DNA酶Ⅰ抑制细胞聚集降低骨髓间充质干细胞静脉注射发生急性肺栓塞的风险

目的:探索DNA酶Ⅰ处理后骨髓间充质干细胞降低急性肺栓塞的发生。方法:体外培养小鼠骨髓间充质干细胞。C57小鼠分PBS注射组、10U/mL DNaseⅠ-PBS注射组、正常BMSCs注射组、DNaseⅠ处理后BMSCs注射组。PBS注射组与正常BMSCs注射组尾静脉注射PBS或临界致死剂量的BMSCs,脏器组织学检测,PBS注射组对照,观察急性死亡率;比较正常BMSCs与DNaseⅠ处理后BMSCs体外增殖、分化能力和悬液中细胞聚集状态;DNaseⅠ处理后BMSCs注射组注射DNaseⅠ处理后3×106个BMSCs 5ml/kg观察急性死亡率。结果:PBS注射组相比正常BMSCs注射组急性死亡率为60%、心肺异常、肺血管内异染物质,急性肺栓塞;DNaseⅠ预处理不影响BMSCs体外增殖分化能力;DNaseⅠ处理BMSCs较正常BMSCs聚集成团细胞比例显著下降。DNaseⅠ处理后BMSCs注射组的急性死亡率为23.3%,与正常BMSCs注射组比较差异显著。结论:DNaseⅠ预处理不影响BM-SCs的生物学特性并能抑制单细胞聚集降低静脉注射BMSCs所导致的急性肺栓塞。     

微小RNA调控骨髓干细胞、成骨破骨细胞在骨代谢中的影响★

背景:最近研究发现微小RNA在间充质干细胞分化过程中发挥着重要的调控作用。目的:总结探讨微小RNA在间充质干细胞中的作用,全面了解间充质干细胞分化的机制,对骨质疏松症的预防和治疗有重要意义。方法:由第一作者检索1990/2008 PubMed数据及万方数据库有关微小RNA调控骨髓间充质干细胞从而影响骨代谢等方面的文献,英文检索词为"microRNA,mesenchymal stem cells,bone metabolism",中文检索词为"微小RNA,骨髓间充质干细胞,骨代谢"。根据纳入标准保留30篇进一步归纳总结。结果与结论:微小RNA通过对多种转录因子、生长因子和信号通路的调节作用,影响着间充质干细胞的自我更新和分化过程。运用高通量技术筛选出与骨髓间充质干细胞分化相关的特异性微小RNA,研究其作用的分子机制,对于骨髓间充质干细胞分化异常所致的骨代谢疾病,如骨质疏松症等发病机制的阐明具有重要作用。微小RNA在骨髓间充质干细胞的分化中作用机制的研究将为骨代谢疾病的预防和治疗提供一个新的方向。     

骨髓间充质干细胞来源外泌体通过TGF-β1/smad2/3信号通路抑制增生性瘢痕的机制研究

目的 探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)来源外泌体对增生性瘢痕成纤维细胞(hypertrophic scar-derived fibroblasts, HSFs)增殖和迁移能力的影响，并验证BMSCs来源外泌体抑制HSFs合成胶原的信号通路。方法 分离并培养SD大鼠BMSCs、BMSC来源外泌体及SD大鼠HSFs,设置空白对照组(PBS组),实验组(BMSCs来源外泌体组),阴性对照组(去外泌体间充质干细胞浓缩上清液组)。流式细胞周期实验及细胞划痕实验检测外泌体对HSFs增殖及迁移的影响。荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)检测3组细胞中TIMP-1、基质金属蛋白酶1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的mRNA表达。Western blot检测3组细胞中转化生长因子β1、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原的蛋白水平及smad2/3的磷酸化水平。结果 BMSCs来源外泌体抑制了HSFs的增殖和迁移能力。与PBS组比较，BMSCs来源外泌体组TIMP-1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达显著降...     

