科收治的8s例晚期非小细胞肺癌患者的临床资料,其中吉西他滨+顺铂(GP)方案治疗55例,恩度+吉西他滨+顺铂(GPE)方案治疗30例.以完全缓解、部分缓解、稳定和病情进展为近期疗效评价指标;远期疗效评价指标包括无进展生存时间、中位生存期和1年生存率.评价血液学毒性、消化道反应、心脏毒性等毒副反应.结果 GP方案组与GPE方案组的总有效率分别为30.996和53.3%,差异有统计学意义(P<0.05);无进展生存时间分别为5.8月和6.9月,中位生存期和1年生存率相似,差异无统计学意义(P>0.05).两组患者的Ⅲ-Ⅳ度中性粒细胞减少和血小板减少发生率、恶心呕吐发生率,差异无统计学意义(P>0.05),但心率失常发生率GP方案组(4.0%)较GPE方案组(9.5%)低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 GP方案加用恩度可以提高治疗晚期NSCLC的有效率,延长无疾病进展时间,其毒性可以耐受,但远期疗效有待于进一步观察.     

血管内皮抑素联合吉西他滨和顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的临床观察

目的:观察抗血管生成的内皮抑素-恩度联合吉西他滨+顺铂方案一线治疗晚期非小细胞肺癌的疗效及毒副反应.方法:回顾性分析2006-01-2008-04收治的85例晚期非小细胞肺癌患者的临床资料,其中吉西他滨+顺铂(GP)方案治疗55例,恩度+吉西他滨+顺铂(GPE)方案治疗30例.以完全缓解、部分缓解、稳定和病情进展为近期疗效评价指标;远期疗效评价指标包括无进展生存时间、中位生存期和1年生存率.评价血液学毒性、消化道反应和心脏毒性等毒副反应.结果:GP方案组与GPE方案组的总有效率分别为30.9%和53.3%,差异有统计学意义,P<0.05;无进展生存时间分别为5.8个月和6.9个月,中位生存期和1年生存率相似,差异无统计学意义,P>0.05.两组患者的Ⅲ～Ⅳ度中性粒细胞减少和血小板减少发生率、恶心呕吐发生率,差异无统计学意义,P>0.05,但心率失常发生率GP方案组(4.0%)较GPE方案组(9.5%)低,差异有统计学意义,P<0.05.结论:GP方案加用恩度可以提高治疗晚期NSCLC的有效率,延长无疾病进展时间,其毒性可以耐受,但远期疗效有待于进一步观察.     

Dynamics of Interstitial Calcium in Rat Myocardial Ischemia Reperfusion Injury In Vivo简

Intracellular calcium overload is a key factor for myocardial ischemia reperfusion injury（IR）. However, there was no report for interstitial calcium concentration dynamics. We investigated the interstitial calcium dynamics in rat myocardial IR model in vivo. A microdialysis system was involved, and the time delay of the system and recovery time was introduced and tested with a fluids switching method. Twelve SD rats were divided into IR or control group. Myocardial IR was induced by ligating（20 min） then releasing（60 min） the suture underlying left anterior descending branch. Mycrodialyisis probe was implanted into the left ventricular myocardium perfusion area for occlusion. Dialysate samples were collected every 10 min. Dialysate calcium concentration was detected with an atomic absorption spectrophotometer. Recovery time for the microdialysis system was 20 min, and recovery rate was 16%. Dialysate calcium concentration showed no changes during ischemia, descended immediately after reperfusion, reached the lowest level（67% of baseline value） 20 min after reperfusion, then escalated slowly. Recovery time was an important parameter for mycrodialysis technique, and it should not be neglected and needed to be tested. Our data suggest that interstitial calcium concentration in rats with myocardial IR in vivo kept steady in ischemia, descended rapidly at the initial reperfusion, then rebounded slowly. In conclusion, we introduced the concept of recovery time for microdialysis and provided a simple testing method.     

纳米微粒介导Bcl-xl小干扰RNA诱导人肺腺癌细胞凋亡

目的 探讨纳米微粒介导的Bcl-xl小干扰RNA(siRNA)对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响.方法 制备包载Bcl-xl siRNh的纳米微粒,体外培养人肺腺癌A549细胞.以纳米微粒介导将人工合成的Bcl-xl siRNA转染细胞后,将细胞分为4组:生理盐水组、纳米微粒组、siRNA-c-纳米微粒组及siRNA-纳米微粒组,其中siRNA-c-纳米微粒组及siRNA-纳米微粒组又分为0.1、0.2、0.4、0.8 μmol/L4个浓度组.应用TUNEL法检测肺癌细胞凋亡;RT-PCR半定量检测Bcl-xl mRNA的表达;免疫细胞化学染色法检测Bcl-xl蛋白的表达.结果 转染Bcl-xl siRNA后,各处理浓度组的肺腺癌细胞凋亡指数随浓度的增加而逐渐升高[0.1、0.2、0.4、0.8 μmol/L组分别为(19.7±2.6)%、(32.4±5.5)%、(46.0±5.3)%和(55.4±5.9)%],与生理盐水组、纳米微粒组及同浓度的siRNA-c-纳米微粒组相比,差异均有统计学意义(P均<0.05).转染浓度为0.8 μmol/L时,肺腺癌细胞内Bcl-xl mRNA及其蛋白的表达明显降低(P<0.05),Bcl-xl蛋白表达阳性单位下降至0.0787±0.0233;Bcl-xl mRNA表达下降至0.856±0.242,与其它各组差异有统计学意义(P<0.05).结论 纳米微粒能有效介导Bcl-xl siRNA进入肺腺癌细胞.Bcl-xl siRNA能够特异性减少肺腺癌细胞的Bcl-xl的mRNA和蛋白的表达,抑制肿瘤细胞增殖及诱导细胞凋亡.     

