组织工程新材料蜘蛛拖丝蛋白的重组培养

目的 通过对重组蜘蛛拖丝蛋白基因工程菌pNS2生长的培养基进行优化，为获取大量蜘蛛拖丝蛋白提供条件。方法 采用单因子试验和正交试验对培养基进行优化。结果 获得优化的培养基组成：葡萄糖5．0g／L、蛋白胨5．0g／L、磷酸二氢钾(KH2PO4)15．0g／L、微量元素母液15．0g／L、硫酸镁(MgSO4)0．8g／L、柠檬酸1．7g／L。培养基优化后，工程菌的生长量提高了60．6％。结论 优化的培养基为基因工程菌pNS2大规模生产蜘蛛拖丝蛋白奠定了基础。     

组织工程新材料蜘蛛拖丝蛋白的重组培养

目的通过对重组蜘蛛拖丝蛋白基因工程菌pNS2生长的培养基进行优化,为获取大量蜘蛛拖丝蛋白提供条件。方法采用单因子试验和正交试验对培养基进行优化。结果获得优化的培养基组成:葡萄糖5.0g/L、蛋白胨5.0g/L、磷酸二氢钾(KH2PO4)15.0g/L、微量元素母液15.0g/L、硫酸镁(MgSO4)0.8g/L、柠檬酸1.7g/L。培养基优化后,工程菌的生长量提高了60.6%。结论优化的培养基为基因工程菌pNS2大规模生产蜘蛛拖丝蛋白奠定了基础。     

RGD-蜘蛛拖丝蛋白聚合物的生物合成与纯化

蜘蛛拖丝是自然界性能最好的蛋白质纤维之一 ,其独特的机械性能 ,良好的生物相容性和缓慢的可降解性 ,作为生物材料在组织工程领域有着潜在的应用前景。本文根据蜘蛛拖丝蛋白序列高度重复的特点 ,引入与细胞黏附有关的精氨酸 甘氨酸 天冬氨酸 (RGD)三肽 ,化学合成RGD 蜘蛛拖丝蛋白基因单体 ,通过头尾相连倍加构建策略 ,首次得到RGD 蜘蛛拖丝蛋白基因 8聚体和 16聚体。分别将这两种多聚体与原核高效表达载体 pET 30a( )连接 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) pLysS ,用IPTG诱导表达。SDS PAGE图谱显示表达产物分子量分别为 35KD和 6 0KD ,与理论值基本相吻合 ;蛋白质印迹分析这两种表达产物均显示特异性。文中对表达产物的纯化方法进行了初步的摸索。     

RGD蛛丝蛋白基因工程菌高密度发酵条件的研究

蜘蛛丝因其独特的机械特性,成为自然界性能优良的天然蛋白质纤维。基因工程技术是获取蛛丝蛋白的有效途径。为规模化制备重组RGD-蛛丝蛋白基因工程菌pN SR-16表达产物,通过摇瓶培养确定pN SR-16生长和表达的最优化条件,并在此基础上进行分批补料高密度培养。控制碳源、氮源的流加,发酵液溶解氧浓度和菌体比生长速率,使pN SR-16最终发酵菌体OD600达到57.15,重组丝蛋白表达产物占总蛋白量的20.8%。     

基因重组蛛丝蛋白-聚乙烯醇复合支架材料的制备

目的探讨致孔剂NaCl粒径和比例、变性剂和聚乙烯醇(PVA)等因素对基因重组蛛丝蛋白-PVA复合支架材料形态及性能的影响.方法基因重组蛛丝蛋白溶解于98%甲酸,采用冷冻干燥粒子滤沥法制备重组蛛丝蛋白-PVA复合多孔支架;采用扫描电子显微镜观察支架的形态;采用单纤维强力试验机测试支架机械性能.结果乙醇作变性剂制得的多孔支架力学性能较好,支架的断裂应力、断裂比强度均提高5倍以上,断裂伸长率可达12.21%.以粒径<500μm的NaCl为致孔剂制得的多孔支架力学性能较好.高分子材料PVA能明显改善重组蛛丝蛋白多孔支架的件能.结论重组蛛丝蛋白-PVA复合支架材料有望在组织工程领域得以应用.