人牙齿发育中OSX的表达

目的:通过免疫组织化学方法观察人牙齿发育中OSX的表达规律,探索其功能及意义。方法:取自然流产的人胚胎上下颌骨,分别进行HE染色和免疫组织化学染色,用图像分析仪分析。结果:免疫组化显示,OSX分布于细胞浆中。蕾状期,OSX分布于牙蕾上皮细胞;帽状期,成釉器所有细胞均表达OSX,但在内釉上皮的釉结处表达明显集中;钟状期,成釉细胞、成牙本质细胞及邻近的牙乳头细胞高表达OSX,釉牙本质界、牙本质小管及新形成的釉质有表达。结论:OSX参与成釉细胞、成牙本质细胞的分化、成熟及细胞间信号传导,可能参与调节釉质和牙本质基质的分泌及其生物矿化过程。     

电纺聚己内酯/Ⅰ型胶原蛋白/纳米锆酸钙复合支架的制备及其生物相容性的研究

目的:制备聚己内酯(PCL)/Ⅰ型胶原(COLI)/纳米锆酸钙(n CZ)复合支架用于骨组织再生,评价其性能及对人牙周膜细胞(PDLCs)生物相容性及成骨分化的影响。方法:用静电纺丝法制备PCL/COLI、PCL/COLI/纳米羟基磷灰石(n HA)和PCL/COLI/n CZ复合支架,通过扫描电子显微镜表征支架形貌,能量色散X射线光谱分析仪分析支架元素组成,万能拉伸机检测支架机械性能。将复合支架与PDLCs共培养,使用CCK-8法检测细胞增殖情况,扫描电镜观察细胞形貌,通过碱性磷酸酶(ALP)、茜素红(ARS)染色观察各组复合支架对PDLCs的矿化能力的影响。结果:PCL/COLI/n CZ复合支架呈多孔网状结构,添加了纳米材料的复合支架表面见粗糙外观。PCL/COLI/n CZ在3种复合支架中机械强度最佳(P<0.05)。CCK-8和扫描电镜显示,PDLCs在3种复合支架上均能稳定增殖(P>0.05)。与PDLCs共培养,PCL/COLI/n CZ组的ALP和ARS染色面积较PCL/COLI组多(P<0.05),与PCL/COLI/n HA组无明显差异(P>0.05)。结论:PCL/COLI/n CZ复合支架有优良的机械性能和生物相容性,且具有成骨诱导的潜能,可用于骨组织工程。     

IPTG浓度对大肠杆菌中重组GroEL表达的影响

目的:探究诱导重组GroEL(牙周炎相关动脉粥样硬化疫苗)的最佳IPTG浓度,并分析IPTG浓度影响重组GroEL表达量的原因。方法:构建GroEL的大肠杆菌( Escherichia Coli, E.coli)表达体系,使用不同浓度IPTG(0,10,20,30,50,100 μmol/L)诱导构建的E.coli (GroEL-E.coli),运用SDS-PAGE及相关软件定量分析GroEL表达量;透射电子显微镜及A值测定法分别检测IPTG浓度对GroEL-E.coli内部包涵体(IB)形成及GroEL-E.coli生长的影响。结果:重组GroEL主要以可溶性蛋白的形式存在。IPTG的加入可增加GroEL表达量,当IPTG浓度为30 μmol/L时GroEL表达量最多。IPTG可促进IB形成并抑制GroEL-E.coli生长,且影响效果随IPTG浓度增加而增强。结论:IPTG浓度影响GroEL-E.coli中重组GroEL的表达,最佳IPTG浓度为30 μmol/L;IPTG可通过诱导IB形成及抑制细菌增殖影响GroEL表达量。     

无定形磷酸钙对渗透树脂颜色稳定性及渗透性影响研究

目的    探讨渗透树脂中加入无定形磷酸钙后对其颜色稳定性及渗透性的影响。方法    收集2014年7—8月在南京大学医学院附属口腔医院口腔外科门诊因正畸治疗需要而减数拔除的离体前磨牙60颗,所有牙齿要求釉质表面光滑,颜色正常,无龋坏、隐裂、釉质发育不全及釉质脱矿。通过脱矿液建立人工龋模型,筛选出脱矿数值范围为 （35 ± 5）的40颗牙齿纳入研究。将40颗牙齿随机分为A、B两组,每组20颗。A组龋损部位用渗透树脂处理,B组龋损部位用加入纳米无定形磷酸钙的渗透树脂处理。然后,将A、B 两组再分别分为2个小组,即紫外老化组（A1组、B1组）和扫描电镜组（A2组、B2组）,每小组10颗牙齿。紫外老化组使用紫外光照射对标本进行老化,通过计算老化前后的色差值（ΔE）探究纳米无定形磷酸钙加入渗透树脂后对其颜色稳定性的影响;扫描电镜组使用扫描电镜观察标本的釉质纵剖面,探究无定形磷酸钙加入渗透树脂后对其渗透性的影响。结果    经紫外光照射后,紫外老化组的2个小组标本ΔE均随着照射时间的延长而增大;经过24 h照射后,颜色趋于稳定;照射时间相同时,2个小组标本的ΔE差异均无统计学意义（P＞0.05）。扫描电镜观察显示,A2组标本,渗透树脂可进入釉质脱矿后产生的间隙内,形成较多树脂突;B2组标本,纳米无定形磷酸钙渗透树脂虽能封闭釉质表面,但无法进入间隙或只存在少量树脂突。结论    紫外光照射可以引起树脂颜色的变化,加入纳米无定形磷酸钙不会影响渗透树脂颜色的稳定性,但会降低树脂的渗透性。     

