减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasdC78-1(pYA3493)宿主-载体平衡致死系统的构建及其生物学特性研究

目的:开发应用于猪的稳定携带异源基因的口服活疫苗载体。方法:本研究在减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcya C78-1的基础上,运用自杀性质粒pREasd介导的细菌同源重组技术,构建缺失株ΔcrpΔcyaΔasd C78-1,再将携带asd基因的互补质粒p YA3493电转至上述菌株,构建ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)宿主-载体平衡致死系统,并进一步研究其生物学特性。结果:PCR及测序结果共同表明ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)构建成功。生物学特性检测结果表明ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)的血清型与亲本株ΔcrpΔcya C78-1和疫苗株C500相同,并能够稳定遗传缺失型asd基因片段;其生长速度略慢于ΔcrpΔcya C78-1,且二者均明显慢于疫苗株C500;其生化特性结果也与ΔcrpΔcya C78-1基本相同。小鼠口服攻毒试验表明ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)的毒力与ΔcrpΔcya C78-1基本相当,但其半数致死量约为疫苗株C500的412倍。结论:上述结果表明,减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)有潜力作为高效表达外源基因的口服活疫苗载体。     

锌对动物体内镉毒性的影响

锌对动物体内镉毒性的影响杨自军，程相朝，孙鲜明，宋文成洛阳农业高等专科学校（洛阳４７１００３）ＡｂｓｔｒａｃｔＳｕｐｐｌｅｍｅｎｔＺｉｎｃａｎｄＣａｄｍｉｕｍｔｏＷａｔｅｒｏｆｗｈｉｔｅｍｏｕｓｅ．Ｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄ...     

生物技术减毒沙门氏菌介导apo-t-PA-GFP融合基因在鸡体内表达和在卵黄中沉积的研究

 目的 探讨以减毒沙门氏菌为载体携带目的基因在家禽体内表达,并实现表达产物在卵黄中定向沉积的可行性。方法 将人t-PA基因与鸡VLDLy组装前体apo基因融合,构建pApo-tPA-GFP表达质粒,电转化至减毒鼠伤寒沙门氏菌△crp SL1344中,阳性重组菌静脉注射高产蛋鸡,收集不同时期鸡蛋,涂片荧光镜检和ELISA检测表达产物在卵黄中沉积情况和表达水平,平板溶圈法检测卵黄中表达产物的活性。结果 注射表达质粒第8天开始卵黄中有荧光颗粒出现,第21天表达量最高,为10.4 μg·mL-1,活性相当于50.2 μg·mL-1标准品t-PA。结论 研究表明,减毒沙门氏菌能够介导apo-t-PA-GFP融合基因在鸡体内表达,且apo载脂蛋白能够引导t-PA透过卵黄膜实现在卵黄中沉积,这一途径简捷、方便,为外源基因在动物体内的表达研究提供了理论和技术基础。     

人组织型纤溶酶原激活剂cDNA在鸡体内表达及其生物学活性检测

 目的探讨人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)基因cDNA在鸡体内表达和在卵黄中的积淀规律,检测卵黄中t-PA的含量和生物学活性。方法将含人t-PA基因cDNA的真核表达质粒pcDNA₃-t-PA注射于鸡的骨骼肌,收集不同时间的鸡蛋,West-ern blotting检测卵黄中t-PA表达状况,ELISA检测卵黄中t-PA的含量,琼脂糖平板溶圈法检测活性。结果注射表达质粒后1周,卵黄中即有t-PA积淀,第2～3周达到表达高峰,表达量可达6.1mg·L^-1;所表达的t-PA具有激活组织纤溶酶的活性,注射后第2～3周,每1mL卵黄中t-PA的活性相当于37-45.8μg标准t-PA。结论t-PA基因能够在鸡骨骼肌细胞中表达并在卵黄中积淀,这一途径有望成为药物蛋白基因在鸡体内大量表达生产的优选方式。     

组学技术在旋毛虫研究中的应用进展北大核心CSCD

旋毛虫是一种典型的食源性人兽共患寄生线虫,呈全球分布且寄生无宿主特异性,给畜牧业养殖带来重大经济损失,且严重威胁食品安全。近年来,组学技术的应用为解析旋毛虫致病机制提供了有效的手段。本文主要综述了基因组学、转录组学、蛋白质组学等技术在旋毛虫研究中的应用及研究进展,以期为旋毛虫的生长发育、感染与宿主免疫等研究提供新思路,同时也为其他同类寄生虫研究提供参考。     

DNA疫苗的主要意义与特点

目的了解DNA疫苗的主要意义与各种特性。方法参考国内外相关文献,对DNA疫苗的意义、各种特点及目前存在的问题进行综述。结果DNA疫苗有利于多价或多联疫苗的研制、相对一、二代疫苗更加安全稳定、可同时诱导广泛的体液免疫和细胞免疫应答及不受母源抗体的影响,可产生很好的交叉保护反应等。结论DNA疫苗作为第三代疫苗在免疫预防方面将起重要作用,并且有许多优点。     

