反转录病毒介导靶向瞬时感受器电位M7基因siRNA抑制RBL-2H3细胞的活化

背景：钙离子在肥大细胞活化后的脱颗粒反应起重要作用。瞬时感受器电位M7(transient receptor potential melastatin 7,TRPM7)是肥大细胞重要的候选通道。 目的：构建携带大鼠靶向TRPM7-siRNA的反转录病毒载体并检测其对大鼠RBL-2H3细胞抗原活化的影响。 方法：实验设计3个TRPM7-siRNA序列和1个无关对照序列,克隆到酶切的pSuper-retro-neo-GFP反转录病毒载体,用重组质粒pSuper-retro-neo-GFP-shTRPM7-(1, 2, 3) 采用脂质体Lipofectamine 2000转染RBL-2H3细胞,采用Western blot检测干扰效率。筛选出最有效的pSuper-retro-neo-GFP-siTRMP7与包装质粒共转染293FT细胞生成反转录病毒并感染RBL-2H3细胞,荧光实时定量PCR及Western blot检测TRPM7-siRNA的沉默效果。检测β-氨基已糖苷酶活性探讨RBL-2H3细胞抗原活化程度的改变。 结果与结论：转染后的各组细胞中siTRPM7-3转染组的沉默效率最高(P < 0.05)。pSuper-retro-neo-GFP-siTRMP7-3干扰组的TRPM7基因的mRNA水平和蛋白水平显著下调,致敏后其β-氨基已糖苷酶活性明显降低(P  < 0.05)。结果提示,降低TRPM7基因的表达可抑制RBL-2H3细胞的抗原活化。     

反转录病毒介导靶向瞬时感受器电位M7基因siRNA抑制RBL-2H3细胞的活化

背景：钙离子在肥大细胞活化后的脱颗粒反应起重要作用。瞬时感受器电位M7（transient receptor potential melastatin7,TRPM7）是肥大细胞重要的候选通道。目的：构建携带大鼠靶向TRPM7-siRNA的反转录病毒载体并检测其对大鼠RBL-2H3细胞抗原活化的影响。方法：实验设计3个TRPM7-siRNA序列和1个无关对照序列,克隆到酶切的pSuper-retro-neo-GFP反转录病毒载体,用重组质粒pSuper-retro-neo-GFP-shTRPM7-（1,2,3）采用脂质体Lipofectamine 2000转染RBL-2H3细胞,采用Western blot检测干扰效率。筛选出最有效的pSuper-retro-neo-GFP-siTRMP7与包装质粒共转染293FT细胞生成反转录病毒并感染RBL-2H3细胞,荧光实时定量PCR及Western blot检测TRPM7-siRNA的沉默效果。检测β-氨基已糖苷酶活性探讨RBL-2H3细胞抗原活化程度的改变。结果与结论：转染后的各组细胞中siTRPM7-3转染组的沉默效率最高（P〈0.05）。pSuper-retro-neo-GFP-siTRMP7-3干扰组的TRPM7基因的mRNA水平和蛋白水平显著下调,致敏后其β-氨基已糖苷酶活性明显降低（P〈0.05）。结果提示,降低TRPM7基因的表达可抑制RBL-2H3细胞的抗原活化。     

大鼠RBL-2H3细胞瞬时感受器电位M7通道参与细胞存活及凋亡

背景：瞬时感受器电位M7是肥大细胞上重要的钙离子通道,但其在肥大细胞存活及凋亡过程中的作用仍未明确。目的：观察瞬时感受器电位M7通道对大鼠RBL-2H3细胞存活及凋亡的影响。方法：取对数生长期RBL-2H3细胞,①分别以50,100,200μmol/L瞬时感受器电位通道阻断剂2-APB进行干预,并以0.1%DMSO干预的细胞及正常培养的细胞作对照。②以瞬时感受器电位M7-siRNA反转录病毒载体转染RBL-2H3细胞,并设立空载体组和正常对照组。结果与结论：经过100,200μmol/L的2-APB作用72h后,RBL-2H3细胞数减少,吸光度值降低（P〈0.05）,细胞凋亡增多,早期凋亡率和总凋亡率增加（P〈0.05）;RBL-2H3细胞转染si-瞬时感受器电位M772h后,吸光度值降低（P〈0.05）,细胞凋亡增多,早期凋亡率和总凋亡率增加（P〈0.05）。说明瞬时感受器电位M7通道参与了RBL-2H3细胞存活和凋亡过程。     

