荧光双向电泳检测雌雄小鼠肝组织蛋白组学的差异

目的检测雌雄小鼠肝组织蛋白质组表达差异,探讨肝病发生的性别差异机制。方法采用双向荧光差异凝胶电泳(two dimension difference gel electrophoresis,2D-DIGE)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)技术检测C57BL/6J雌雄小鼠肝组织的蛋白质组差异表达谱,分离并鉴定差异表达蛋白,应用Western blot进行验证,并对差异表达蛋白进行生物信息学分析,包括蛋白功能注释、分类分析、京都基因与基因组百科全书通路分析。结果经双向荧光差异凝胶电泳-图像分析得到1767个蛋白点,其中差异倍数≥1.5(P0.05)的蛋白点325个。从中选择78个差异蛋白点进行MALDI-TOF-MS鉴定,得到48种差异性表达的蛋白质。其中,与雌鼠相比,雄鼠肝组织中高表达的蛋白有14种,低表达的蛋白有34种。选取6个差异蛋白点进行Western blot验证,证明了2D-DIGE结果的可靠性。GO分析结果显示,涉及雌雄鼠肝组织中的差异蛋白在细胞组分、分子功能、生物学过程中的分布广泛。KEGG通路分析发现差异蛋白涉及6条信号通路。结论 C57BL/6J雌雄小鼠肝组织的差异性蛋白表达的检测结果为研究性别差异性肝病发生的分子机制提供了基础生物学信息和有益的线索。     

TREM2单克隆抗体的制备及应用检测

目的：制备TREM2特异性单克隆抗体并对其特异性、亲和力及在免疫学检测中的应用进行鉴定,为TREM2的抗体药物研发奠定基础。方法：表达并纯化TREM2胞外段GST融合蛋白,用其作为抗原免疫小鼠,筛选抗血清效价较高的小鼠,经过细胞融合和单克隆筛选,制备TREM2的特异性单克隆抗体。对获得的单克隆抗体的特异性、亲和力及其在免疫学实验中的应用进行检测。结果：获得了29株TREM2单克隆抗体,其中的24株可与TREM2特异性结合;29株单抗与TREM2结合的EC50均在nmol以上;它们可分别在Western blot、免疫沉淀、流式细胞术和免疫荧光中用于对TREM2的特异检测。结论：成功制备并获得了亲和力高、特异性好的抗TREM2单克隆抗体,为TREM2靶点的成药性抗体开发奠定了基础。