鼠伤寒沙门菌SL1344 株cya 基因缺失株生物学特性的检测

目的:探索鼠伤寒沙门菌cya(adenylate cyclase,cya)基因的功能及其缺失株减毒的初步机制。方法:对鼠伤寒沙门菌SL1344 株cya 基因缺失株的耐酸碱能力、耐盐性、运动性、生物被膜成分、对上皮细胞黏附、侵袭以及细胞毒性等生物学特性进行检测。结果:cya 缺失株的耐酸碱性、耐盐性以及运动能力较亲本菌株有明显降低;生物被膜成分测定结果显示cya 缺失株不表达纤维素和菌毛;同时与亲本菌株相比cya 缺失株对上皮细胞的黏附和侵袭能力发生了显著的降低,且对细胞毒性的影响弱于亲本菌株。结论:上述结果表明cya 基因功能与细菌的运动能力、细胞膜的渗透能力、生物被膜的形成及毒力密切相关,从而为鼠伤寒沙门菌cya 基因功能及其缺失株减毒机制的进一步研究提供了理论参考,这也必将有助于研发以减毒鼠伤寒沙门菌为载体的口服疫苗。     

沙门菌减毒基因的研究进展

<正>沙门菌(Salmonella)属于肠道致病菌,是一种重要的食物源性病原体,其具有广泛感染的宿主谱,在公共卫生方面具有重要的意义。用沙门菌作为重组疫苗的载体具有安全、免疫方式类似自然感染等无可比拟的优越性。弱毒的沙门菌活疫苗可以经口服途径表达传递重组的抗原到机体的黏膜表面,从而诱导机体产生保护性的免疫应答来对抗病原体的感染。近年来,出现的许多令人振奋的医学新发现和新技术都是以减毒的沙门菌作为载体来实现的。本文结合     

旋毛虫5'-nucleotidase基因特征与克隆表达

目的 研究旋毛虫5'-nucleotidase基因的序列结构特征及其蛋白克隆表达。方法 从旋毛虫获得5'-nucleotidase基因的序列,利用生物信息学方法进行系统性分析,并进行原核表达。结果 旋毛虫5'-nucleotidase基因大小为1 653 bp,编码550个氨基酸,119个氨基酸残基组成,理论相对分子质量(Mr)为62 kD,分子式为C₂₈₀₀H₄₃₅₈N₇₄₂O₈₀₃S₂₃,等电点为6.13,属于稳定存在的亲水蛋白质。该蛋白含有21个氨基酸组成的信号肽,同时具有跨膜区域,此外还含有3个N-糖基化位点、2个O-糖基化位点、20个磷酸化位点、28个B细胞线性结合位点和13个T细胞结合位点。二级结构中,α-螺旋占43.27%(238个),伸展链占22.73%(125个),β-折叠占7.82%(43个),无规则卷曲占26.18%(144个)。SDS-PAGE显示,5'-nucleotidase基因在原核表达系统中呈可溶性形式表达,重组蛋白大小约为74 kD。结论 成功克隆了旋毛虫5'-nucleotidase基因,对其进行序列分析和原核表达,为进一步探究5'-nucleotidase蛋白在旋毛虫感染过程中的作用奠定基础。     

NDV F基因DNA疫苗对新城疫病毒灭活油乳苗的免疫协同作用

目的：为进一步探讨控制新城疫发生和流行的新途径。方法：利用所构建的F基因pcDNA3真核表达质粒（DNA疫苗）和新研制的地方流行株灭活油乳苗，观察了新城疫病毒F基因DNA疫苗对地方分离株灭活油乳苗的免疫协同作用。结果：在7日龄时应用灭活油乳苗和DNA疫苗联合免疫的鸡群，在14～57日龄整个观察期内，不但其胸腺T淋巴细胞对ConA、法氏囊B淋巴细胞对PMA的反应均明显强于单纯油乳苗免疫组（其中除在接种后第7天时两组鸡的B淋巴细胞增殖OD570值差异不显著外，其余各检测时间两组间均表现为差异显著（P〈0．05）或极显著（P〈0．01），特别是T淋巴细胞增殖情况在接种第14天后均表现为差异极显著（P〈0．01））；而且HI抗体效价水平也持续性高于单纯油乳苗免疫鸡群，并在免疫接种后35～49天时差异显著（P〈0．05）。在免疫接种后第49天时进行的攻毒保护试验中，联合免疫组的保护率为100％，而单纯油乳苗免疫组鸡在观察期内则有2只发病，保护率为86．7％，且有1只死亡。结论：试验所用F基因DNA疫苗和灭活油乳苗联合免疫可显著提高机体的体液免疫和细胞免疫水平，产生较好的免疫协同作用，从而使机体对NDV的综合免疫保护能力得到进一步的提高。