Vav1在吲哚胺2,3双加氧酶抑制T细胞中的作用初探

目的:探讨吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)抑制T细胞中信号传导分子Vav1的分子机制.方法:应用稳定表达IDO的CHO细胞株,与纯化的外周血T细胞共孵育,检测IDO抑制T细胞增殖,诱导凋亡的情况,通过semi-quantitative RT-PCR检测T细胞中Vav1、IL-2 mRNA表达变化;Western blot及免疫沉淀技术检测Vav1蛋白表达及活化情况.结果:IDO可抑制T细胞的增殖.T细胞中Vav1和IL-2 mRNA水平明显下降(P<0.05).而且,IDO还能使Vav1蛋白的表达和磷酸化水平降低.结论:研究证实在肿瘤局部产生于抗原呈递细胞或肿瘤细胞的IDO,可能通过抑制细胞内重要的信号传导蛋白Vav1的表达和磷酸化过程,使肿瘤浸润淋巴细胞的主动免疫受损,有利于肿瘤发生免疫逃逸.     

隔山香药材的薄层色谱鉴别

目的:研究并建立隔山香药材薄层色谱鉴别方法.方法:分别以异芹菜脑、芹菜脑醛为对照品,通过优化供试品溶液制备、展开剂、显色及检视等条件,建立隔山香药材挥发油和水溶性成分的薄层色谱鉴别方法.结果:隔山香药材的挥发油和水溶性成分在优化色谱条件下分离效果均好,斑点清晰.结论:所用方法专属性强,重复性好,可作为隔山香药材的定性鉴别方法.     

岗梅药液大孔吸附树脂精制工艺研究

目的优化岗梅药液大孔吸附树脂精制工艺参数。方法以岗梅总皂苷和ilexoside XXIX保留率为指标,确定树脂种类、最大上样量、洗脱溶媒浓度及洗脱用量,并验证大孔吸附树脂精制工艺。结果岗梅药液采用AB-8型大孔吸附树脂进行精制,最大上样量以岗梅总皂苷计为119.43 mg/g干树脂,以80%乙醇作为洗脱溶媒,洗脱3倍柱体积即可洗脱完全。结论根据确定参数,采用AB-8大孔吸附树脂对岗梅药液进行精制,岗梅总皂苷和ilexoside XXIX保留率可达80%以上,精制物中总皂苷和ilexoside XXIX质量分数分别为87.03%及10.83%,达到了"去粗取精"的目的,该精制工艺合理可行。     

痔消栓的HPLC含量测定

目的:建立痔消栓的HPLC含量测定方法。方法:采用HPLC法,以KromasilC₁₈(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱为固定相,以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0mL·min^-1,柱温23℃,检测波长为203nm。结果:三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁分别在0.368～2.76μg,0.676～5.07μg,0.812～6.09μg范围内线性关系良好,相关系数分别为0.9999,0.9999,0.9998,平均加样回收率分别为98.53%,99.20%,99.35%,RSD分别为2.11%,1.88%,2.38%。结论:样品分离效果好,测定结果准确、可靠,重复性好,可用于痔消栓的质量控制。     

高效液相色谱法测定清热方颗粒中绿原酸的含量

目的 建立复方制剂清热方颗粒中绿原酸的含量测定方法.方法 采用高效液相色谱法采用Kromasil C18色谱柱,乙腈-0.4%磷酸溶液(13.87);检测波长:327nm.结果 绿原酸在0.1224～1.2240μg 范围内线性关系良好,r=1;回收率99.30%,RSD为3.25%.结论 该测定方法简便可行、重复性好,可用于该制剂中的质量控制.     

正交设计优选止嗽方中水提组最佳工艺

目的优选止嗽方中水提组的最佳工艺。方法以牛蒡苷的含量和浸膏得率为综合指标,采用L9（3）^4正交试验对提取工艺进行优选,考察了加水量、煎煮时间及煎煮次数3个因素对牛蒡苷提取量的影响。结果优化后的提取条件为加水煎煮3次,加水量分别为10倍、6倍、6倍量,每次1.5h。结论优选后的提取工艺合理、质量稳定,对应用于大批量生产有指导意义。     

