牙周牙髓联合病变患牙显微根尖手术一例

牙周牙髓联合病变（endodontic-periodontal lesions）是指同一个牙并存着牙周和牙髓病变,且互相融合连通。显微根尖手术是实现疑难牙髓根尖周病患牙保存的重要手段。牙周牙髓联合病变患牙根尖手术远期预后较牙周健康患牙差,牙周炎症控制与组织再生是影响其远期成功率的关键因素。对于牙周牙髓联合病变患牙,临床医生需要根据病因和骨缺损类型,选择正确的手术时机与方式,尽可能提高患牙手术成功率。     

甲胎蛋白激活PI3K/AKT信号促使肝癌Bel 7402细胞抗全反式维甲酸诱导凋亡

目的 研究甲胎蛋白(AFP)对肝癌细胞内PI3K/AKT信号传递的影响,以及其在癌细胞耐受全反式维甲酸(ATRA)中的作用. 方法 四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测ATRA对人肝癌Bel 7402细胞增殖的影响;显微照相观察细胞形态学的改变;流式细胞分析细胞凋亡;激光共聚焦显微镜观察AFP与PTEN的共定位;免疫共沉淀(Co-IP)技术研究AFP与PTEN相互作用;Westemblot法分析磷酸化的蛋白激酶B(pAKT)和Src表达,构建干扰AFP表达的载体(AFP-siRNA)并转染Bel 7402细胞;用PI3K特异性阻断剂Ly294002处理细胞,分析Ly294002的作用效果.通过t检验分析组间的统计学差异. 结果 MTT分析显示,人肝癌Bel 7402耐受ATRA的细胞毒性;共聚焦显微镜观察显示AFP与PTEN共定位于细胞质;Co-IP技术研究发现AFP能与PTEN结合;MTT分析发现,Bel 7402细胞转染AFP-siRNA载体后24 h后,细胞生长显著受抑制,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),而且AFP-siRNA载体和ATRA共同处理组,细胞生长受到抑制更为显著,与对照组、单独处理组比较,差异均有统计学意义(P＜ 0.01);干扰AFP表达能显著增加Bel 7402细胞对ATRA敏感性,并能抑制pAKT和Src的表达;Ly294002能抑制AFP促进Bel 7402细胞表达pAKT和Src的作用.结论 肝癌细胞内表达的AFP能与PTEN结合并抑制PTEN对AKT的去磷酸化作用,肝癌细胞内高表达的AFP能激活PI3K/AKT信息通路对抗ATRA诱导的凋亡.     

二次分层离心纯化成年大鼠背根节神经元的方法

目的:建立一种长时程的有效获得高度纯化成年大鼠背根节(dorsal root ganglions,DRG)神经元的方法。方法:将SD大鼠的DRG剥膜、消化制成单细胞悬液,牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)分层离心去除大部分非神经元细胞后接种于多聚赖氨酸处理的盖玻片上;培养1 d后,胰酶消化再次制成细胞悬液,BSA二次分层离心,再次接种于多聚赖氨酸处理的盖玻片上。BSA二次分层离心后的神经元为实验一(T1组)、单次离心的神经元为实验组二(T2组)、未经离心处理的神经元为对照组(C组)。各组除离心次数外,其余各方法相同。相差显微镜下观察上述各组培养神经元,结合βtubulinⅢ免疫荧光组化染色及MTT分析检测神经元纯化效果及细胞活力。结果:培养3 d后,T1组神经元比例达88.43±6.13%,较T2组、C组显著增高,差别具有统计学意义(P0.05);MTT的结果显示与T2组、C组比较,T1组神经元的相对活力略微下降,但无统计学差异(P0.05)。结论:二次纯化法是一种简单有效的成年大鼠DRG神经元纯化方法。     

滇重楼鲨烯环氧酶基因的克隆及原核表达研究

目的克隆滇重楼Paris polyphylla var.yunnanensis三萜皂苷生物合成途径中的关键酶鲨烯环氧酶(squalene epoxidase,SE)基因,并进行原核表达。并用Real-time PCR法检测cDNA样本中SE1基因和SE2基因的相对量。方法以滇重楼根为材料提取总RNA并反转录为cDNA。以cDNA为模板,根据转录组数据中的2组SE基因全长序列设计特异性引物,对SE基因进行克隆后转入到pEASY-T1 Simple Cloning Vector中,经测序鉴定正确后,构建pEASY-E1-SE表达载体,利用Art Media protein Expression/Amp+培养基自动诱导表达。Real-time PCR法检测cDNA样本中SE1和SE2基因的相对量。结果获得了2条滇重楼SE基因,命名为ppSE1和ppSE2。ppSE1的全长为1 932 bp,开放阅读框(ORF)为1 578 bp,编码525个AA;ppSE2的全长为1 828 bp,ORF长为1 548 bp,编码515个氨基酸。荧光定量PCR结果显示ppSE1基因和ppSE2基因在茎和叶中的表达具有显著差异,ppSE1的表达在叶中最为显著。酶切和测序结果表明,原核表达载体pEASY-E1-SE构建成功;SDS-PAGE分析显示,在BL21(DE3)表达感受态细胞中成功诱导表达了SE基因的2种融合蛋白。结论克隆了滇重楼的SE基因,获得了在体外具有生物学活性的SE蛋白。ppSE1基因和ppSE2基因在滇重楼中具有不同的表达模式,在滇重楼次生代谢产物的合成中起着不同的作用。     

曲古抑菌素A增加人肝癌Bel7402细胞对TRAIL敏感度的实验

目的 探讨曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)联合肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)相关凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand,TRAIL)对肝癌细胞Bel7402增殖凋亡的影响及其机制.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)染色法分别检测TSA、TRAIL及低浓度TSA联合TRAIL处理Bel7402细胞的生长抑制率;4,6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐(DAPI)染色法对药物联合处理后的细胞进行凋亡形态学观察;免疫细胞化学和Western blot技术观察药物联合作用后p65蛋白在细胞中表达和定位的变化.结果 不同浓度TSA作用6、12和24 h对人肝癌Bel7402细胞的增殖没有明显抑制作用,而作用48 h后的细胞增殖抑制率明显升高,和对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);不同浓度TRAIL处理Bel7402细胞存活率没有明显改变;低浓度TSA(20 ng/ml)预处理能够增加Bel7402细胞对TRAIL治疗的敏感度,TSA预处理联合TRAIL(100ng/ml)作用细胞24 h后,细胞生存率为(57.1±5.4)％,和单独药物处理组及对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);DAPI染色显示TSA和TRAIL联合作用后Bel7402细胞有核凋亡出现.荧光显微镜观察证明单独应用TSA(200 ng/ml)或TRAIL(100 ng/ml)处理的细胞p65蛋白有部分核内移位,而两种药物联合应用导致p65蛋白表达量降低,并且发生明显的核内转移和集聚.结论 低浓度TSA能够增加肝癌Bel7402细胞对TRAIL的敏感度;其机制可能是两种药物联合应用降低p65的表达和活性,从而诱导Bel7402细胞凋亡.