复方血栓通胶囊对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠低氧性肺动脉高压的干预作用

目的:了解复方血栓通胶囊对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠低氧性肺动脉高压的干预作用.方法:将实验大鼠随机分为实验组、肝素对照组、空白对照组和正常组各12只,前3组建立COPD大鼠模型,经反复低氧处理形成肺动脉高压,实验组使用复方血栓通胶囊干预,肝素对照组使用低分子肝素治疗,空白对照组仅建立模型,不给予药物干预,正常组为正常饲养大鼠,对比4组大鼠肺动脉压力的差异.结果:实验组大鼠肺动脉压力明显高于正常组(P＜0.001)而低于空白对照组(P=0.026),但稍高于肝素对照组(P=0.039).结论:复方血栓通胶囊可降低COPD模型大鼠因低氧而升高的肺动脉压力.     

大鼠RBL-2H3细胞瞬时感受器电位M7通道参与细胞存活及凋亡

背景:瞬时感受器电位M7是肥大细胞上重要的钙离子通道,但其在肥大细胞存活及凋亡过程中的作用仍未明确。目的:观察瞬时感受器电位M7通道对大鼠RBL-2H3细胞存活及凋亡的影响。方法:取对数生长期RBL-2H3细胞,①分别以50,100,200μmol/L瞬时感受器电位通道阻断剂2-APB进行干预,并以0.1%DMSO干预的细胞及正常培养的细胞作对照。②以瞬时感受器电位M7-siRNA反转录病毒载体转染RBL-2H3细胞,并设立空载体组和正常对照组。结果与结论:经过100,200μmol/L的2-APB作用72h后,RBL-2H3细胞数减少,吸光度值降低(P<0.05),细胞凋亡增多,早期凋亡率和总凋亡率增加(P<0.05);RBL-2H3细胞转染si-瞬时感受器电位M772h后,吸光度值降低(P<0.05),细胞凋亡增多,早期凋亡率和总凋亡率增加(P<0.05)。说明瞬时感受器电位M7通道参与了RBL-2H3细胞存活和凋亡过程。     

镁对哮喘患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞凋亡及Foxp3表达的影响

目的:观察镁对分离培养的健康人和哮喘患者外周血CD4⁺CD25⁺调节性T细胞凋亡及叉头框蛋白3(Foxp3)表达的影响。方法:经磁珠分离法分离出健康人和哮喘患者外周血CD4⁺CD25⁺T细胞,分镁剂干预组(10 mmol/L)及空白组培养72 h后,用流式细胞仪检测CD4⁺CD25⁺T细胞的凋亡率及Foxp3表达情况。结果:(1)健康人外周血CD4⁺CD25⁺T细胞的纯度为77.4％~92.3%,哮喘患者CD4⁺CD25⁺T细胞的纯度为75.2％~93.8％。(2)CD4⁺CD25⁺T细胞占外周血CD4⁺T细胞的比例在健康组为4.12%~7.98%,在哮喘组为4.51%~8.68%,两者没有显著差异(P＞0.05)。(3)镁(10mmol/L)可以诱导健康组及哮喘组外周血CD4⁺CD25⁺T细胞凋亡率增加(P＜0.05),但对Foxp3的表达无影响(P＞0.05)。结论:镁促进CD4⁺CD25⁺T调节细胞凋亡增加可能为其治疗支气管哮喘的作用机制之一。     

