中国人共刺激信号抑制配体表达载体的构建及在大肠杆菌DH5α中的表达

构建CTLA－4基因表达载体并在大肠杆菌DH5α中表达CTLA－4蛋白。方法：用PCR方法获得中国人CTLA－4基因第二外显子，构建重组表达质粒pPBCTLA，转化大肠杆菌DH5α，以PCR和RFLP方法筛选阳性克隆，以免疫印迹技术检测表达产物。结果：阳性重组子在DH5α中经温度诱导表达CTLA－4蛋白，分子量与理论值相符（约12kD)，进一步分析表明，CTLA－4蛋白主要以包涵体形式存在。Western-blot结果证实，12k的表达条带可与标准羊抗人CTLA－4ITgG起特异反应。淋巴细胞转化实验结果表明该蛋白具有明显的免疫抑制作用。结论：用基因工程技术获得中国人CTLA－4基因表达蛋白，为进一步研究CTLA－4的生物学功能及研制CTLA－4抗体奠定了基础。     

白介素2基因佐剂协同HSV-2多表位复合DNA疫苗诱导小鼠免疫应答

目的 研究白介素2(IL-2)cDNA协同HSV-2多表位复合DNA疫苗免疫对小鼠体液和细胞免疫应答的影响.方法 利用真核表达质粒pcDNA3.1分别构建HSV-2糖蛋白gD、gB、gC和早期表达蛋白ICP27的多表位复合DNA疫苗HV-pcDNA3.1和IL-2的真核表达质粒IL-2-pcDNA3.1.15只C57/BL6小鼠分为3组,分别接受pcDNA3.1空载体注射、HV-pcDNA3.1单独免疫或HV-pcDNA3.1及IL-2-pcDNA3.1联合免疫.共免疫2次,间隔2周.末次免疫3周后.ELISA法检测小鼠血清HSV-2特异性IgG、IL-2和IFN-γ,淋巴细胞特异性增殖反应和乳酸脱氢酶法检测杀伤性T淋巴细胞(CTL)功能.结果 与HV-pcDNA3.1单独免疫组相比.IL-2-pcDNA3.1的协同免疫可以提高小鼠血清中和IFN-γ表达(1956.19±219.60ng/L,P<0.05),增强淋巴细胞特异性增殖反应(促细胞增殖率为2.75%±0.26%,P<0.05)和CTL活性(47.91%±15.09%,P<0.05).小鼠血清HSV-2特异性IL-2水平在协同免疫组为(1421.16±220.98)ng/L,HV-pcDNA3.1单独免疫组为(1246.84±157.02)ng/L.两组间差异无统计学意义.结论 IL-2cDNA的协同免疫可以显著提高HSV-2多表位复合DNA疫苗诱导的细胞免疫应答水平.     

DNA免疫的基础性研究进展及应用

DNA免疫不仅可以诱导特异性的体液免疫 ,还可诱生特异性的以CTL为代表的细胞免疫应答 ,因此 ,目前对其研究的进展迅速。本文综述了近三年来DNA免疫基础性研究的进展 ,分析了影响DNA免疫的因素 ,提出了增强DNA免疫效应的策略 ,最后概述了DNA免疫在抗病毒感染和在抗肿瘤方面的应用     

信号肽序列修饰的单纯疱疹病毒-2多表位复合DNA疫苗构建

目的:构建经糖蛋白gD信号肽修饰的单纯疱疹病毒2型(HSV-2)糖蛋白gD、gB、gC和早期表达蛋白ICP 27的多表位复合DNA疫苗.方法:国内HSV-2野生株经测序与PCR鉴定后利用PCR技术从其基因组中扩增出HSV-2 ICP27 377-459、gD146-179、gD223-306、gB529-606、gC247-282、gD1-77 6个基因片段,PCR鉴定后按先后顺序,采用多基因片段一步酶切连接法获得HV融合基因片段,经pGEMT载体克隆后定向插入真核表达质粒pcDNA3.1载体中,构建出重组真核表达质粒HV-pcDNA3.1,并对其进行酶切分析及测序鉴定.PCR扩增gD146-179信号肽片段,进一步酶切连接构建重组质粒gDs-HV-his-pcDNA3.1,并对其进行测序鉴定.结果:酶切重组质粒HV-pcDNA3.1,电泳可见两条带,分别为融合基因HV(1.3 kb)和线性质粒pcDNA3.1(5.4 kb).测序结果表明,克隆基因插入方向正确,重组质粒gDs-HV-his-pcDNA3.1与GenBank HSV-2中相关序列同源性达99.9%.结论:成功构建了经糖蛋白gD信号肽修饰的HSV-2多表位复合DNA疫苗.     

原发性肝癌患者血液中XAGE-1b mRNA的表达

XAGE-1是一类通过生物信息学的方法获得的肿瘤一睾丸抗原编码基因,XAGE-1b是其主要的表达剪接体[1].临床研究已获得了较为详细的XAGE-1在肿瘤细胞中的表达谱,发现在肺癌、黑色素瘤、前列腺癌等肿瘤组织中有较高的XAGE-1检出率,并且逐步揭示出:XAGE-1的表达与病理进程和肿瘤亚型间的关联[2-5].     

同种异体反应性淋巴细胞克隆疫苗回输诱导受体特异性免疫耐受的研究

目的：探讨同种异体移植抗原抗原特异性免疫耐受诱导的新途径，以达到心肺移植长期存活的目的。方法：以同种异体反应性淋巴细胞克隆在体外培养条件下大量增殖后，作为自身独特性疫苗，体内注射免疫家兔，以混合淋巴细胞反应来观察免疫前和免疫后对供体淋巴细胞刺激指数（SI）的变化。结果：同种异体反应性自身独特型淋巴细胞疫苗具有显著诱导特异性免疫应答移植现象，SI值显著降低（P＜0．05），而对卡介苗诱导的特异性免疫应答并未因独特型淋巴细胞疫苗的应用而下降，结论：同种异体反应性自身独特型淋巴细胞疫苗有可能成为诱导抗原特异性免疫耐受的一种手段。     

中国人群HLA－DR_4等位基因结构及其与类风湿关节炎相关性研究

中国人群ＨＬＡ－ＤＲ_４等位基因结构及其与类风湿关节炎相关性研究朱乃硕，等。中华医学杂志１９９４，７４（７）：４２８对１３０名正常人及９５例类风湿关节炎（ＲＡ）病人ＨＬＡ－ＤＲ４基因分析结果显示，该基因与ＲＡ易感性显著相关（Ｐ＜０．００５），中国人群?..