miR-26a对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化能力的调控作用

 目的 利用小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）的成骨分化模型, 探讨 miR-26a 在成骨分化中的表达趋势及调控作用。方法 提取雌性C57/BL6J小鼠双侧下肢股骨骨髓分离培养BMSCs,诱导分化为成骨细胞,通过实时定量PCR检测miR-26a在BMSCs及其诱导分化细胞中的表达。使用miR-26a的促进物miR-RiboTM microRNA-26a mimics通过siPORTTMNeoFXTMagent转染试剂瞬时转染BMSCs并加入成骨诱导剂培养,并同时设立转染microRNA-26a mimics NC的对照组。培养7 d、14 d后,进行细胞形态、碱性磷酸酶（ALP）染色、钙盐结节（茜素红染色）等项目的检测。另外制造绝经后骨质疏松小鼠模型（OVX组）与假手术动物模型（sham组）,RT-PCR检测OVX组中miR-26a的表达。结果 miR-26a的表达在BMSCs向成骨分化过程中上升约25倍,成骨基因表达也随着诱导时间的增加逐渐升高。转染miR-26a mimics后的BMSCs在培养7d后逐渐由梭形变为多角形,与阴性对照组类似;ALP染色显示阴性对照组培养7 d后为阳性,而实验组在培养7 d时呈强阳性;茜素红染色显示实验组培养14 d后出现数量较多的钙盐沉积结节,而阴性对照组则较少。miR-26a mimics组成骨基因的表达均高于对照组。RT-PCR检测结果显示OVX组中miR-26a的表达低于sham组4倍。结论 miR-26a mimics的转染可以促进BMSCs的成骨分化潜能,在骨质疏松的环境中miR-26a表达下降,间接证实了miR-26a对小鼠BMSCs成骨潜能的促进作用。     

去势大鼠骨量丢失过程中骨髓间充质干细胞的增殖分化功能

目的: 研究骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖分化功能在去势大鼠骨质疏松发病过程中对骨量丢失的作用。方法: 选用10周龄健康雌性SD大鼠行双侧卵巢切除术(OVX),建立骨质疏松症(OP)的动物模型;选用同一批次、周龄相同、体重相近的健康雌性SD大鼠行双侧卵巢附近脂肪组织部分切除术,建立假手术(sham)组,假手术大鼠组(sham group)。采用离心法、贴壁法和有限稀释法分离、培养、纯化大鼠BMSCs,体外培养传至3~4代后用于实验:流式细胞术进行BMSCs表型鉴定;克隆形成实验检测BMSCs增殖状况;MTT法测定BMSCs生长曲线;成脂诱导后脂滴油红O染色法检测比较2组大鼠BMSCs成脂能力;成骨诱导后钙化结节茜素红染色法检测比较2组大鼠BMSCs成骨能力;RT-PCR法检测大鼠BMSCs成骨相关蛋白Runx2、骨钙素(OCN)和骨桥蛋白(OPN)mRNA的表达。结果: 与sham组大鼠BMSCs相比,OVX组大鼠BMSCs克隆形成能力减弱,增殖能力降低,成脂向分化增强,成骨向分化减弱(P<0.05)。结论: 去卵巢骨质疏松大鼠BMSCs增殖及成骨分化减弱,成脂分化增强;这导致去势大鼠快速的骨量丢失,在去势大鼠OP发病过程中发挥着重要作用。     

头颈部常见淋巴结疾病的鉴别诊断及研究现状

临床上淋巴系统的疾病很多,头颈部早期多表现为淋巴结肿大。大体可分为良性肿大和恶性肿大。前者可分为淋巴结反应性增生、淋巴结核、Kikuchi淋巴结炎、猫抓病等。后者多见为头颈部转移瘤和恶性淋巴瘤。在我们的临床工作中会经常遇到头颈部淋巴结肿大的相关疾病,本文将头颈部常见的表现为淋巴结肿大疾病国内外的研究现状及相关鉴别诊断分析做一综述。     

微小RNA调控骨髓干细胞、成骨破骨细胞在骨代谢中的影响

背景：最近研究发现微小RNA在间充质干细胞分化过程中发挥着重要的调控作用。 目的：总结探讨微小RNA在间充质干细胞中的作用,全面了解间充质干细胞分化的机制,对骨质疏松症的预防和治疗有重要意义。 方法：由第一作者检索1990/2008 PubMed数据及万方数据库有关微小RNA调控骨髓间充质干细胞从而影响骨代谢等方面的文献,英文检索词为“microRNA,mesenchymal stem cells,bone metabolism”,中文检索词为“微小RNA,骨髓间充质干细胞,骨代谢”。根据纳入标准保留30篇进一步归纳总结。 结果与结论：微小RNA通过对多种转录因子、生长因子和信号通路的调节作用,影响着间充质干细胞的自我更新和分化过程。运用高通量技术筛选出与骨髓间充质干细胞分化相关的特异性微小RNA,研究其作用的分子机制,对于骨髓间充质干细胞分化异常所致的骨代谢疾病,如骨质疏松症等发病机制的阐明具有重要作用。微小RNA在骨髓间充质干细胞的分化中作用机制的研究将为骨代谢疾病的预防和治疗提供一个新的方向。     

