快速鉴定幽门螺杆菌与宿主基因型的方法学研究

目的探索采用焦磷酸测序技术进行幽门螺杆菌(Hp)鉴定与耐药以及宿主胃癌易感相关基因多态性分析的可行性,为临床提供一种快速的分析手段和诊疗依据。方法提取60例胃黏膜活检标本DNA(Hp阳性、阴性各30例),PCR扩增Hp 16S rDNA,23S rDNA以及人白细胞介素1B(IL-1B)基因特异性片段,对3个片段同时进行焦磷酸测序分析。结果 30例Hp阳性标本16S rDNA测序结果一致,均为5-′CGCGCAATCAGCGT-CAGTAATG-3′,该序列可作为标志性序列来鉴定Hp;对Hp阳性标本23S rDNA 2142及2143位点的多态性分析发现2142A→G突变,该突变通常会导致Hp对克拉霉素的耐药;对60例标本IL-1B基因-31和-511位点的多态性检测表明,-31位点有两种基因型,其中A/G基因型占80.0%,G/G 20.0%;-511位点有3种基因型,其中T/C基因型占60.0%,T/T基因型占26.7%,C/C基因型占13.3%。结论运用焦磷酸测序技术进行Hp鉴定、耐药性分析以及宿主胃癌易感性分析,具有准确、快速、操作方便、通量高等优势;除了胃黏膜活检标本,该方法亦可应用于其他标本如粪便、唾液、胃液等的Hp检测,同时可推广至其他菌种的鉴定和耐药分析,在弥补甚至替代传统的病原菌检测方面具有广阔的应用前景。     

老年不稳定型心绞痛患者血浆凝血酶激活的纤溶抑制物的检测及其临床意义

目的探讨老年不稳定性心绞痛(UA)患者血浆凝血酶激活的纤溶抑制物(TAFI)的临床意义。方法采用ELISA法分别检测60例老年UA患者与30例正常对照组血浆TAFI的含量(TAFI:Ag)及活性(TAFIa:Ag)的变化情况,检测凝血-纤溶指标,结合病理资料进行相关性分析。结果老年UA患者治疗前TAFI:Ag和TAFIa:Ag及F1+2、D-D、Fib水平均明显高于治疗后和正常对照组(P<0.05),有效治疗2周后TAFIa:Ag降低,TAFI:Ag及F1+2、D-D、Fib基本恢复正常(P>0.05),治疗前血浆TAFI:Ag与F1+2、Fib呈正相关:血浆TAFIa:Ag与F1+2、Fib呈正相关。结论血浆TAFI含量和活性与老年UA发生发展密切相关,TAFI含量和活性的升高增加了老年UA的发病风险。     

红细胞膜锚蛋白研究进展

锚蛋白是红细胞膜结构蛋白之一。通过与其它膜结构成分的相互作用而影响细胞结构及功能。锚蛋白对红细胞膜流动性、抗氧化作用以及红细胞的粘附功能具有重要的调控作用。     

PCR-Pyrosequencing 快速检测药物代谢酶基因CYP2C19多态性方法的建立及应用

目的 旨在建立一种快速及高通量的CYP2C19药物代谢酶相关基因多态性的检测方法,为个体化治疗提供用药参考.方法 抽取96例人外周血DNA,应用带有生物素标记的扩增引物,经PCR扩增并制备焦磷酸测序单链模板,于PyroMark ID焦磷酸测序仪上进行焦磷酸测序,且以Sanger测序法测序结果为对照,观察分析准确性.结果 运用焦磷酸测序可以成功检测CYP2C19相关基因型;单个SNP位点检测经与Sanger测序方法比较,符合率为100％.同时,通过设计焦磷酸测序引物,两个PCR产物可合并于一管中进行焦磷酸测序,与单管检测一个位点的焦磷酸测序方法相比,能有效降低检测成本,节省检测时间.结论 该方法可准确、高通量、快速检测药物代谢酶相关基因多态性,该方法在个性化医疗上有较大的推广应用价值,也可以将该平台运用于其他疾病相关基因多态性检测.     

高通量检测全基因组DNA甲基化方法的建立

目的:建立焦磷酸测序技术联合甲基化敏感性内切酶高通量定量分析全基因组DNA甲基化水平的方法(PME)。方法:以Lambda DNA为标准品,取>10倍浓度梯度DNA(125、250、500、1 000和2 000ng)进行双酶切后焦磷酸测序,检测甲基化程度,分析测序峰值与模板量相关性;以经甲基化酶(M.SssⅠ)处理的Lambda DNA为阳性对照品,与阴性对照品(未经甲基化酶处理的阴性Lamb-da DNA)混合(混合比例分别为0、25%、50%、75%和100%),进行甲基化程度相关性分析;以该实验方法对8例健康体检者和6例非小细胞肺癌(NSCLC)组织DNA进行分析。结果:测序峰值与模板量呈线性相关,在125～2 000ng,实验重复性良好;阳性对照品甲基化程度为100%,阴性对照品为0,甲基化水平呈线性相关,相关系数为0.999。健康人甲基化水平平均值为0.446 64,NSCLC患者为0.489 150,差异明显。结论:成功构建了焦磷酸测序技术联合甲基化敏感性内切酶分析全基因组DNA甲基化水平的方法。该方法适合于样本的高通量分析,为临床检测全基因组DNA甲基化状态、肿瘤早期诊断提供了新思路。     

