人羊膜间充质干细胞分离培养:胰蛋白酶及胶原酶消化时间及浓度的选择简

背景：文献报道人羊膜间充质干细胞提取方法各不一致,得到的细胞数量各不相同。目的：探索人羊膜间充质干细胞在体外分离培养的最适方法。方法：无菌条件下取正常足月剖腹产胎儿的羊膜剪成碎片,分别通过4个实验7种方法体外培养人羊膜间充质干细胞。①实验一：分别采用3种方法：0.05 g/L胰蛋白酶消化10 min后,再加0.75 g/L胶原酶Ⅰ消化60 min;0.75 g/L胶原酶Ⅰ直接消化120 min;0.05 g/L胰蛋白酶与0.75 g/L胶原酶Ⅰ同时消化60 min。②实验二：采用0.05 g/L的胰蛋白酶消化30 min后,再加0.75 g/L胶原酶Ⅰ消化30 min。③实验三：分别采用2种方法：0.05 g/L的胰蛋白酶连续2次消化30 min后,再加入0.75 g/L的Ⅰ型胶原酶消化60 min;0.05 g/L的胰蛋白酶连续2次消化40 min后,再加0.75 g/L胶原酶Ⅰ消化60 min。④实验四：采用0.05 g/L的胰蛋白酶连续2次消化30 min后,再加1 g/L的Ⅰ型胶原酶消化60 min。显微镜下观察其形态,研究人羊膜间充质干细胞在体外分离培养的最适方法。结果与结论：用0.05 g/L的胰蛋白酶连续消化2次每次消化30 min,然后用1 g/L的胶原酶消化60 min是最合适的体外分离培养条件。细胞成细长梭形或星形,胞质丰富,细胞核呈圆形,1-3个核仁。说明实验四采用的胰酶和胶原酶消化的时间合适,而且胶原酶的浓度合适,得到的细胞数量最多。     

白塞病误诊为支气管扩张症一例

患者，女，44岁，已婚，农民。以“咯血反复发作16年。复发加重15d”为主诉，于1999年5月12日由某医院转入我院。患者自诉28岁时无明显诱因突然出现咯血，后咯血时有发作。此次于半月前购物时突发胸闷，进而出现咯血，量约600～800ml，家属急将其送至威海市某医院就诊，CT检查提示左下肺卷发样阴影，考虑为支气管扩张症，给予垂体后叶素10U入液静滴，1次／d，立止血1kU肌注，2次／d，安络血10mg肌注，2次／d及头孢哌酮钠等抗感染治疗，治疗半月，疗效欠佳，每1～2d即咯血1次，量10～30ml不等。为了尽快控制症状，患者入我院寻求中西医结合治疗。     

右美托咪啶在帝视内镜引导清醒气管插管中的效果

目的 评价右美托咪啶用于困难气道患者经帝视内镜引导清醒气管插管术的效果.方法 选取已预料的困难气道患者60例,采用随机数字表法将其分为表面麻醉+右美托咪啶组+瑞芬太尼组(D组,n=30)、表面麻醉+咪达唑伦组+瑞芬太尼组(M组,n=30).咽喉壁及声门表面麻醉后,D组静脉泵注右美托咪啶1μg/kg,泵注10 min;M...     

苓桂术甘汤治疗腰背部发热两例分析

病例介绍 [案一]患者,女,39岁.以腰背部发热2年余为主诉,于2003年12月20日就诊.2年前不明原因发病,自觉腰背部（两肾之间）发热,约手掌大小,症状时轻时重,较重时,即使身处严冬亦袒胸露背,欲卧石板之上. 自诉曾多方求医,诸医均考虑为阴虚火旺而以滋阴降火为法组方,治疗罔效.观其舌脉,舌质淡,苔白腻,关脉左弦右弱,尺脉沉紧.问其饮食,食欲欠佳,进食后有轻微腹胀,且自觉小腹坚满,时有气从小腹上冲至胸咽,发无定时,发时呃声频频,声音高亢,持续时间10分钟至1小时不等,双下肢轻微浮肿.综观舌、脉、症,考虑为阳虚饮停之奔豚气.遂给予苓桂术甘汤：茯苓15g,桂枝12g, 白术15g,炙甘草6g.1剂,嘱用药后复诊.12月22日复诊：诉汤药入口即感背部热邪逐渐下移,尿量有所增加,小便时有灼热感.1剂服完,背部发热症状消失,小腹坚满缓解,呃逆未发.随访近1年,症状未见反复.     

人羊膜间充质干细胞抑制异体淋巴细胞增殖并减少γ干扰素的分泌

目的观察人羊膜间充质干细胞(hAMSC)对体外培养的淋巴细胞功能的影响。方法通过酶消化法分离培养hAMSC,采用荧光团标记的小鼠抗人单克隆抗体结合流式细胞术鉴定细胞表面抗原;免疫荧光染色检测培养细胞波形蛋白(vimentin)和阶段特异表达抗原4(SSEA-4)的表达;分离培养hAMSC和外周血单个核细胞(PBMC),将刀豆蛋白(ConA)刺激的淋巴细胞与1×104、5×104、1×105个hAMSC进行共培养。CCK-8法测定淋巴细胞增殖,ELISA测定细胞上清液中IFN-γ的水平。结果5μg/mLConA能够引起淋巴细胞增殖;共培养条件下,hAMSC能够抑制ConA引起的淋巴细胞增殖,且随着hAMSC的数量增加,抑制效果更明显。培养72h后,CCK-8法结果表明,单纯ConA刺激后淋巴细胞数显著高于共培养细胞。选择抑制效果最佳的组别1×106个淋巴细胞与1×105个hAMSC共培养,ELISA测定1×105个hAMSC对淋巴细胞抑制72h后,上清液中IFN-γ分泌,共培养细胞上清液中IFN-γ水平显著低于单纯ConA刺激细胞。结论hAMSC能在体外抑制ConA引起的淋巴细胞增殖并减少IFN-γ分泌。     

田玉美运用养胃理气汤治疗慢性萎缩性胃炎经验

湖北中医学院田玉美教授从医60余载,执教《金匮要略》,临证治疗内、妇、儿、皮肤科疾患往往应手取效。笔者曾有幸随田老学习三年,受益匪浅。现将田老运用养胃理气汤治疗慢性萎缩胃炎的经验略加整理,以飧后学。