不同强度静磁场促进成骨细胞增殖和分化的研究

目的:研究不同强度磁场对成骨细胞增殖与分化的影响,为寻求合适的静磁场作用强度提供实验基础。方法:体外培养Wistar大鼠颅骨成骨细胞,分别置于0Gs,300Gs、1400Gs、2000Gs不同磁场强度的静磁场中作用。在1、3、5、7 d用CCK-8法检测成骨细胞的增殖情况,流式细胞仪测定不同磁场强度下48h时细胞所处的周期,q-PCR检测磁场作用下7 d成骨细胞内成骨因子OPN,Runx2表达情况。结果:结果显示各组均出现不同程度的促增殖作用,尤以300Gs组作用7 d时显著。300Gs磁场作用组S期和G2/M期细胞百分比显著增加,推测一定磁场强度可促使静止态的G0/G1期细胞活跃向S 期转变,细胞增殖加速。在300Gs磁场作用7 d后,成骨因子OPN,Runx2表达都显著增高。结论:实验采用的300Gs强度磁场可有效促进成骨细胞的增殖与分化。     

移植异体血管内皮祖细胞向大鼠损伤皮肤的趋化

背景：目前关于移植异体内皮祖细胞参与机体缺血组织血管改建的研究正成为热点。 目的：观察移植的同种异体内皮祖细胞向大鼠皮肤损伤区趋化的情况。 方法：以BrdU标记体外培养的大鼠外周血内皮祖细胞,通过尾静脉回输于背部皮肤有切割伤的大鼠(实验组)体内,以正常大鼠为对照,采用免疫荧光染色观察细胞移植后1,3,7,14 d时受体大鼠皮肤损伤区BrdU阳性内皮祖细胞的数量变化情况,苏木精-伊红染色观察受体大鼠脾脏淋巴滤泡数量和体积变化情况。 结果与结论：移植的内皮祖细胞可以向大鼠皮肤损伤区趋化,3,7 d时内皮祖细胞数量最多(P < 0.05),14 d时在损伤区血管内壁中仍可见BrdU阳性细胞。实验组大鼠脾脏淋巴滤泡的数量和体积与对照组相比没有明显差异,证实移植同种异体内皮祖细胞没有引起明显的免疫排斥反应。     

腺病毒介导的TRAIL基因对舌鳞状细胞癌细胞株的影响

目的探讨以凋亡基因TRAIL为靶基因,腺病毒（ Ad）为载体,巨细胞病毒启动子（ CMV）为启动子的重组基因治疗药物AdCMV- TRAIL诱导鳞状细胞癌细胞系TCa83凋亡的作用。方法用重组绿色荧光蛋白基因（ EGFP）的腺病毒AdCMV- EGFP为对照组,转染TCa83细胞确定重组腺病毒的转染率。在细胞转染1、3、5、7 d时,应用荧光倒置显微镜观察细胞形态,应用MTT检测细胞的存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率。以AdCMV- TRAIL为实验组转染TCa83细胞,采用RT- PCR方法检测细胞TRAIL的表达。结果AdCMV- EGFP在1 000 particles/cell 时转染率为100%。细胞转染AdCMV- TRAIL和AdCMV- EGFP后,随时间延长细胞存活率逐渐下降,但AdCMV- TRAIL组较AdCMV- EGFP组下降更快（ P<0.001）。AdCMV- TRAIL和AdCMV- EGFP均能诱导TCa83细胞凋亡,而AdCMV- TRAIL组引起细胞凋亡的程度明显比AdCMV- EGFP组大（ P<0.000 1）。通过RT- PCR可检测到594 bp的TRAIL基因。结论AdCMV- TRAIL在体外能抑制TCa83细胞的活性,并能促进其凋亡。     

实验性牙移动大鼠外周血内皮祖细胞的培养

背景：观察血管内皮祖细胞在牙周血管改建中的作用规律对于研究正畸牙周改建机制具有重要意义。 目的：对牙移动大鼠外周血内皮祖细胞进行体外分离、培养及鉴定,探讨牙齿移动是否可动员骨髓内皮祖细胞进入外周血。 设计、时间及地点：细胞体外分离培养及生物学指标检测,随机对照动物实验。于2007-09/2008-04在吉林省口腔生物医学工程重点实验室完成。 材料：24只Wistar大鼠,随机分为实验组和对照组,每组12只。 方法：实验组建立大鼠牙移动模型,对照组置牵拉装置但不加力。加力第2天取两组动物外周血制作细胞涂片,检测其中CD133阳性细胞数。同时以Percoll密度梯度分离提取其外周血单个核细胞,培养至第12天,取两组细胞爬片进行相关指标检测。 主要观察指标：以免疫细胞化学染色和免疫荧光化学染色检测细胞表面标志物,荧光化学检测细胞吸收乙酰化低密度脂蛋白及荆豆凝集素1情况,MTT法检测细胞增殖情况。 结果：实验组细胞涂片中CD133阳性细胞率明显高于对照组（P < 0.05）。所培养细胞可同时吸收Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白、FITC标记的荆豆凝集素1,呈CD133、Ⅷ因子、CD34阳性。实验组细胞增殖活性高于对照组（P < 0.05）。 结论：实验初步证实了实验性牙移动可动员大鼠骨髓内皮祖细胞进入外周血。