Synchron CX3分析仪CO2测定试剂的研制与应用

为适应现代医学科学技术的飞速发展，我们对BeckmanSynchronCX3的二氧化碳（CO2）试剂进行了研制并获成功，现将研制结果与应用情况报告如下：材料和方法一、仪器：1．经过标定的SynchronCX3型全自动生化分析仪（美国Beckman公司）2．万分之一的光电分析天平（上海）3AVL995Hb血气分析仪（瑞士）4DDS-11A型电导率仪（上海）5．FM-5J冰点渗透压计（上海）二、试剂随机进口CO2碱性试剂和酸性试剂．三、自研试剂的组成：1．CO2碱性试剂用万分之一的光电分析天平准确称取KHCO3（AR）623．9mg，KCL（AN）746．9mg，用重蒸水溶解后…     

银屑病患者内皮损伤机制探讨

本文对42例银屑病患者进行了血清肿瘤坏死因子（TNF）、一氧化氛（NO）、超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）水平检测，并与30例正常人作对比分析，结果显示：（1）银屑病患者血清TNF、MDA、NO较对照组显著增高（P＜0．01），而SOD则显著降低（P＜0．01）；（2）疾病进行期较静止期血清TNF、MDA、NO显著增高（P＜0．05），SOD活性则显著降低（P＜0．01）；（3）患者血清TNF、MDA、NO与PASI间至正相关（P＜0．05～0．01），与PASI间呈负相关（P＜0．05），而四项指标的水平变化与病程长短无关。提示：血清TNF、MDA、SOD及NO的水平检测，可反映银屑病的病情况重程度，即内皮细胞的损伤程度。     

NF-κB"decoy"寡核苷酸对LPS诱导巨噬细胞TNF-α和IL-6表达的影响

目的 :研究NF -κB“decoy”寡核苷酸 (ODNs)对LPS诱导小鼠巨噬细胞株J774 1细胞的TNF -α和IL - 6表达的影响 ,探讨F -κB“decoy”寡核苷酸防治LPS诱导急性炎性损伤的可行性。方法 :巨噬细胞株J774 1细胞接种于 6孔板中 ,4× 10 5个细胞/孔 ,37℃、5 %CO2 培养过夜 ,待细胞汇合至 80 % ,用无血清、无抗生素 16 4 0培养液洗涤细胞两次后随机分为 4组。内毒素刺激组 :用含 1mg/LLPS的培养液刺激 ,不加治疗 ;NODN治疗组 :用含 1mg/LLPS的培养液刺激 3h ,然后用脂质体介导 1μmol/L(终浓度 )NF -κB“decoy”ODNs治疗 ;SO…     

运用蛋白质组学技术研究晕船适应大鼠脑干蛋白的表达变化

目的应用蛋白质组学技术,建立晕船适应及不适应大鼠脑干蛋白质双向电泳图谱,鉴定差异表达蛋白。方法应用双向电泳技术,对2组40只大鼠脑干蛋白进行分离,肽指纹图谱鉴定差异蛋白质,并观察谷氨酰胺合成酶活力变化。结果获得8个晕船适应相关蛋白质,其中硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅱ、低相对分子质量神经丝蛋白、泛素羧基末端水解酶PGP9.5和谷氨酰胺合成酶上调;碳酸酐酶Ⅱ、磷酸丙糖异构酶Ⅰ、磷酸甘油酸变位酶B和线粒体电压依赖型阴离子通道下调。谷氨酰胺合成酶在晕船适应组大鼠活力增强。结论大鼠对晕船适应后可诱导与能量代谢、神经递质和氧化应激相关的脑干蛋白质组的改变。     

原发性高血压患者氯沙坦治疗前后血浆内皮素及心房钠尿肽的变化

原发性高血压 (EH)是一种严重威胁人类健康的临床综合征 ,近年来人们逐渐认识到内皮素 (ET- 1)是促进 EH发展的重要因素 ,而心房尿钠肽 (ANP)为内源性 ET拮抗剂。本文作者探讨二者在 EH中的作用及氯沙坦对它们的影响。1　对象和方法1.1　对象　 EH组 48(男 37,女 11)例 ,年龄 5 2± 9(31～ 6 8)岁。均符合 1999年 WHO/ISH对 EH的诊断标准 [1 ] , 级 16例 , 级 18例 , 级 13例。对照组健康体检者 30 (男 18,女12 )例 ,年龄 6 0± 8(2 8～ 74)岁。1.2　方法　 EH患者用氯沙坦 5 0 mg/d,连服 2周。服药前 1d及服药 2周后的清晨 ,与对…