成人膈疝18例诊断分析

目的：探讨成人膈疝的临床特点。方法：结合文献对1992年-2012年中山大学孙逸仙纪念医院收治18例成人膈疝的临床表现、影像学特点、诊断、误诊情况及医源性损伤进行分析。结果：14例行胸部x线检查的患者中仅1例提示膈疝,其余均出现类似其他疾病的表现,未能正确诊断。通过特异性体征、上消化道造影和／或胸部CT及MR检查术前提示膈疝诊断17例,均经手术证实诊断。1例以肿块为表现的患者须经手术明确诊断。5例在诊治过程早期出现误诊。1例经皮肺穿刺检查,但未能明确。结论：影像学中位于膈上、膈旁及涉及膈肌的病变应警惕膈疝,钡剂或其替代物检查、胸部CT及MR可为膈疝的及早诊断提供有效的帮助,对疑为膈疝的患者应避免有创性穿刺检查。     

血嗜酸性粒细胞计数与冠状动脉旁路移植手术后肺炎风险（英文）

目的:研究血嗜酸性粒细胞计数与冠状动脉旁路移植手术患者术后肺炎风险的关系。方法:收集2008年~2017年在我院进行冠状动脉旁路移植手术的613例患者资料进行分析,比较不同血嗜酸性粒细胞计数患者术后肺炎发生率及住院死亡率,采用多因素回归分析明确患者术后肺炎的危险因素。结果:研究共纳入582例患者,其中220例患者血嗜酸性粒细胞比例2%(低血嗜酸性粒细胞组),362例患者血嗜酸性粒细胞比例≥2%(高血嗜酸性粒细胞组)。低血嗜酸性粒细胞组术后肺炎发生率(14.1%,31/220)明显高于高血嗜酸性粒细胞组(6.4%,23/362,P=0.002),而2组患者住院死亡率无明显差异。多因素回归分析结果显示低血嗜酸性粒细胞计数(OR=3.521,95%CI:1.213~10.223,P=0.021)、鼻胃管(OR=6.490,95%CI:2.757~15.280,P0.001)和机械通气时间≥24 h(OR=3.496,95%CI:1.156~10.178,P=0.035)为术后发生肺炎的独立危险因素。结论:低血嗜酸性粒细胞计数患者冠状动脉旁路移植手术后发生肺炎的风险升高。     

反转录病毒介导靶向瞬时感受器电位M7基因siRNA抑制RBL-2H3细胞的活化****

背景：钙离子在肥大细胞活化后的脱颗粒反应起重要作用。瞬时感受器电位M7(transient receptor potential melastatin 7,TRPM7)是肥大细胞重要的候选通道。 目的：构建携带大鼠靶向TRPM7-siRNA的反转录病毒载体并检测其对大鼠RBL-2H3细胞抗原活化的影响。 方法：实验设计3个TRPM7-siRNA序列和1个无关对照序列,克隆到酶切的pSuper-retro-neo-GFP反转录病毒载体,用重组质粒pSuper-retro-neo-GFP-shTRPM7-(1, 2, 3) 采用脂质体Lipofectamine 2000转染RBL-2H3细胞,采用Western blot检测干扰效率。筛选出最有效的pSuper-retro-neo-GFP-siTRMP7与包装质粒共转染293FT细胞生成反转录病毒并感染RBL-2H3细胞,荧光实时定量PCR及Western blot检测TRPM7-siRNA的沉默效果。检测β-氨基已糖苷酶活性探讨RBL-2H3细胞抗原活化程度的改变。 结果与结论：转染后的各组细胞中siTRPM7-3转染组的沉默效率最高(P < 0.05)。pSuper-retro-neo-GFP-siTRMP7-3干扰组的TRPM7基因的mRNA水平和蛋白水平显著下调,致敏后其β-氨基已糖苷酶活性明显降低(P < 0.05)。结果提示,降低TRPM7基因的表达可抑制RBL-2H3细胞的抗原活化。