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目的:克隆MAGE-A9基因并对其进行真核表达及鉴定.方法:通过逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)从原发性肝癌的细胞中扩增MACE-A9基因片段,将该片段克隆在真核表达载体pEGFP-C3中,转染NIH3T3细胞,经G418筛选,构建稳定表达细胞系,并用荧光显微镜和Western blot对其进行鉴定.结果:经RT-PCR扩增出945 bp基因片段,经测序分析并与GenBank的DNA序列比对分析后,在NIH3T3细胞中表达.G418筛选后,细胞荧光信号较强,Western blot检测,细胞中的融合蛋白能够与抗MACE-A9的多抗结合.结论:成功地扩增了肝细胞肝癌中的MAGE-A9基因全长cDNA并进行真核表达与鉴定. 相似文献
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低氧对人肺腺癌A549细胞迁移和黏附的影响 总被引：4，自引：0，他引：4
目的：探讨低氧对人肺腺癌A549细胞迁移以及与血管内皮细胞黏附的影响。方法：细胞划痕实验和Transwell实验检测低氧对A549细胞迁移和浸润的影响；细胞黏附实验检测低氧对A549细胞与血管内皮细胞黏附的影响；免疫荧光法观察低氧对A549细胞中E-cadherin、β-catenin、纤维状肌动蛋白（F-actin）分布的影响；荧光素酶报告基因检测低氧对A549细胞中依赖于缺氧诱导因子-1（hypoxia-inducible factor-1，HIF-1）的转录活性的影响。结果：低氧可以促进A549细胞的迁移、浸润和与血管内皮细胞的黏附，影响A549细胞中E-cadherin和β-catenin的分布及F-actin细胞骨架的重排，上调A549细胞中依赖于HIF-1的报告基因的表达。结论：低氧促进A549细胞的迁移、浸润和与血管内皮细胞的黏附可能是通过调控A549细胞中依赖于HIF-1基因的表达，进而影响细胞中E-cadherin和β-catenin分布和F-actin细胞骨架的重排。 相似文献
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目的研究SUMO-1在低氧激活的HIF-1/VEGF信号通路中作用。方法构建稳定表达SUMO-1的细胞系,采用荧光显微镜观察SUMO-1的细胞内定位,利用Western blot检测在低氧培养细胞中SUMO-1和HIF-1α的表达;利用荧光素酶报告基因实验检测SUMO-1对依赖于HIF-1的报告基因表达的影响。结果 SUMO-1主要分布在细胞核中,低氧可以上调SUMO-1的表达,SUMO-1可以上调HIF-1α的表达,促进依赖于HIF-1的荧光素酶报告基因的表达。结论低氧可能通过上调细胞中SUMO-1的表达,进而稳定HIF-1α或者上调HIF-1α的表达,增强HIF-1的转录活性。 相似文献
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目的研究SUMO-1在低氧激活的HIF-1／VEGF信号通路中作用。方法构建稳定表达SUMO-1的细胞系，采用荧光显微镜观察SUMO-1的细胞内定位，利用Westerm blot检测在低氧培养细胞中SUMO-1和HIF-1α的表达；利用荧光素酶报告基因实验检测SUMO-1对依赖于HIF-1的报告基因表达的影响。结果SUMO-1主要分布在细胞核中，低氧可以上调SUMO-1的表达，SUMO-1可以上调HIF-1α的表达，促进依赖于HIF-1的荧光素酶报告基因的表达。结论低氧可能通过上调细胞中SUMO-1的表达，进而稳定HIF-1α或者上调HIF-1α的表达，增强HIF-1的转录活性。 相似文献
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目的研究针对Survivin的腺病毒介导的siRNA对小鼠黑色素瘤生长和转移的影响。方法构建表达小鼠Survivin序列特异性siRNA复制缺陷型重组腺病毒（AdH1-siRNA—Survivin）,利用Western blot方法检测感染AdH1—siRNA—Survivin的B16BL6细胞中Svrvivin蛋白的表达;采刚皮下注射法建立小鼠黑色素瘤生长模型,采用瘤内或周同多点注射相应的重组腺病毒,每周1次,每次2×10^9FPU,共3次。定期测量各组肿瘤体积,应用免疫组化法检测肿瘤微血管密度（MVD）;采刖尾静脉注射感染重组腺病毒的B16BL6细胞建立小鼠肿瘤转移模型,计数并比较各组小鼠肺表面的黑色转移结节数。、结果AdH1-siRNA—Survivin可以显著下凋B16BL6细胞Survivin蛋白的表达;与空白对照组和空载病毒组（AdH1-Empty）相比,AdH1-siRNA—Smwivin注射组显著抑制小鼠肿瘤的生长,降低肿瘤的MVD数（P〈0．01）;感染AdH1-siRNA—Survivin的B16BL6细胞小鼠的肺转移灶数目也显著降低（P〈0．01）。结论重组腺病毒介导的针对Survivin的siRNA技术有效地下调细胞中Survivin的表达,能减少肿瘤内微血管生成、抑制肿瘤生长和转移。 相似文献
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