miR-126调节骨髓间充质干细胞对游离皮瓣组织学活性的作用

BACKGROUND:MicroRNA has tissue and cell specificity, and high expression of endothelial cell-specific microRNA-126 (miR-126) plays an important role in angiogenesis. OBJECTIVE:To explore the effect of miR-126 on transplanted free flap survival and histological activity as well as its mechanism in angiogenesis. METHODS:Transient transfection technology was used to enhance the expression of miR-126 in bone marrow mesenchymal stem cells. Expression levels of macrophage inflammatory protein-1α, tumor necrosis factor-α and vascular cell adhesion molecule-1 mRNA were detected by real-time PCR, and expression levels of ERK1/2, AKT, pERK1/2, pAKT protein were measured by western blot assay. Forty-eight Sprague-Dawley rats were randomly divided into three groups (n=16 per group), followed by preparation of abdominal free flap models. Rats in the three groups were given injection of miR-126 mimics-transfected cells, miR-126 mimics control-transfected cells and PBS 1 cm and 3 cm distal to the free flap, respectively. RESULTS AND CONCLUSION: Expression levels of macrophage inflammatory protein-1α, tumor necrosis factor-α and vascular cell adhesion molecule-1 mRNA in the cells transfected with miR-126 mimics were decreased by 36, 3.5 and 14 times compared with those in the PBS group, respectively. Expressions levels of ERK1/2, AKT, pERK1/2, pAKT protein in the distal free flap increased significantly in the miR-126 mimics group than the other two groups, as did the ratios of pAKT/AKT and pERK1/2/ERK1/2. In addition, the expression levels of macrophage inflammatory protein-1α, tumor necrosis factor-α and vascular cell adhesion molecule-1 protein in the flap tissue fluid were significantly lower in the miR-126 mimics transfection group than the other two group. All these findings suggest that miR-126 can promote free flap survival by creating favorable conditions for angiogenesis in the free flap tissue.     

RNA结合蛋白QKI-5表达对人头颈鳞癌细胞株的影响

目的研究QKI-5对人头颈鳞癌细胞株的生长抑制作用。 方法采用Western blot和免疫组化方法检测人头颈鳞癌临床组织样本中的QKI-5的蛋白表达情况。常规培养舌鳞癌SCC15细胞、舌鳞癌SCC25细胞和头颈鳞癌PCI13细胞,以5 × 10⁴/ml的密度种植细胞。采用Western blot和反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测三种头颈鳞癌细胞株中的QKI-5的蛋白和mRNA表达情况。采用病毒介导QKI-5在SCC25细胞中过表达和在PCI13细胞中沉默QKI-5。采用MTT法和流式细胞法检测SCC25细胞中过表达QKI-5和在PCI13细胞中沉默QKI-5的细胞增殖和凋亡情况。采用Western blot方法检测SCC25细胞中过表达QKI-5和PCI13细胞中沉默QKI-5中细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、CDK4、P27、PARP-cleaved蛋白的表达情况。 结果SCC15和SCC25细胞中QKI-5的蛋白和mRNA表达水平较低,而PCI13细胞中的QKI-5蛋白和mRNA表达水平较高。采用病毒介导的QKI-5过表达后,SCC25细胞中QKI-5的蛋白和mRNA水平显著增加。采用病毒介导的QKI-5沉默后,PCI13细胞中QKI-5的蛋白和mRNA水平显著减少。SCC25细胞中过表达QKI-5后,细胞增殖减少（P < 0.05）,细胞多停留在G₀/G₁期,而凋亡增加,同时Cyclin D1和CDK4表达水平下调（P < 0.05）,P27和PAPR-clevead蛋白表达水平上调（P < 0.05）。PCI13细胞中的QKI-5被沉默后,细胞增殖增加（P < 0.05）,细胞多进入S期,而凋亡减少,同时Cyclin D1和CDK4表达水平上调（P < 0.05）,P27和PARP-cleaved表达水平下调（P < 0.05）。 结论QKI-5的表达可对人头颈鳞癌细胞增殖产生抑制作用。