人体真菌组与疾病

真菌组在人体微生物组中所占比例不到1%,但真菌群落在人体健康与疾病状态中扮演着关键角色。近年来随着高通量测序技术的广泛应用,人体不同部位如口腔、肺部、消化道、阴道以及皮肤真菌组的结构和组成被解析,其在人体健康和疾病中的重要地位也被挖掘。同时,人体真菌组对细菌组的组成也有影响,是维持微生物组结构和代谢功能稳定的关键物种;真菌组对宿主的免疫应答作用也对某些疾病的发生发展有显著影响。本文综述了人体不同部位健康与疾病状态下真菌组组成情况以及真菌组与细菌组、宿主免疫的相互作用。     

猖獗龋患者的病因和口腔微生物种类分析：1例报告

目的分析患者口腔全微生物种类,对猖獗龋患者提出细菌学预防与治疗手段。方法抽血查免疫全套和血常规,获取全 菌斑（A）、龋损（Q）、唾液（T）、黏膜（N）样本经原代涂片镜检,并传代分离培养后采用形态学、梅里埃鉴定仪、16S rDNA序列进化 分析鉴定微生物种类;进一步采用Q-PCR分析变异链球菌的含量,DGGE分析微生物组成和结构。结果血液免疫全套基本正 常,但IgE、中性分叶核细胞增高。原代样本涂片发现唾液中有大量极长链的细菌,经培养发现唾液中总菌含量最高,龋损样本 中溶血菌含量最高,变异链球菌在全菌斑中最多。梅里埃和测序鉴定出33株细菌,全菌斑中分离出多种链球菌和韦德纤毛菌、 龋损菌斑中多次分离到变异链球菌、具核梭杆菌和苏黎世链球菌,唾液样本中分离出多种乳杆菌。qPCR发现变异链球菌含量 明显增高;变性梯度凝胶电泳（DGGE）显示该患者细菌多样性明显降低,但丰度明显增强;条带切胶测序检出多种纤毛菌。结 论患者免疫功能基本正常,血液检测呈现感染血象,病因疑与细菌感染有关。可能由于唾液减少导致变异链球菌、多种纤毛菌 等致病微生物过度繁殖、细菌多样性减少而引起生态失衡。     

基于生物信息学分析的WRAP53β靶向联合治疗头颈鳞癌的作用研究

  目的   探讨端粒酶新核心亚单位WD40-encoding RNA antisense to p53（WRAP53β）与头颈鳞癌（squamous cell carcinoma of the head and neck, HNSC）的临床、基因组和免疫浸润特征的关系,寻求HNSC的潜在靶向联合治疗方法。   方法   采用TIMER在线模块预测WRAP53β表达与TCGA队列中头颈肿瘤的临床特征、癌基因或免疫浸润之间的关系,TISCH网站分析其在单细胞水平的表达,通过CARE软件分析靶向WRAP53β的小分子抑制剂。体外实验验证中,合成shWRAP53β序列的重组慢病毒颗粒,构建稳定表达shWRAP53β的口腔鳞癌Cal27细胞（shWRAP53β组）,并设置两个对照组（shNC组:Cal27细胞加入含非特异性对照序列的慢病毒颗粒,Con组:未处理的Cal27细胞）;MTT法检测3组细胞的增殖能力,细胞免疫荧光检测进一步定性检测shWRAP53β组和shNC组细胞中P53蛋白的表达;Western blot检测第18、23、28代shWRAP53β组和shNC组细胞的WRAP53β和DNA损伤蛋白γ-H2AX的表达。最后,收集口腔鳞癌病例样本13例,口腔黏膜炎性病例样本7例,通过免疫组化验证口腔鳞癌临床标本中WRAP53β和γ-H2AX的表达情况。   结果   TIMER分析发现WRAP53β表达在HNSC中较正常组织显著高表达。WRAP53β基因水平与p53通路基因如CCNB1、CCNB2及CDK1呈显著正相关,与HPV阳性的头颈肿瘤炎症因子IFN-γ、IL-23A呈正相关,而与IL-1A、IL-6呈负相关,但与浸润免疫细胞无显著相关。TISCH单细胞测序数据集同样显示该基因在恶性细胞中呈高表达,在免疫细胞中表达水平极低或无表达。CARE评分预测对WRAP53β共抑制效果最强的药物为靶向ATM、CDK1和MDM4的抑制剂。体外细胞实验证实,与对照组相比,shWRAP53β组Cal27细胞的第5天到第7天的增殖能力下降（P<0.05）,P53表达降低。Western blot检测示,与对照组相比,shWRAP53β组WRAP53β的表达水平在第18、23、28代均降低（P<0.05）,γ-H2AX表达仅在第18、28代降低（P<0.05）。临床标本显示口腔鳞癌组织中γ-H2AX的阳性表达检出率高（12/13）,口腔黏膜炎样本未检出WRAP53β阳性表达（0/7）。   结论   WRAP53β在HSNC中呈高表达水平,且与p53通路基因显著相关。ATM、CDK1和MDM4抑制剂可能是WRAP53β的潜在共抑制药物。干扰WRAP53β可能导致DNA损伤降低,从而具有对HNSC的治疗潜力。      

抗铜绿假单胞菌IgY的制备优化及抑菌效果

目的探讨高效价、高纯度且生物活性好的抗铜绿假单胞菌(PA)的特异性鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的制备工艺。方法采用超声破碎、共振裂解、研磨破碎等方法裂解PA,筛选出最佳裂解抗原,然后将裂解抗原或经甲醛灭活的全菌抗原与佐剂充分乳化免疫产蛋母鸡;采用酶联免疫吸附试验检测水稀释后的IgY抗体效价变化;通过硫酸铵盐析,超滤法纯化抗体,并用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝电泳法(SDS-PAGE)和二喹啉甲酸(BCA)法测定抗体纯度和浓度,平板法评价IgY对PA的抑菌效果,并以蒸馏水作为对照;扫描电镜法检测细菌形态变化。结果超声破碎法裂解的PA抗原浓度最高且蛋白条带最为完整;0.5mL的1×109CFU/mL灭活菌初次免疫4周后再次免疫的方案产生的抗体效价最高,可高达1∶25 600;硫酸铵沉淀,超滤纯化后的抗体纯度可达94%,浓度为27.02mg/mL;IgY体外抑菌试验表明,2.7mg的抗体能明显抑制PA生长,与蒸馏水对照组相比,IgY试验组菌落数减少了9/10,并且明显抑制了细菌绿色色素的产生;扫描电镜观察IgY试验组菌体较长、较大且皱缩。结论采用灭活全菌免疫母鸡,经水稀释、硫酸铵沉淀、超滤纯化的制备方法可得到高纯度和高效价的抗PA IgY,所制抗体具有特异性和显著抑菌活性。     

人体真菌组与疾病

真菌组在人体微生物组中所占比例不到1%,但真菌群落在人体健康与疾病状态中扮演着关键角色。近年来随着高通量测序技术的广泛应用,人体不同部位如口腔、肺部、消化道、阴道以及皮肤真菌组的结构和组成被解析,其在人体健康和疾病中的重要地位也被挖掘。同时,人体真菌组对细菌组的组成也有影响,是维持微生物组结构和代谢功能稳定的关键物种;真菌组对宿主的免疫应答作用也对某些疾病的发生发展有显著影响。本文综述了人体不同部位健康与疾病状态下真菌组组成情况以及真菌组与细菌组、宿主免疫的相互作用。