应用Power Builder进行人类精子库信息系统的开发

随着辅助生殖技术的开展和人类精子库的建立，应用供精人工授精治疗男性不育尤其是无精子症的需求增多，各精子库的精源更是供不应求。面对日趋繁琐的供精者和受精者信息，人类精子库信息系统在精子库的管理中也起着越来越重要的地位。Power Builder是目前公认的最优秀的数据库前端开发工具之一，具有开发速度快、成本低、质量高、功能强等特点。本文介绍利用Power Builder 9．0软件进行人类精子库信息系统的开发。     

鹿藿根4种提取物抗雄性小鼠生育作用比较

目的:比较4种鹿藿根提取物(乙醇提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物及水溶物)的抗生育作用。方法:60只雄性昆明种小鼠分为生理盐水对照组、雷公藤多苷对照组、乙醇提取物组、乙酸乙酯提取物组、正丁醇提取物组及水溶物组,每组10只。各组药物浓度均为1%,雷公藤多苷为0.1%水溶液。每次0.1ml/10g,灌胃,1次/d,连续给药,共11周。在用药10周后,一对一雌雄合笼交配1周。分笼10d后处死雌鼠,观察妊娠率、活胎数、死胎数。11周后处死雄性小鼠观察附睾精子、附睾及睾丸病理变化情况及血清睾酮含量测定。结果:连续用药11周,与生理盐水对照组相比,实验组小鼠妊娠率下降,其中水溶物组最为明显(P<0.05)。雷公藤多苷对照组和水溶组精子明显减少(P<0.05)。组织学观察鹿藿根提取物对精原细胞、初级精母细胞影响不显著。各提取物组血清睾酮差异无显著性(P>0.05)。生理盐水对照组、雷公藤多苷对照组、乙酸乙酯提取物组、正丁醇提取物组、乙醇提取物组及水溶物组的抗精子发生效应积分分别0、(5.3±1.5)、(2.6±1.7)、(2.9±1.2)、(2.2±0.9)、(2.1±1.0)分。结论:4种鹿藿根提取物均有抗生育作用,但水溶物作用更强且对睾丸组织及睾丸生精能力影响较小。     

杜仲对糖尿病大鼠扑捉行为和阴茎组织神经传导通路的影响

目的:探讨杜仲改善勃起功能的药效和病理学机制。方法:雄性糖尿病(DM)大鼠30只随机分为3组:A组(10只,DM大鼠赋形剂灌胃组)、B组(10只,DM大鼠西地那非灌胃组)、C组(10只,DM大鼠杜仲灌胃组)及10只正常对照组大鼠(赋形剂灌胃,D组);灌胃4周后观察4组大鼠扑捉行为,透射电镜检查阴茎组织有髓神经纤维超微特征;用免疫组化二步法显示阴茎组织中神经元型一氧化氮合酶(nNOS)的表达。结果:与A组比较,C组大鼠扑捉次数显著增多(P<0.05),阴茎组织中nNOS表达显著增强(P<0.001)。透射电镜显示:A组大鼠阴茎组织有髓神经纤维排布失序,部分变性、板层分离形成透明空泡或网络状,C组大鼠有髓神经纤维排列规整,板层结构清晰。结论:杜仲可通过减轻有髓神经的损伤、增强阴茎组织中nNOS表达改善ED。     

用SYBR Green I实时逆转录-聚合酶链反应定量检测人、小鼠精子中CatSper1 mRNA

目的:建立并优化SYBR GreenI实时RT-PCR体系,定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。方法:用TRIzol分别提取人、小鼠成熟精子中的总RNA,逆转录后用SYBR GreenI实时PCR定量检测CatSper1 mRNA。SYBR GreenI实时PCR采用普通PCR试剂,加入SYBR GreenI染料,优化退火温度、Mg2+浓度及上、下游引物比例,并在PCR循环时采用四步法以消除引物二聚体的影响。优化完成后用不同浓度的精子cDNA为模板做标准曲线,以检测SYBR GreenI实时PCR的扩增效率。结果:定量检测CatSper1 mRNA的SYBR GreenI实时PCR体系适宜退火温度、Mg2+浓度及上、下游引物比例分别为63℃、3.0mmol/L和1∶1,四步法中采集荧光的温度为88℃。优化后用人和小鼠精子cDNA为模板做标准曲线分别为Y=-3.402log(X)+25.99和Y=-3.409log(X)+24.09,扩增效率分别为96.8%和96.5%,可定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。结论:用普通的逆转录及PCR系统和试剂,建立了一种方便、廉价、可靠的SYBR GreenI实时荧光定量RT-PCR系统,可用于人、小鼠精子中CatSper1 mRNA定量检测。     

