一对高亲和力抗人肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体的制备及鉴定

目的 获取抗人肌钙蛋白Ⅰ（cTnI）的单克隆抗体（McAb）.方法 以人cTnI作为抗原,免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术制备了抗人cTnI高亲和力、高特异性单克隆抗体.随后采用间接ELISA法测定抗血清效价,用protein G亲和纯化法纯化抗体,抗原竞争ELISA法鉴定抗体亲和力,SDS-PAGE法鉴定纯度,Western blotting鉴定抗cTnI单克隆抗体的特异性,竞争ELISA法分析抗原结合位点.结果 筛选出9株稳定分泌抗cTnI的单抗杂交瘤细胞株,其中A3、A9两株免疫球蛋白亚类均为IgG2a,分泌的抗体纯度高,与CK-MB、cTnT无交叉反应,效价均为：1：1024000,亲和力分别为4.21×10^8mol/L、1.07×10^8mol/L,抗原结合位点不同.结论 成功制备出了一对高亲和力、高特异性抗人cTnI单克隆抗体.     

重组人心肌肌钙蛋白I纯化方法的对比

目的：对比两种重组人心肌肌钙蛋白 I（rhcTnI）纯化方法,获取稳定的 rhcTnI,促进心肌肌钙蛋白（cTnI）诊断标准化的研究。方法超声破碎工程菌获取 rhcTnI 包涵体,经2％ Tritonx-100,2 mol/L 脲洗涤后溶解在8 mol/L 脲中,分别经 CM-FF 柱上复性和稀释复性纯化 rhcTnI,对比两种方法纯化 rhcTnI 的获得率及其产物在4、-20、-80℃及冻干条件下的稳定性,确立高效获取稳定的 cTnI 的纯化方法。结果0．1 g 湿重包涵体经 CM-FF 柱上复性和稀释复性的获得率分别为26．8％和18．9％。4、-20、-80℃及冻干条件下,CM-FF 下柱上复性获得的 rhcTnI 稳定,并且柱上复性纯化周期短,效率高。结论 CM-FF 柱上复性要比稀释复性纯化 rhcTnI 高效、稳定。     

β_2-微球蛋白血清质控物的制备及评价

目的制备β_2-微球蛋白(β_2-MG)质控血清并对其进行质量评价。方法收集病人混合血清样本制备β_2-MG质控物,并依据《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》和ISO Guide 35标准对其均匀性及稳定性进行评价。结果均匀性检验结果显示制备的2个浓度水平质控物样品内和样品间均匀性差异无统计学意义(F=0.699,2.091,均P0.05)。在室温条件下保存至少稳定5天(t=-1.76,-2.64,均P0.05);4℃储存条件下至少稳定28天(t=-1.86,-2.44,均P0.05);-20℃储存条件下至少稳定4个月(t=0.26,-2.68,均P0.05);-80℃储存条件下至少稳定1年(t=-0.96,0.01,均P0.05)。结论自制的β_2-微球蛋白质控血清制备方便,其均匀性、稳定性符合标准要求。