缺氧诱导因子1α小干扰RNA联合顺铂抑制人食管鳞癌TE-1细胞裸鼠移植瘤的生长

目的 探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)小干扰RNA(siRNA)联合顺铂对人食管鳞癌TE-1细胞裸鼠移植瘤生长的影响.方法 体外培养人食管鳞癌TE-1细胞,接种于12只裸鼠右上肢外侧皮下,建立裸鼠荷瘤模型开始抑瘤实验.实验分为4组,每组3只,A组用生理盐水瘤内注射;B组用顺铂(20mg/L)瘤内注射;C组用HIF-1α siRNA(20 μmol/L)瘤内注射;D组用HIF-1α siRNA(20 μmol/L)和顺铂(20 mg/L)协同瘤内注射.各组注射体积均为20 μl,每周测量肿瘤体积变化.3周后处死裸鼠,测量各组移植瘤质量;RT-PCR半定量检测各组移植瘤TE-1细胞HIF-1α mRNA的表达;免疫组织化学法检测其HIF-1α蛋白的表达;流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI双标检测其细胞的凋亡.结果 抑瘤实验开始3周后,A、B、C和D组的移植瘤体积分别为(1.477±0.132)cm~3、(1.200±0.114)cm~3、(1.223±0.129)cm~3 和(0.890±0.141)cm~3;移植瘤质量分别为(7.38±0.96)g、(6.35±0.73)g、(6.12±0.65)g和(3.51±0.42)g.B、C、D 3组的抑瘤率分别为14.0%、17.1%、52.4%,其中D组移植瘤的生长受抑制最明显,与其他3组比较差异有统计学意义(P<0.05).C和D组TE-1细胞的HIF-1α mRNA表达下调至0.343±0.080和0.312±0.055,蛋白表达下调至0.196±0.018和0.229±0.035,与A(mRNA 1.315±0.179,蛋白0.523±0.102)、B(mRNA 1.483±0.460,蛋白0.542±0.174)两组差异有统计学意义(P<0.01),而C、D两组间差异无统计学意义(P>0.05).A、B、C和D组的TE-1细胞凋亡率分别为(6.13±1.38)%、(28.30±4.82)%、(34.10+5.56)%、(52.88±8.77)%,其中D组与其他3组比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 HIF-1α siRNA能有效下调裸鼠体内食管鳞癌TE-1细胞HIF-1α的表达,提高顺铂的细胞毒性作用,诱导细胞凋亡,显著抑制移植瘤的生长.     

致心律失常型右心室心肌病患者冠状动脉病变与心脏病理和心肌代谢组学的关系

目的]研究致心律失常型右心室心肌病(ARVC)患者冠状动脉狭窄对心脏病理和心肌代谢组学的影响。 [方法]取35例接受心脏移植的ARVC患者受体心脏冠状动脉和心室6个部位(左心室前壁、侧壁、后壁以及右心室前壁、后壁、室间隔),冠状动脉组织切片行HE染色,并定量分析其狭窄程度；心室组织切片行Masson染色,经图像处理后定量分析心脏组织中心肌、纤维、脂肪成分所占比例。冠状动脉供血区域心脏组织进行代谢物提取及代谢组学分析。无冠状动脉狭窄组、轻度冠状动脉狭窄(＜50%)组、中重度冠状动脉狭窄(≥50%)组的心脏组织中心肌、纤维、脂肪成分的差异和代谢物差异进行对比分析。 [结果]35例ARVC患者中,中重度冠状动脉狭窄患者10例(28.6%),轻度冠状动脉狭窄患者11例(31.4%),无冠状动脉狭窄患者14例(40.0%)。中重度冠状动脉狭窄患者接受心脏移植的年龄显著高于轻度冠状动脉狭窄患者和无冠状动脉狭窄患者[(48.5±10.7)岁比(33.8±10.5)岁和(31.0±13.4)岁,P＝0.015]。中重度、轻度冠状动脉狭窄患者和无冠状动脉狭窄患者的心肌、纤维、脂肪成分所占比例在左心室前壁、侧壁、后壁和右心室前壁、后壁、室间隔6个部位的差异均无统计学意义(P＞0.05)。代谢组学检测发现105种代谢物,集中于三羧酸循环、氨基酸代谢、嘌呤代谢、嘧啶代谢、戊糖磷酸代谢及糖酵解糖异生代谢等通路,与无狭窄冠状动脉供血区心肌组织相比,中重度、轻度狭窄冠状动脉供血区心肌组织中没有显著上调或下调的代谢产物。主成分分析和热图分析表明三组之间的代谢谱无显著差异(P＞0.05)。 [结论]在ARVC患者中,中重度、轻度冠状动脉狭窄与无冠状动脉狭窄者的心脏组织中心肌、纤维、脂肪所占比例无明显组间差异,代谢组学检测亦无明显组间差异。