精子微生物动静态分析技术的新进展

本文简单介绍了荧光染色精子新技术在CASA系统中的地位、意义和它的特点，以及它在操作功能上的独到之处。     

间充质干细胞的生物学特性及在男性不育中的应用

间充质干细胞(MSCs),是一种具有自我更新能力和多向分化潜能的成体干细胞,是组织工程中的"种子细胞"。MSCs的研究,包括最初的分化潜能和近几年热门的旁分泌功能,都有了相当的进展,而且在多个领域也开展了临床上的应用。在男性不育领域内,MSCs研究目前仍在动物实验阶段中摸索,但随着人们对MSCs潜能的认识加深,基于MSCs的治疗将会是一种新颖而有效的方法。     

甲基化DNA免疫沉淀-荧光实时定量PCR检测人精浆游离DNA睾丸和附睾特异性甲基化启动子

目的:建立检测精浆游离DNA(cfsDNA)启动子甲基化水平的甲基化DNA免疫沉淀-荧光实时定量PCR(MeDIP-qPCR)方法。方法:提取精液参数正常(6例)和输精管结扎(6例)男性的cfsDNA,将两组不同个体的cfsDNA分别进行混合,超声处理后形成DNA片段,通过MeDIP分离甲基化DNA片段,然后用qPCR方法检测启动子甲基化水平。结果:精液参数正常组的PRAME、PEG10、MORC1、GML、HOXA5、DNMT3L、SNURF、MSH4、DAZ1和CLPB启动子甲基化水平分别为14.93%、2.64%、0.69%、2.66%、17.50%、21.10%、5.98%、2.28%、13.50%和3.86%,明显低于输精管结扎组的121.25%、73.62%、16.25%、42.90%、76.74%、112.40%、59.79%、25.85%、91.90%和64.53%。其中,PRAME、MORC1、GML、HOXA5、DNMT3L、SNURF、MSH4和DAZ1等8个启动子MeDIP-qPCR的检测结果与启动子甲基化芯片结果一致。结论:通过MeDIP-qPCR方法可以定量检测到cfsDNA中的特异性启动子甲基化,为确定cfsDNA中睾丸和附睾特异性甲基化启动子提供了有效途径。     

Attractin mRNA和Attractin蛋白在小鼠睾丸发育过程中的表达变化

目的:通过定量检测和比较Attractin(Atrn)mRNA和Atrn蛋白在小鼠睾丸发育过程中的动态变化,为进一步研究Atrn在睾丸的生理作用提供实验依据。方法:用相对定量法检测Atrn mRNA在生后1、5、10、15、21、28、35、42、56和120天龄小鼠睾丸发育过程中的表达变化,并用Western blot方法检测各天龄小鼠睾丸Atrn蛋白表达。结果:Atrn mRNA和Atrn蛋白在小鼠睾丸发育过程中的表达变化趋势相似,在生后第1天两者均有表达,但是处于相对较低水平,此后是一个逐渐增高的过程,在28天出现较明显上调。在这之后,两者表达变化出现差异。Atrn mRNA在生后28~35天表达最丰富,随后稳定于这一水平,Atrn蛋白表达则是继续增加直至成年。结论:Atrn参与精子发生的启动、精原干细胞的增殖分化、精母细胞的减数分裂和精子形成等过程,并有助于Leydig细胞进一步成熟。     

多囊卵巢综合征的遗传学病因研究进展

<正>多囊卵巢综合征(PCOS)是育龄妇女常见的一种内分泌失调和排卵障碍性疾病,是排卵障碍性不孕的主要原因。临床表现包括月经稀发、闭经、高雄激素血症、无排卵、肥胖、多毛等[1~5],有文献报道女性多毛症患者中有超过80%被诊断患有PCOS[6]。且随年龄的增长多伴有高脂血症、胰岛素抵抗及2型糖尿病等代谢异常[7,8],被认为是代谢综合征的一种。Chereau在1844年首先描述了这种卵巢的形态学改变[9]。至1935年,Stein以及Leventhal     

帕罗西汀与联用丁螺环酮对抑郁症患者性功能康复的对比研究

目的:观察并探讨帕罗西汀联合丁螺环酮对抑郁症患者性功能的变化情况。方法:选取2015年6月至2016年6月于我院进行治疗的100例抑郁症男性患者为研究对象,将其随机分为治疗组和对照组,每组各50例,对照组采用帕罗西汀治疗(帕罗西汀20mg/d),治疗组帕罗西汀与丁螺环酮联合用药(帕罗西汀20mg/d,丁螺环酮30mg/d),疗程2个月,治疗前后以汉密顿抑郁量表(HAMD)和亚利桑那性经验量表(ASEX)评价疗效,并且比较治疗前后孕酮(PROG)、雌二醇(E2)、睾酮(T)、黄体生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)、催乳素(PRL)水平的变化情况,并对尿常规,肝、肾功能,心电图及血糖检测,随时记录不良反应,将两组患者的临床效果进行统计及分析。结果:治疗组的临床疗效和性功能改善情况均优于对照组,两者之间具有显著性差异(P0.05);且两组均没有严重的不良反应发生。结论:帕罗西汀联合丁螺环酮治疗抑郁症患者性功能障碍疗效显著,且不良反应较小,值得临床推广应用。