自身免疫调节因子在小鼠胚胎干细胞向胸腺上皮祖细胞分化中的表达

文题释义：自身免疫调节因子：基因分析显示由于单基因突变引起一种自身免疫病,此基因则被命名为自身免疫调节因子即AIRE基因。AIRE基因的突变或者缺失会造成胸腺内自身组织特异性抗原转录缺失,影响阴性选择,从而致使自身反应性T细胞逃逸外周,引起自身免疫反应。AIRE基因一直是免疫学相关研究中的热点。胸腺上皮细胞：胸腺上皮细胞分为髓质胸腺上皮细胞和皮质胸腺上皮细胞,二者均来源于胸腺上皮祖细胞,据研究报道髓质胸腺上皮细胞表达的AIRE基因调控着胸腺内的阴性选择,但是由于胸腺上皮祖细胞和胸腺上皮细胞不易分离且数量少,其应用和研究一直受限。该实验在体外将胚胎干细胞分化为胸腺上皮祖细胞,可以为相关研究提供细胞来源。  摘要背景：自身免疫性疾病主要是由于胸腺内自身组织特异性抗原持续表达缺失而引起强烈免疫应答的一类疾病,而胸腺功能减退和胸腺内组织特异性抗原的不稳定表达会限制治疗效果。胸腺组织主要由胸腺上皮细胞组成,但胸腺内成熟胸腺上皮细胞和胸腺上皮祖细胞有限的数量来源极大限制了相关研究。目的：研究小鼠胚胎干细胞向胸腺上皮祖细胞分化过程中自身免疫调节因子的表达变化。方法：采用两步分化方法定向诱导小鼠胚胎干细胞分化为内胚层再分化为胸腺上皮祖细胞,分别收集定向诱导分化第0,3,13天细胞,采用细胞免疫荧光、流式细胞术、Western blot、Real-Time PCR 检测相关基因及蛋白的表达变化。结果与结论：①诱导分化第0天,免疫荧光检测OCT4、SSEA1表达阳性;诱导分化第3天,免疫荧光检测SOX17、FoxA2呈双阳性表达;诱导分化第13天,流式细胞术检测EpCAM1、K5、K8表达阳性;②Real-time PCR检测小鼠胚胎干细胞定向分化过程中PAX1、PAX9、FOXN1、PLET1基因表达逐渐增高;③Real-time PCR检测分化第0,3,13天AIRE基因表达升高,INS2、GAD67基因表达也升高;④Western blot检测分化第0,3,13天AIRE蛋白表达降低,胰岛素蛋白、GAD67蛋白均无表达;⑤结果表明,小鼠胚胎干细胞成功分化为胸腺上皮祖细胞,且分化而来的胸腺上皮祖细胞中AIRE基因表达很高,促进了INS2、GAD67基因的表达,为细胞移植治疗自身免疫性疾病提供评价依据。ORCID: 0000-0001-5253-3085(胡蓉) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

牛蒡子苷元对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠炎症性肠病的治疗作用及机制

目的：探讨牛蒡子苷元对炎症性肠病（IBD）的治疗作用及其作用机制。方法：通过脂多糖（LPS）刺激人肠道细胞Caco-2和葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导小鼠在体外和体内建立IBD模型。将24只C57BL/6小鼠随机分为4组：空白对照组（Control）、模型组（Model）、牛蒡子苷元低剂量组（10 mg/kg牛蒡子苷元）和高剂量治疗组（40 mg/kg牛蒡子苷元）。采用ELISA检测Caco-2细胞、小鼠结肠组织炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6、氧化和抗氧化应激标志物MDA、SOD水平。通过Western blot检测Caco-2细胞和小鼠结肠组织中NF-κB p65蛋白磷酸化水平和ZO-1表达。给药第9天处死小鼠,通过HE染色研究结肠组织的组织病理学。结果：体外实验显示牛蒡子苷元显著抑制LPS诱导的炎症因子释放,降低氧化应激水平。Western blot结果显示,牛蒡子苷元降低了NF-κB p65蛋白的磷酸化水平和ZO-1蛋白表达。体内实验显示：与模型组比较,牛蒡子苷元降低了DSS诱导的结肠组织炎症因子和氧化应激水平。此外,牛蒡子苷元通过降低NF-κB p65磷酸化水平阻断NF-...