胃癌患者术后化疗联合CIK免疫治疗的临床疗效

目的:评价胃癌患者术后化疗联合细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK)治疗的临床疗效。方法:收集1999年3月至2007年12月在天津医科大学附属肿瘤医院65例胃癌术后化疗联合CIK治疗的患者(化疗联合CIK治疗组)及同期对照130例术后单纯化疗的胃癌患者(单纯化疗组),比较两组的生存率及生存时间;分析受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线,确定化疗周期数与CIK治疗次数的分组点;Kaplan-Meier法绘制两组患者的生存曲线,Log-rank法检测两组患者的生存差异。结果:化疗联合CIK治疗组胃癌患者的3、5年总生存率稍高于单纯化疗组,但差异无统计学意义(60%vs 47%,55%vs 23%,P>0.05)。化疗联合CIK治疗组胃癌患者的3、5年无进展生存率明显高于单纯化疗组(48%vs 31%,47%vs 20%,P<0.05)。化疗联合CIK治疗组患者的中位生存时间(overall survival,OS)为96个月,明显高于单纯化疗组的32个月(P=0.001);化疗联合CIK治疗组患者的中位无病进展时间(progression-free survival,PFS)为36个月,高于单纯化疗组的23个月(P=0.011)。单因素分析发现,TNM分期、化疗周期数和CIK治疗周期数与胃癌患者的OS相关;TNM分期、手术方式和CIK治疗周期数与患者的PFS相关。多因素结果显示,化疗周期数是影响OS的独立危险因素,CIK治疗周期数不仅是影响OS,也是影响PFS的独立危险因素。结论:与术后单纯化疗相比,化疗联合CIK治疗明显延长胃癌患者的OS,而且CIK治疗次数增加,临床疗效会更显著。     

肠道菌丛与炎症性肠病

炎症性肠病（inflammatory bowel disease，IBD）包括溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）和克罗恩病（Crohn＇s disease，CD）。病因至今不明，可能的病因包括由基因决定的宿主易感性、黏膜免疫和肠道微生态环境三的相互作用。目前研究较多的是肠道菌群与IBD发病的关系。肠道微生物的有害作用可见于一些IBD的动物模型。在这些动物模型中，动物在无菌的环境中不发生肠道炎症。Harper等人曾报道如果把已行回肠造口术的CD患的小肠流出物注入结肠，则诱导结肠炎症，然而将无菌的小肠超滤液注入结肠则不发生炎症。并不是所有的肠道细菌均可导致肠道炎症，一些细菌具有保护作用。这不但决定于它们分泌有毒物质的能力和细胞壁的成分（脂多糖，肽聚糖），也决定于DNA成分（尤其是CpG）。最近的一些研究表明，肠道微生态制剂包括乳酸杆菌、双歧杆菌和酵母菌对实验性结肠炎或人的IBD可以产生阻抑影响。     

肿瘤诱导的髓系来源抑制细胞中IDO表达相关机制研究

目的:建立正常CD33+细胞与肿瘤细胞共培养系统,模拟肿瘤局部髓系来源抑制细胞的诱导过程,观察吲哚胺2,3双加氧酶在MDSCs中表达及其免疫抑制作用,并探讨MDSCs中IDO表达相关机制.方法:免疫磁珠分选健康供者CD33+细胞,体外与乳腺癌细胞系MDA-MB-231共孵育诱导MDSCs,以单独培养CD33+细胞为对照组,培养2天后收获实验组MDSCs及对照组CD33+细胞,流式细胞仪检测细胞表型;实时定量PCR和Western Blotting方法检测IDO和STAT3的表达与活化情况;Annexin V-FITC的方法检测MDSCs对T细胞促凋亡作用,并观察IDO在MDSCs诱导T细胞凋亡中的作用.结果:正常CD33+细胞与MDA-MB-231共孵育2天后,出现一群表型为Lin-CD33+13+CD14-CD15-的MDSCs,体外诱导的MDSCs中IDOmRNA及蛋白表达增加、STAT3蛋白磷酸化增强,经过STAT3磷酸化抑制剂JSI-124预处理后,MDSCs中IDO蛋白表达明显降低并可诱导高百分比T细胞凋亡,经IDO抑制剂1-MT处理后T细胞凋亡显著降低.结论:体外将乳腺癌细胞系与正常CD33+细胞共孵育可以诱导出具有独特表型特征和免疫抑制活性的MDSCs,而STAT3磷酸化导致的IDO表达升高可能是MDSCs抑制T细胞功能的主要机制之一.